专利名称：N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测方法
技术领域：
本发明涉及借助于测定物质的化学或物理性质来测试或分析物质的方法，具体的说，是涉及环境分析领域中检测N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物的方法。
背景技术：
N-甲基氨基甲酸酯类农药在农业生产中广泛用于各种作物的杀虫、除草、杀菌，致使环境水体、食物、作物及动物饲料中含有痕量的农药残留物。在新制定的《国家环境保护标准》[HJ478-2009]、《生活饮用水卫生标准》[GB/T5750. 9-2006]、《地表水环境质量标准》[GB3838-2002]等标准中，都没有针对于N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物的分析检测方法。速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威是N-甲基氨基甲酸酯类农药中毒性较大且降解较慢的四种化合物。它们的残留物不仅母体具有较强的生物活性，而且经水解、光解或生物降解后的产物具有的毒性和持久性比母体更强。当通过食物链的富集、放大，被人体吸收时，将抑制乙酰胆碱酯酶的生理活性，导致神经传导受阻，引起神经麻痹甚至死亡，严重威胁人类的健康安全。速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威农药在环境中的残留量很低，且与其它种类的农药残留同时存在，造成痕量此类农药残留检测的重重困难。样品预处理技术是解决该难题的一个重要手段，目前，速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威农药残留物的预处理技术主要是液-液萃取技术、固相萃取技术等。传统的液-液萃取技术操作步骤繁琐，且需消耗大量的试剂。固相萃取技术凭借其溶剂耗用量少、高效快速等特点逐渐取代传统的液-液萃取技术，广泛应用于痕量环境样品的分析检测。但是，传统的固相萃取技术应用于环境中痕量速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的分析时仍然存在灵敏度不足、回收率低等遗憾。所以建立适合于痕量速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威农药残留的固相萃取技术具有非常重要的意义。目前普遍用于分离和检测N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物的方法主要包括气相色谱法、气相-质谱联用法、高效液相-质谱联用法、柱后衍生高效液相色谱荧光检测法等。但是气相色谱法和柱后衍生高效液相色谱荧光检测法都需要对待测物进行衍生，操作繁 琐，且使用的衍生剂一般具有毒性，同时仪器较昂贵；质谱分析法虽然灵敏、快速，但是对仪器要求高，不易推广。
发明内容
本发明要解决的是现有技术中没有针对性分析检测方法的技术问题，提供一种N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测方法，利用固相萃取-超高速液相色谱紫外检测，有效消除环境水体中杂质的干扰，能够同时、快速地检测速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威四种N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物的含量。为了解决上述技术问题，本发明通过以下的技术方案予以实现
一种N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测方法，所述N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物包括速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威，该方法按照如下步骤进行a.依次用甲醇、超纯水浸润和活化固相萃取小柱,备用；b.取待分析水样以l 5mL mirT1速度上样，经固相萃取小柱富集，待水样全部抽完后用超纯水淋洗；
c.在真空下抽气干燥固相萃取小柱；d.用f 7mL洗脱剂以I飞mL mirT1速度洗脱固相萃取小柱，并收集洗脱液；e.在2(T55°C条件下氮气干燥洗脱液后，甲醇定容；f.配制N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物系列混合甲醇标准溶液；g.采用超高速液相色谱紫外检测器分析步骤(f)所配制的N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物系列混合甲醇标准溶液，以其质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威各自的标准曲线回归方程；h.采用超高速液相色谱紫外检测器分析步骤(e)得到的待分析水样；i.根据步骤(h)得到的速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威各自的峰面积，利用步骤(g)所得速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威各自的标准曲线回归方程，分别计算出待分析水样中速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威的质量浓度；其中，步骤(g)和步骤(h)中的超高速液相色谱紫外检测条件如下C18色谱柱，进样体积为5 10 u L，流动相甲醇-超纯水的体积比为40:60^90:10，流动相甲醇-超纯水的流速为0. 5 I. 5mL mirT1，柱温为20 5(TC，紫外检测波长为20(T340nm。所述步骤(a)至步骤(d)中的固相萃取小柱选自乙烯吡咯烷酮-二乙烯苯聚合物小柱(Oasis HLB小柱)、C18小柱或氨基小柱。所述步骤(b)中待分析水样的上样速度为3mL mirT1。所述步骤(d)中的洗脱剂选自甲醇、二氯甲烷或体积为1:1的甲醇/乙腈。