专利名称：一种千山活血膏的质量控制方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，确切地说，涉及ー种千山活血膏中药药物质量的控制方法，特别是千山活血膏制剂组方三七药材中人參皂苷Rgl、Rbl及三七皂苷Rl三种成分高效液相色谱含量測定方法。
背景技术：
千山活血膏是由土鳖虫、大黄、三七、延胡索 、血竭、续断、黄柏、乳香、没药、儿茶、细辛、千年健、山慈姑、泽泻、羚羊角、木香、白及、白主、桂枝、羌活20味药组成，收载于地方标准WS-10415 (ZD-0415)-2002，具有活血化瘀、舒筋活络、消肿止痛的功效，用于肌肤、关节肿胀、疼痛、活动不利以及跌打损伤，腰、膝部骨性关节炎等症。千山活血膏原质量标准对血竭、三七进行了薄层色谱的鉴别，对三七中的人皂皂苷Rgl进行了含量測定，检测指标少，难以全面控制产品质量，特别是三七中所含的人參皂苷Rgl和人參皂苷Rbl、三七皂苷均为四环三萜类皂苷，在紫外区为末端吸收，与ー些常用的有机溶剂的紫外吸收波长接近，影响測定，使用紫外低波长检测，会给测定带来一定困难，影响含量測定的准确性和重现性。蒸发光闪射检测器(ELSD)是ー种新型通用检测器，其信号响应与被测物的质量成正比，而不依赖于被测物的光学特性及官能团，理论上可用于挥发性低于流动相的任何组分的检测。它对无紫外吸收或为紫外末端吸收的物质如糖类、皂苷类、留类等有较好的响应。ELSD消除了溶剂的干扰和因温度变化引起的基线漂移，即使用梯度洗脱也不会产生基线漂移。ELSD的响应不依赖样品的光学性质，只要样品的挥发性低于流动相即可被检测，尤其适用于流动相有紫外吸收干扰或梯度洗脱时基线漂移影响的情况，克服了传统检测方法的不足，已经越来越多的应用于高效液相色谱中。蒸发光散射检测器(ELSD)最大的优越性在于能检测不含发色团的化合物，ELSD的通用检测方法消除了常见于传统HPLC检测方法中的难点，不同于紫外和荧光检测器，ELSD的响应不依赖与样品的光学特性，任何挥发性低于流动相的样品均能被检测，在低温下也能使用。蒸发光散射检测器基线噪音小，不受梯度影响，峰形尖鋭，杂质峰很少。而紫外检测器基线受梯度影响，在分析过程中基线漂移较大。三七中皂苷类成分的分析常使用较低的紫外检测波长(203nm)，该波段为末端吸收，噪音信号很大，难以获得满意的結果。ELSD检测器作为ー种通用型检测器，仅对不挥发被分析物产生信号，其信号响应值仅取决于被分析物质颗粒的大小和数量，不存在紫外末端吸收的问题。且对流动相的变化不敏感，即使在梯度洗脱时基线也很平稳。通过调节ELSD检测器的漂移管温度与载气流速，可以使基线噪音最小，响应值相对最高，从而获得好的色谱图。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的千山活血膏的质量控制方法。本发明通过如下技术方案实现本发明的千山活血膏质量控制方法包括如下鉴别和/或含量測定方法
鉴别包括如下方法(I)取本品5g，加こ醇10ml，超声处理15分钟，放冷，滤过，取滤液，作为供试品溶液。另取血竭对照药材0. lg，加こ醇5ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(19 I)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同顔色的主斑点。(2)取本品10g，加水70ml，加热煮沸30分钟，放冷，滤过，滤液加こ醚30ml振摇提取，弃去こ醚液，水层用水饱和的正丁醇振摇提取2次，毎次40ml，合并正丁醇液，用氨试液30ml洗涤，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水30ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材lg，加甲醇20ml，回流提取I小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，毎次25ml，合并正丁醇液，同法制成对照药材溶液；再取人參皂苷Rbl、Rgl及三七皂苷Rl对照品，加甲醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一 部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5 u 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13 7 2)10°C以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中。在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，分别显相同顔色的斑点或荧光斑点。含量测定包括如下方法色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以こ腈-水为流动相，按下表进行梯度洗脱
时间(分钟)_流速_ 一 _水(％) _ ~Z^m (%)
0 "1.08515
10 1.0 80 20 251.07822
281.07525
301.06832
351.08515
