专利名称：一种羧酸酯酶的活性和羧酸酯酶抑制剂的活性的检测方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种羧酸酯酶的活性和羧酸酯酶抑制剂的活性的检测方法。
背景技术：
配位聚合物(Coordination polymer)通常是指金属离子和有机配体通过自组装而形成的具有周期性网络结构的金属有机材料。例如，巯基配体-SR，氨基酸，氨基配体和金属离子M (M :Cu, Ag, Au等过度金属离子)可以通过有序自组装形成配位聚合物。结构通式
如下
权利要求
1.一种羧酸酯酶的活性的检测方法，其特征在于，具体步骤如下 步骤一将底物分子和不同浓度羧酸酯酶反应，得到水解产物； 步骤二 将步骤一得到的水解产物、重金属盐溶液、聚阴离子溶液和带正电荷的小分子探针溶液混合，对羧酸酯酶的活性进行荧光检测。
2.根据权利要求I所述的一种羧酸酯酶的活性的检测方法，其特征在于，所述的羧酸酯酶为胆碱酯酶或脂肪酶。
3.根据权利要求I所述的一种羧酸酯酶的活性的检测方法，其特征在于，所述的底物分子为硫代乙酰胆碱。
4.根据权利要求I所述的一种羧酸酯酶的活性的检测方法，其特征在于，所述的步骤一中水解反应体系为400 u L总体系，包括浓度为6. 875mM pH值为7. 4的Tris-HAc缓冲溶液，浓度为0. 06875mM底物分子，0_0. 0004U/ u L的羧酸酯酶，余量为无菌水。
5.根据权利要求I所述的一种羧酸酯酶的活性的检测方法，其特征在于，所述的聚阴离子为聚乙烯磺酸钠或单链DNA。
6.根据权利要求I所述的一种羧酸酯酶的活性的检测方法，其特征在于，带正电荷的小分子探针为3，4，9，10-四-(4-三甲基胺丁基氧-羰基)-茈，其结构式为 OO O
7.根据权利要求I所述的一种羧酸酯酶的活性的检测方法，其特征在于，所述的检测体系为550 ii L总体系，包括400ii L水解反应体系,浓度为IOOii M重金属盐,浓度为60 ii M聚阴离子，浓度为IOOii M小分子探针,余量为无菌水。
8.根据权利要求I所述的一种羧酸酯酶的活性的检测方法，其特征在于，所述的荧光检测条件为442nm荧光激发，460_650nm荧光检测。
9.一种羧酸酯酶抑制剂的活性的检测方法，其特征在于，具体步骤如下 步骤一将不同浓度的羧酸酯酶抑制剂和羧酸酯酶混合，再和底物分子反应，得到水解产物； 步骤二 将步骤一得到的水解产物、重金属盐溶液、聚阴离子溶液和带正电荷的小分子探针溶液混合，对羧酸酯酶抑制剂的活性进行荧光检测。
10.根据权利要求9所述的一种羧酸酯酶抑制剂的活性的检测方法，其特征在于，带正电荷的小分子探针为3，4，9，10-四-(4-三甲基胺丁基氧-羰基)-茈，其结构式为 0O O
全文摘要
一种羧酸酯酶的活性和羧酸酯酶抑制剂的活性的检测方法，属于生物技术领域。解决现有的酶活性检测方法灵敏度比较低、易出现假阳性信号、方法复杂、价格昂贵和耗时长的问题。该羧酸酯酶活性的检测方法是将底物分子和不同浓度羧酸酯酶反应，得到水解产物；将得到的水解产物、硝酸银溶液、聚阴离子溶液和带正电荷的小分子探针溶液混合，对羧酸酯酶的活性进行荧光检测。本发明还提供一种羧酸酯酶抑制剂的活性的检测方法。该方法具有更高的灵敏度，检测限为0.05mU/mL，比现有的某些检测方法低1或2个数量级，同时实验证明该方法具有很好的选择性、简便、成本低。
文档编号G01N21/64GK102788776SQ20121028267
公开日2012年11月21日 申请日期2012年8月9日 优先权日2012年8月9日
发明者于聪, 周会鹏, 廖冬丽, 陈健 申请人:中国科学院长春应用化学研究所