所述步骤(d)中的洗脱剂用量为5mL。所述步骤(d)中的洗脱速度为3mL mirT1。所述步骤(g)和步骤(h)中流动相甲醇-超纯水的体积比为70:30。所述步骤(g)和步骤(h)中流动相甲醇-超纯水的流速为0. 5mL mirT1。所述步骤(g)和步骤(h)中的柱温为40°C。所述步骤(g)和步骤(h)中的紫外检测波长为284nm。本发明的有益效果是本发明提供了一种固相萃取与超高速液相色谱紫外分析相结合，检测环境水体中痕量速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威四种N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物的方法。该方法能够在7min内实现速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威四种N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物的同时检测，线性范围为0.01 IOOOmg L-1 ;相关系数为0. 9982、. 9998 ;检出限为
0.049 I. 6u g L-1 ;出峰时间和峰面积的相对标准偏差分别在0. 001% 0. 01%和0. 1% 0. 6%之间；方法回收率为91. 3% 107%，相对标准偏差为I. 529T4. 86%。本发明填补了环境水体中N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测技术的空白，能够通过一次性检测同时得到痕量速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的质量浓度。固相萃取样品预处理技术不仅经济、安全、环保，而且能够有效去除环境水体中杂质对检测的干扰，使灵敏度、回收率得到进一步的增强；同时，超高速液相色谱紫外检测方法不需要加入衍生齐U，检测更加省时、灵敏、简便，并且仪器普及率高，易于推广应用。
具体实施例方式以下实施例可以使本专业技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。以下实施例均使用Agilentl200 RRLC超高速液相色谱仪，配置紫外检测器；Agilent36位固相萃取装置，HSC-24B氮吹仪。实施例I水样预处理依次用5mL甲醇、5mL超纯水浸润和活化C18固相萃取小柱，备用。取待分析水样以ImL ^mirT1速度上样，经C18固相萃取小柱富集，水样全部抽完后用3mL超纯水淋洗，然后在真空下继续抽气干燥30min，用ImL甲醇以ImL mirT1速度洗脱C18固相萃取小柱，并收集洗脱液。在20°C条件下氮气吹干洗脱液后，用甲醇定容至l.OmL，待色谱分析。 N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物标准系列溶液的配制分别称量0. OOlOOg速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威固体样品，用甲醇定容至ImL,配制浓度分别为IOOOmg L-1速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威标准混合使用液，然后逐级稀释成浓度分别为500、250、125、62. 5,31. 25、15. 63,7. 82、I. Omg L-1速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的标准系列混合溶液，经0. 45 y m滤膜过滤后待测。采用超高速液相色谱紫外检测器对标准系列混合溶液进行分析，以速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威各自的峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标绘制标准曲线，分别得到速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威各自的标准曲线回归方程。选取的检测条件为C18色谱柱；进样体积5. 0 L ;流动相甲醇-超纯水体积比40:60 ;流动相甲醇-超纯水流速
0.5mL mirT1 ;柱温 20 °C ;检测波长为 200nm。在相同的条件下检测上述处理过的待分析水样，根据速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威各自的峰面积，对应地利用速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威各自的标准曲线回归方程，分别计算出水样中速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威的质量浓度。速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的分析特征量速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的相关系数0. 9992、. 9996 ;检出限为0. 049 I. 53 u g L-1 ;出峰时间和峰面积的相对标准偏差分别在0. 001% 0. 01%和0. 1% 0. 6%间；方法回收率为92. 7% 103%，相对标准偏差为
