专利名称：一种同时检测水产品中硝基呋喃类原药残留的方法
技术领域：
本发明属于水产品质量安全检测领域，特别涉及一种同时检测水产品中硝基呋喃类原药残留的方法。
背景技术：
硝基呋喃类药物是具有5 —硝基呋喃结构的人工合成抗生素，主要包括呋喃它酮(Furaltadone, FTD)、呋喃西林(Nitrofurazone, NFZ)、呋喃妥因(Nitrofurantoin, NFT)和呋喃唑酮(Furazolidone，FZD)这四种药物。由于这类抗生素具有良好的抑菌和杀菌效果，曾被广泛用于水产动物疾病的预防与治疗中。相关研究已经证明硝基呋喃类药物具有致畸、致癌和致突变的毒副作用。目前，欧盟、美国、中国和日本等国家已经禁止硝基呋喃类药物在动物养殖过程中使用，然而由于其治疗效果显著，且尚无相关替代药物，许多养殖户仍在使用硝基呋喃类药物。因此，建立测定硝基呋喃类药物的检测方法具有十分重要的意义。 目前检测硝基呋喃类药物残留主要采用高效液相色谱法、高效液相色谱串联质谱法和酶联免疫法进行测定，而检测对象主要集中在饲料和养殖用水，检测指标主要为硝基呋喃代谢物。由于水产品种类繁多，基质复杂，导致检测水产品中硝基呋喃原药残留检测的方法研究还比较匮乏，现有的液相色谱检测水产品中硝基呋喃原药残留的方法，其需要采用固相萃取进行净化，在实际操作中，增加了前处理所需要的时间和费用，同时该方法的定 量限较高，呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮的定量限分别为25、10、15、10^/1^，无法满足日益严苛的检测要求。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种同时检测水产品中硝基呋喃类原药残留的方法，该方法具有灵敏度高、操作简便、检测成本低廉、准确可靠的特点；定量限均为5 μ g/kg,回收率大于70%，适合用于水产品进出口快速检测。本发明的一种同时检测水产品中硝基呋喃类原药残留的方法，包括(I)取呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮溶于甲醇，配制成100μ g/mL的原药混合标准储备液，-IO0C --20°C下保存；将混合标准储备液用甲醇稀释，配制成I μ g/mL的混合标准中间液，再将混合标准中间液用流动相配制成标准工作溶液；(2)将鱼类样品去鳞、去皮沿背脊取肌肉，粉碎，-IO0C -20°C下贮存，测定前室温解冻；取样品加入乙酸乙酯，经涡旋混合、超声、再次涡旋混合后离心，取上层溶液再加入乙酸乙酯重复提取一次，合并提取液；(3)将上述提取液减压浓缩至干，加入正己烷，涡旋后加入流动相，涡旋混合、离心，取下层溶液过水相膜后，上机色谱分析，即得硝基呋喃类原药的浓度。所述步骤(I)中的标准工作溶液的浓度分别为0. 010,0. 015,0. 020,0. 025,0. 05、
0.I 和 0. 25 μ g/mL。所述步骤(2)中的鱼类样品为草鱼或大黄鱼。
所述步骤(I)和(3)中的流动相为体积比25:75的乙腈和NaH2PO4水溶液；其中，NaH2PO4 水溶液的浓度为 O. 05mol/L, pH=3. O。所述步骤(2)和(3)中的离心的速度为4000r/min,离心的时间为5min。所述步骤(3)中的减压浓缩在30°C下进行。所述步骤(3)中的水相膜的厚度为O. 45 μ m。所述步骤(3)中的色谱分析条件为色谱柱Z0RBAX SB-C18柱，规格为250mm*4. 6mm，粒径为5 μ m ;柱温25°C ;检测波长365nm ;流动相体积比25:75的乙腈和NaH2PO4水溶液；其中，NaH2PO4水溶液的浓度为O. 05mol/L, pH=3. O ;流速1. OmL/min ;进样量50 μ L ;运行时间18. Omin ;采用梯度洗脱。有益.效果 (I)本发明具有灵敏度高、操作简便、检测成本低廉、准确可靠的特点；(2)本发明简化了样品的前处理步骤，减少了前处理费用，特别是将样品的前处理时间缩短了一倍以上，方法的定量限也大幅度提高；(3)本发明检测四种硝基呋喃原药残留的定量限均为5 μ g/kg，回收率大于70%，适合用于水产品进出口快速检测。
图I为O. 025 μ g/mL混合标准溶液色谱图；图2为5. O μ g/kg草鱼样品加标色谱图；图3为草鱼空白样本色谱图。
具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例II. O. 05mol/L NaH2PO4 (pH = 3. O)溶液配置方法称 7. 8g NaH2PO4 · 2H20 加入IOOOmL超纯水，用磷酸调节pH至3. O，定容至1L。2.四种混合标准溶液配制准确称取呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮各IOmg,用甲醇定容至IOOmL,配制成ΙΟΟμ g/mL的四种原药混合标准储备液,_20°C保存。取ImL混合标准储备液，用甲醇定容至IOOmL,配制成I μ g/mL的混合标准中间液。移取混合标准中间液，用流动相(体积比乙腈:0· 05M NaH2PO4 = 25:75，ρΗ3· 0)配制成浓度为O. 010、