451.08515蒸发光闪射检测器条件为漂移管温度为120°C，载气流速为2. OL/min ;理论板数按人參皂苷Rgl峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备精密称取经五氧化ニ磷干燥至恒重的人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、三七皂苷Rl对照品适量，加甲醇制成每Iml含人參皂苷RglO. 5mg/ml、人參苷RblO. 5mg/ml、三七皂苷RIO. 15mg/ml的混合溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备取千山活血膏，除去盖衬，取2. 5g精密称定，置索氏提取器中，加こ醚回流提取3小时，弃去こ醚液，药渣挥干，加甲醇回流提取4小时，甲醇提取液蒸干,残渣加水微热使溶解,放冷,上大孔吸附树脂柱(内径I. 5cm,长IOcm)，用2_4倍柱体积的20%的こ醇溶液洗涤，弃去20%こ醇洗脱液，再用70%的こ醇5-8倍柱体积洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。測定法分别精密吸取对照品溶液5 iU、10 ill和供试品溶液10 U 1，注入液相色谱仪，測定，即得。下面对本发明的千山活血膏质量控制方法进行进一步的说明。千山活血膏含量測定方法试验I、仪器与试剂高效液相色谱仪日本岛津公司(LC-2010A);检测器蒸发光散射检测器(SEDEX75);こ睛为色谱纯，Dikma公司，水为超纯水。 对照品三七皂苷Rl (批110745-201012)、人參皂苷Rgl (批号0703-201018)、人參皂苷Rbl (批号110704-201018)，购自中国药品生物制品检定所。2、方法与结果色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；Dikma 5 u m, 150mm*4. 6mm ;流动相为こ腈-水按下表进行梯度洗脱
权利要求
1.一种千山活血膏的质量控制方法，包括采用(1)薄层色谱法鉴别千山活血膏血竭中 血竭素高氯酸盐；(2)薄层色谱法鉴别千山活血膏三七中人参皂苷Rgl ; (3)高效液相色谱法测定千山活血膏三七中人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl以及三七皂苷Rl。
2.根据权利要求I所述的一种千山活血膏的质量控制方法，其特征在于(1)薄层色谱法鉴别千山活血膏血竭中血竭素高氯酸盐；(2)薄层色谱法鉴别千山活血膏三七中人参皂苷Rgl ; (3)高效液相色谱-蒸发光闪射检测法同时测定千山活血膏三七中人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl以及三七皂苷Rl三种成分的含量。
3.根据权利要求I或2所述的一种千山活血膏的质量控制方法，其特征在于(1)薄层色谱法鉴别千山活血膏血竭中血竭素高氯酸盐的方法为取本品5g，加乙醇10ml，超声处理15分钟，放冷，滤过，取滤液，作为供试品溶液。另取血竭对照药材0. Ig,加乙醇5ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(19 I)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
(2)薄层色谱法鉴别千山活血膏三七中人参皂苷Rgl的方法为取本品10g，加水70ml，加热煮沸30分钟，放冷，滤过，滤液加乙醚30ml振摇提取，弃去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液30ml洗涤，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水30ml洗漆，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材lg，加甲醇20ml，回流提取I小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，同法制成对照药材溶液；再取人参皂苷RbURgl及三七皂苷Rl对照品，加甲醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各5 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13 7 2)10°C以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中。在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点或荧光斑点。
(3)高效液相色谱-蒸发光闪射检测法同时测定千山活血膏三七中人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl以及三七皂苷Rl三种成分的含量，条件为 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为流动相，按下表进行梯度洗脱
全文摘要
本发明公开了一种千山活血膏的质量控制方法。千山活血膏收载于国家中成药地方标准WS-10415(ZD-0415)-2002。本发明即为该中成药的一种质量控制方法，包括薄层色谱鉴别方中血竭和三七药材，高效液相色谱测定方中三七所含人参皂苷Rg1、Rb1以及三七皂苷R1。含量测定采用高效液相色谱-蒸发光闪射检测法测定，克服了原质量标准含量测定采用紫外检测器203nm检测受溶剂影响的弊端，效果良好，可很好地控制产品的质量。
文档编号G01N30/90GK102809626SQ20121030171
公开日2012年12月5日 申请日期2012年8月23日 优先权日2012年8月23日
发明者张修成, 张宇 申请人:北京修成药业有限公司