1.309T3. 75%。实施例2水样预处理依次用5mL甲醇、5mL超纯水浸润和活化Oasis HLB固相萃取小柱，备用。取待分析水样以ZmLmirT1速度上样，经Oasis HLB固相萃取小柱富集，水样全部抽完后用3mL超纯水淋洗，然后在真空下继续抽气干燥30min，用3mL甲醇/乙腈(V/V)=l/1以2mL mirT1速度洗脱Oasis HLB固相萃取小柱，并收集洗脱液。在30°C条件下氮气吹干洗脱液后，用甲醇定容至I. OmL，待色谱分析。N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物标准系列溶液的配制分别称量0. OOlOOg速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威固体样品，用甲醇定容至ImL,配制浓度分别为IOOOmg L-1速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威标准混合使用液，然后逐级稀释成浓度分别为500、250、125、62. 5,31. 25、15. 63,7. 82、I. Omg L-1速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的标准系列混合溶液，经0. 45 y m滤膜过滤后待测。采用超高速液相色谱紫外检测器对标准系列混合溶液进行分析，以速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威各自的峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标绘制标准曲线，分别得到速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威各自的标准曲线回归方程。选取的检测条件为C18色谱柱；进样体积6. 0 L ;流动相甲醇-超纯水体积比50:50 ;流动相甲醇-超纯水流速
0.8mL mirT1 ;柱温 25 °C ;检测波长为 254nm。在相同的条件下检测上述处理过的待分析水样，根据速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威各自的峰面积，对应地利用速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威各自的标准曲线回归方程，分别计算出水样中速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威的质量浓度。速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的分析特征量速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的相关系数0. 9982、. 9992 ;检出限为0. 058 I. 45 u g L-1 ;出峰时间和峰面积的相对标准 偏差分别在0. 002% 0. 009%和0. 1% 0. 5%间；方法回收率为95. 8% 104%，相对标准偏差为
1.52% 3. 28%o实施例3水样预处理依次用5mL甲醇、5mL超纯水浸润和活化氨基固相萃取小柱,备用。取待分析水样以SmLmirT1速度上样，经氨基固相萃取小柱富集，水样全部抽完后用3mL超纯水淋洗，然后在真空下继续抽气干燥30min,用4mL甲醇/乙腈(V/V)=l/1以3mL mirT1速度洗脱氨基固相萃取小柱，并收集洗脱液。在40°C条件下氮气吹干洗脱液后，用甲醇定容至I. OmL,待色谱分析。N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物标准系列溶液的配制分别称量0. OOlOOg速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威固体样品，用甲醇定容至ImL,配制浓度分别为IOOOmg L-1速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威标准混合使用液，然后逐级稀释成浓度分别为500、250、125、62. 5,31. 25、15. 63,7. 82、I. Omg L-1速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的标准系列混合溶液，经0. 45 y m滤膜过滤后待测。采用超高速液相色谱紫外检测器对标准系列混合溶液进行分析，以速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威各自的峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标绘制标准曲线，分别得到速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威各自的标准曲线回归方程。选取的检测条件为C18色谱柱；进样体积7. 0 L ;流动相甲醇-超纯水体积比60:40 ;流动相甲醇-超纯水流速I. OmL mirT1 ;柱温 30°C ;检测波长为 284nm。在相同的条件下检测上述处理过的待分析水样，根据速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威各自的峰面积，对应地利用速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威各自的标准曲线回归方程，分别计算出水样中速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威的质量浓度。速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的分析特征量速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的相关系数0. 9991 0. 9998 ;检出限为0. 050 1. 60 u g L1 ;出峰时间和峰面积的相对标准偏差分别在0. 002% 0. 008%和0. 1% 0. 6%间；方法回收率为91. 3% 105%，相对标准偏差为I. 459T4. 86%o实施例4水样预处理依次用5mL甲醇、5mL超纯水浸润和活化C18固相萃取小柱,备用。取待分析水样以4mL ^irT1速度上样，经C18固相萃取小柱富集，水样全部抽完后用3mL超纯水淋洗，然后在真空下继续抽气干燥30min,用5mL 二氯甲烧以4mL mirT1速度洗脱C18固相萃取小柱，并收集洗脱液。在50°C条件下氮气吹干洗脱液后，用甲醇定容至l.OmL，待色谱分析。N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物标准系列溶液的配制分别称量0. OOlOOg速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威固体样品，用甲醇定容至ImL,配制浓度分别为IOOOmg L-1速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威标准混合使用液，然后逐级稀释成浓度分别为500、250、125、62. 5,31. 25、15. 63,7. 82、I. Omg L-1速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的标准系列混合溶液，经0. 45 y m滤膜过滤后待测。采用超高速液相色谱紫外检测器对标准系列混合溶液进行分析，以速灭威、异丙
