土大黄检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种中药材土大黄的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、对照品溶液的制备；步骤2、土大黄供试品溶液的制备；步骤3、将对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图。
【专利说明】土大黄检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于中药材检测领域，特别涉及一种土大黄的检测方法。
【背景技术】
[0002]土大黄为寥科植物巴天酸模Rumex patientia L.的根。巴天酸模Rumexpatientia L.为多年生草本，秋季挖根，洗净，切片，晒干或鲜用。土大黄根及根茎呈圆锥形，全体棕红色至棕灰色，顶端有茎基残余及鳞片状、须毛状纤维；根部有分枝，表面具维纹及横长疤痕；质硬，断面黄色，有棕色形成层环及放入纹。气微，味稍苦。以质硬，断面色黄者为佳。
[0003]土大黄为肾炎清片方中君药，原医院制剂仅从当地收购使用，而对其基原及质控标准并没有明确的规定。据资料载，土大黄民间又叫“牛耳大黄”、“牛西西”、“金不换”、“牛舌头”等，系寥科酸模属多种植物的别称，目前野生无种植，酸模属植物资源丰富，我国产酸模属植物26种、2变种。受生长环境及产地的影响，该属植物的化学成分及形态之间均有一定差异。在止血、治疗疥癣等疗效上，各地酸模属植物有许多相似之处，但命名不统一；同种植物的别名繁多且不同种间还存在别名交叉，文献报道，分布较广且使用频率较高的有11种酸模植物在民间作为土大黄使用，药用时药材基原混乱。
[0004]以土大黄为别称的酸模属植物均未被中国药典收载，部分物种被天津、北京、贵州、安徽等地方标准收载，但这些地方标准大多为上世纪九十年代制定，普遍存在检测手段落后，标准过低，无法控制药材质量的问题。
[0005]土大黄苷(rhaponticin, rhaponitin 或 poniticin)为土大黄中的药效成分，分子式为C21H24O9，化学名为3-羟基-5-[(IE)-2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)乙烯基]苯基-β-D-葡萄糖苷，为二苯乙烯的衍生物，属于芪苷，具有抗菌、改善微循环、降血脂、降血糖、抗肿瘤、抑制过敏反应、调控机体免疫防御系统、抗血栓以及抗氧化等作用，主要分布于大黄属植物、桑树、河红桉等植物中。
[0006]在民间，酸模属数种植物包括巴天酸模均被称为“土大黄”，北京市中药材标准收载了巴天酸模Rumex patientia L.和皱叶酸模Rumex crispus L.的干燥根,并在其标准中要求TLC法检出土大黄苷。
[0007]现有技术目前存在检测方法简单落后，产品质量不易控制的缺点。已经有的检测方法不能有效控制土大黄的质量，从而将影响产品的生产和保证质量。现有土大黄苷的检测方法，灵敏度差，准确性低，很多含有土大黄苷的药材都难以检测出来，另外酸模属数种植物包括巴天酸模中是否含有土大黄苷也不知道，因此是否能够将其用作土大黄不得而知。
[0008]因此迫切需要一种有效的，准确的，灵敏度高的土大黄检测方法，建立更为科学的土大黄质量标准。
【发明内容】
[0009]本发明经过研究，开发出一种中药材土大黄的检测方法，该方法较为完善，操作性强，重现性好，测定偏差小，稳定性好，精密度高。
[0010]本发明提供一种中药材土大黄的检测方法，该方法可以更加准确的把握有关药品的质量，降低用药风险，提高产品质量。
[0011]本发明的方法，包括以下步骤:
[0012]步骤1、对照品溶液的制备；
[0013]步骤2、土大黄供试品溶液的制备；
[0014]步骤3、将对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图；
[0015]其中，色谱条件如下:
[0016]色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇-0.1%磷酸，检测波长为 215~260nm。[0017]根据本发明，供试品溶液制备方法为取药材粉末，加入甲醇或乙醇，提取，得到供试品溶液。
[0018]根据本发明的实施方式之一，土大黄供试品溶液提取采用超声提取。优选的色谱柱为Agilent Zorbox C18色谱柱,体积250mmX4.6mm,粒径5 μ m。其中流动相的线性梯度
洗脱方法如下表:
[0019]
【权利要求】
1.一种土大黄检测方法，其步骤如下: 步骤1、对照品溶液的制备； 步骤2、土大黄供试品溶液的制备； 步骤3、将对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图； 其中，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇-0.1%磷酸，检测波长为 215~260nm。
2.如权利要求1所述检测方法，其中供试品溶液制备方法为取药材粉末，加入甲醇或乙醇，提取，得到所述供试品溶液。
3.如权利要求2所述检测方法，其中所述提取为超声提取。
4.如权利要求3所述检测方法，其中色谱柱为AgilentZorbox C18色谱柱，体积250mmX 4.6mm,粒径 5 μ m。
5.如权利要求3所述检测方法 ，其中流动相的线性梯度洗脱方法如下表:
6.如权利要求3所述检测方法，其中供试品溶液制备方法为:土大黄药材粉末，称取0.5g，加入甲醇25mL，摇匀，浸泡30min，超声提取20min，补足减失的重量，静置，滤过，即得。
7.如权利要求3所述检测方法，其中对照品溶液制备方法为:大黄素对照品加甲醇制成每Iml含大黄素16 μ g的溶液，混匀，即得。
8.如权利要求2所述检测方法，其中所述提取的方法为: (a)加热回流，滤过，得到滤液； (b)挥去所述滤液的溶剂后，加入5-10%盐酸溶液，超声处理后加入三氯甲烷萃取多次，合并三氯甲烷层，得到萃取液； (c)回收所述萃取液的溶剂得到残渣，残渣加甲醇或乙醇溶解，即得所述供试品溶液。
9.如权利要求8所述检测方法，其中所述流动相中甲醇和磷酸的比例为85:15。
10.如权利要求8所述检测方法，其中所述对照品溶液的制备方法为:取大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品，加甲醇或乙醇分别制成每Iml含大黄素、大黄酚各80 μ g，大黄素甲醚40 μ g的溶液；分别取上述三种溶液各2ml，混匀，即得。
11.如权利要求8所述检测方法，其中供试品溶液的制备方法为:(a’)土大黄粉末0.15g，加入甲醇25ml，加热回流I小时，放冷，摇匀，滤过，得到滤液；(b’)量取所述滤液5ml，挥去溶剂，加8%盐酸溶液IOml，超声处理后加三氯甲烷IOml，加热回流I小时，放冷，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷萃取3次，每次IOml，合并三氯甲烷液，得到萃取液； (C’)减压回收所述萃取液的溶剂至干，得到残渣，再加甲醇使其溶解，摇匀，滤过，即得所述供试品溶液。
12.如权利要求8所述检测方法，其中按所述检测方法，以干燥品计算，土大黄药材中含大黄素、大黄酹和大黄素甲醚的总量不得少于0.55%。
13.如权利要求1所述检测方法， 其`中检测波长为220nm或254nm。
【文档编号】G01N30/02GK103529133SQ201210224084
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2012年7月2日 优先权日:2012年7月2日
【发明者】周桂荣, 郭宝林, 刘艳, 张兰兰, 周水平 申请人:天士力制药集团股份有限公司