0.015,0. 020,0. 025,0. 05,0. 1,0. 25 μ g/mL 标准工作溶液。实施例2样品制备草鱼和大黄鱼去鳞、去皮沿背脊取肌肉，经组织粉碎机粉碎，-20°C贮存，测定前室温解冻。样品前处理I提取准确称取样品(5. 00±0. 05)g于50mL离心管中，加入8mL乙酸乙酯，涡旋混合lmin,超声5min,再次润旋混合lmin, 4000r/min离心5min,将上层转移至棕色鸡心瓶中，再加入8mL乙酸乙酯重复提取，合并提取液。2.浓缩将提取液在旋转蒸发仪上于30°C减压浓缩至干。3.净化加入2mL正己烧，涡旋30s后加入ImL流动相(体积比乙臆:O. 05MNaH2P04 = 25:75, ρΗ3· O), 混合 lmin,转入 IOmL 离心管中，4000r/min 离心 5min,取下层过O. 45 μ m水相膜后,上机分析,结果见图2和图3。4.色谱条件仪器色谱为Agilent 1200，色谱柱为ZORBAX SB-C18柱(250mm*4. 6mm, 5 μ m),柱温:25 V，检测波长365nm,流动相为体积比乙腈:0. 05MNaH2PO4 = 25:75,pH3. 0，流速:1. OmL/min ;进样量50μ L ;运行时间为 18. Omin0 梯度洗脱程序见表I。表I流动相及梯度洗脱程序
权利要求
1.一种同时检测水产品中硝基呋喃类原药残留的方法，包括 (O取呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮溶于甲醇，配制成ΙΟΟμ g/mL的原药混合标准储备液，-IO0C -20°C下保存；将混合标准储备液用甲醇稀释，配制成I μ g/mL的混合标准中间液，再将混合标准中间液用流动相配制成标准工作溶液； (2)将鱼类样品去鳞、去皮沿背脊取肌肉，粉碎，-10°C-20°C下贮存，测定前室温解冻；取样品加入乙酸乙酯，经涡旋混合、超声、再次涡旋混合后离心，取上层溶液再加入乙酸乙酯重复提取一次，合并提取液； (3)将上述提取液减压浓缩至干，加入正己烷，涡旋后加入流动相，涡旋混合、离心，取下层溶液过水相膜后，上机色谱分析，即得硝基呋喃类原药的浓度。
2.根据权利要求I所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃类原药残留的方法，其特征在于:所述步骤(I)中的标准工作溶液的浓度分别为O. 010,0. 015,0. 020,0. 025,0. 05,0. I和 O.25 μ g/mL。
3.根据权利要求I所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃类原药残留的方法，其特征在于 所述步骤(2)中的鱼类样品为草鱼或大黄鱼。
4.根据权利要求I所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃类原药残留的方法，其特征在于 所述步骤(I)和(3 )中的流动相为体积比25:75的乙腈和NaH2PO4水溶液；其中，NaH2PO4水溶液的浓度为O. 05mol/L, pH=3. O。
5.根据权利要求I所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃类原药残留的方法，其特征在于 所述步骤(2)和(3)中的离心的速度为4000r/min,离心的时间为5min。
6.根据权利要求I所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃类原药残留的方法，其特征在于 所述步骤(3)中的减压浓缩在30°C下进行。
7.根据权利要求I所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃类原药残留的方法，其特征在于 所述步骤(3)中的水相膜的厚度为O. 45 μ m。
8.根据权利要求I所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃类原药残留的方法，其特征在于 所述步骤(3)中的色谱分析条件为色谱柱Z0RBAX SB-C18柱，规格为250mm*4. 6mm,粒径为5 μ m ;柱温25°C ;检测波长365nm ;流动相体积比25:75的乙腈和NaH2PO4水溶液；其中，NaH2POyjC溶液的浓度为O. 05mol/L，pH=3. O ;流速1. OmL/min ;进样量:50μ L ;运行时间18. Omin ;采用梯度洗脱。
全文摘要
本发明涉及一种同时检测水产品中硝基呋喃类原药残留的方法，包括(1)四种混合标准溶液配制；(2)样品制备；(3)提取；(4)浓缩；(5)净化；(6)测定。本发明具有灵敏度高、操作简便、检测成本低廉、准确可靠的特点；定量限均为5μg/kg，回收率大于70%，适合用于水产品进出口快速检测。
文档编号G01N30/06GK102830192SQ201210277638
公开日2012年12月19日 申请日期2012年8月6日 优先权日2012年8月6日
发明者黄宣运, 于慧娟, 蔡友琼, 李冰, 黄冬梅, 史永富, 沈晓盛 申请人:中国水产科学研究院东海水产研究所