威、乙霉威及仲丁威各自的峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标绘制标准曲线，分别得到速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威各自的标准曲线回归方程。选取的检测条件为C18色谱柱；进样体积8.0UL;流动相甲醇-超纯水体积比70:30 ;流动相甲醇-超纯水流速I. 2mL mirT1 ;柱温 40°C ;检测波长为 320nm。在相同的条件下检测上述处理过的待分析水样，根据速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威各自的峰面积，对应地利用速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威各自的标准曲线回归方程，分别计算出水样中速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威的质量浓度。速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的分析特征量速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的相关系数0. 9993、. 9997 ;检出限为0. 049 I. 48 u g L-1 ;出峰时间和峰面积的相对标准偏差分别在0. 0019T0. 007%和0. 2% 0. 5%间；方法回收率为92. 8% 99. 5%，相对标准偏差为I. 32% 3. 38%o实施例5水样预处理依次用5mL甲醇、5mL超纯水浸润和活化Oasis HLB固相萃取小柱，备用。取待分析水样以SmLmirT1速度上样，经Oasis HLB固相萃取小柱富集，水样全部抽完后用3mL超纯水淋洗,然后在真空下继续抽气干燥30min,用7mL 二氯甲烧以5mL mirT1速度洗脱Oasis HLB固相萃取小柱，并收集洗脱液。在55°C条件下氮气吹干洗脱液后，用甲醇定容至I. OmL，待色谱分析。N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物标准系列溶液的配制分别称量0. OOlOOg速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威固体样品，用甲醇定容至ImL,配制浓度分别为IOOOmg L-1速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威标准混合使用液，然后逐级稀释成浓度分别为500、250、125、62. 5,31. 25、15. 63,7. 82、I. Omg L-1速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的标准系列混合溶液，经0. 45 y m滤膜过滤后待测。采用超高速液相色谱紫外检测器对标准系列混合溶液进行分析，以速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威各自的峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标绘制标准曲线，分别得到速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威各自的标准曲线回归方程。选取的检测条件为C18色谱柱；进样体积10. 0 L ;流动相甲醇-超纯水体积比90:10 ;流动相甲醇-超纯水流速
I.5mL mirT1 ;柱温 50°C ;检测波长为 340nm。在相同的条件下检测上述处理过的待分析水样，根据速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威各自的峰面积，对应地利用速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威各自的标准曲线回归方程，分别计算出水样中速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威的质量浓度。速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的分析特征量速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的相关系数0. 9989、. 9996 ;检出限为0. 052 I. 59 u g L1 ;出峰时间和峰面积的相对标准偏差分别在0. 0019T0. 009%和0. 1% 0. 6%间；方法回收率为93. 6% 107%，相对标准偏差为
I.51% 3. 85%。 实验证明，通过固相萃取与超高速液相色谱紫外检测结合，本发明的N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测方法在优选实验条件下获得的数据结果，能够应用于环境水体中的速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的检测，为环境水体中速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的快速、同时分析提供了可行，易于推广应用。尽管上面结合对本发明的优选实施例进行了描述，但是本发明并不局限于上述的具体实施方式
，上述的具体实施方式
仅仅是示意性的，并不是限制性的，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不脱离本发明宗旨和权利要求所保护的范围情况下，还可以作出很多形式的具体变换，这些均属于本发明的保护范围之内。
权利要求
1. 一种N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测方法，其特征在于，所述N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物包括速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威，该方法按照如下步骤进行 a.依次用甲醇、超纯水浸润和活化固相萃取小柱，备用； b.取待分析水样以f5mL HiirT1速度上样，经固相萃取小柱富集，待水样全部抽完后用超纯水淋洗； c.在真空下抽气干燥固相萃取小柱； d.用f7mL洗脱剂以r5mL mirT1速度洗脱固相萃取小柱，并收集洗脱液； e.在2(T55°C条件下氮气干燥洗脱液后，甲醇定容； f.配制N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物系列混合甲醇标准溶液； g.采用超高速液相色谱紫外检测器分析步骤(f)所配制的N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物系列混合甲醇标准溶液，以其质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威各自的标准曲线回归方程； h.采用超高速液相色谱紫外检测器分析步骤(e)得到的待分析水样； i.根据步骤(h)得到的速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威各自的峰面积，利用步骤(g)所得速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威各自的标准曲线回归方程，分别计算出待分析水样中速灭威、异丙威、乙霉威和仲丁威的质量浓度； 其中，步骤(g)和步骤(h)中的超高速液相色谱紫外检测条件如下C18色谱柱，进样体积为5 10 u L，流动相甲醇-超纯水的体积比为40:60^90:10，流动相甲醇-超纯水的流速为0. 5 I. 5mL mirT1，柱温为20 5(TC，紫外检测波长为200 340nm。
2.根据权利要求I所述的一种N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测方法，其特征在于，所述步骤(a)至步骤(d)中的固相萃取小柱选自乙烯吡咯烷酮-二乙烯苯聚合物小柱、C18小柱或氨基小柱。
3.根据权利要求I所述的一种N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测方法，其特征在于，所述步骤(b)中待分析水样的上样速度为3mL mirT1。
4.根据权利要求I所述的一种N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测方法，其特征在于，所述步骤(d)中的洗脱剂选自甲醇、二氯甲烷或体积为1:1的甲醇/乙腈。
5.根据权利要求I所述的一种N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测方法，其特征在于，所述步骤(d)中的洗脱剂用量为5mL。
6.根据权利要求I所述的一种N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测方法，其特征在于，所述步骤(d)中的洗脱速度为3mL mirT1。
7.根据权利要求I所述的一种N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测方法，其特征在于，所述步骤(g )和步骤(h )中流动相甲醇-超纯水的体积比为70:30。
8.根据权利要求I所述的一种N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测方法，其特征在于，所述步骤(g)和步骤(h)中流动相甲醇-超纯水的流速为0. 5mL mirT1。
9.根据权利要求I所述的一种N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测方法，其特征在于，所述步骤(g)和步骤(h)中的柱温为40°C。
10.根据权利要求I所述的一种N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测方法，其特征在于，所述步骤(g)和步骤(h)中的紫外检测波长为284nm。
全文摘要
本发明公开了一种N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测方法，用固相萃取进行水样预处理；配制N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物系列混合甲醇标准溶液；采用超高速液相色谱紫外检测器分析标准溶液，以其质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到标准曲线回归方程；采用超高速液相色谱紫外检测器分析待分析水样，根据峰面积分别计算出待分析水样中N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物的质量浓度。本发明填补了环境水体中N-甲基氨基甲酸酯类农药残留物检测技术的空白，能够通过一次性检测同时得到痕量速灭威、异丙威、乙霉威及仲丁威的质量浓度，具有简单、省时、灵敏和高效的特点，同时超高速液相色谱紫外检测方法具有普适性，易于推广应用。
文档编号G01N30/36GK102749404SQ20121024975
公开日2012年10月24日 申请日期2012年7月18日 优先权日2012年7月18日
发明者潘献辉, 王晓楠 申请人:国家海洋局天津海水淡化与综合利用研究所