专利名称：硫酸头孢匹罗/氯化钠注射液中的头孢匹罗有关物质Ⅱ的检测方法
技术领域：
本发明属于医药质量检测领域，具体涉及一种硫酸头孢匹罗/氯化钠注射液非PVC即配型输液中的头孢匹罗有关物质II的检测方法。
背景技术：
目前，专利文献专利号200520115059公开了一种硫酸头孢匹罗双室输液袋包装，但说明书中并未记载有相关的检测方法。而且，中国国家食品药品监督管理局颁布了硫酸头孢匹罗/氯化钠注射液标准(试行)(YBH17062005)，这也是本发明人所提出的硫酸头孢匹罗/氯化钠注射液非PVC即 配型输液的检测参照的标准。其中，头孢匹罗的有关物质II (聚合物)对于输液剂型是非常重要的、不能缺少的检测项目，也是众多研发机构研究的重要课题。但是在中国国家食品药品监督管理局的硫酸头孢匹罗/氯化钠注射液标准(试行)(YBH17062005)中有关头孢匹罗聚合物的测定方法存在以下的问题。作为其测定条件参数，使用色谱柱用葡聚糖凝胶G-IO (40-120 μ m)为填充剂；以PH7. O的O. 01mol/L磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钠2. 19g和磷酸二氢钠O. 54g加水IOOOml溶解，调节pH至7. O)为流动相A，流速为2ml/min ；0. 2%十二烷基硫酸钠、O. 8NaCl以及O. 01%硫酸盐缓冲液的混合液用硫酸调PH为I. 5为流动相B，流速为2. 5ml/min ;检测波长254nm。所述测定方法的缺点在于G-10色谱柱灵敏度低，分离度差，不能达到基线分离，采样时间过长，无法准确检测头孢匹罗聚合物，不能达到检测目的，不能提供正确、准确、可靠的检测方法，不能为保证产品质量合格提供指导方法。
发明内容
本发明提供了一种硫酸头孢匹罗/氯化钠注射液非PVC即配型输液的头孢匹罗有关物质II的检测方法，采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography\HPLC)，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。本发明为一种硫酸头孢匹罗/氯化钠注射液中的头孢匹罗有关物质II的检测方法，采用高效液相色谱法，进行色谱条件与系统适用性的试验，将适合分离分子量为1000-5000球状蛋白的色谱用亲水硅胶作为填充剂，以体积比85 15的磷酸盐缓冲液-乙腈为流动相，流速为O. 5ml/min，其中所述磷酸盐缓冲液由体积比50 50的O. 05mol/L磷酸氢二钠与O. 05mol/L磷酸二氢钠构成，检测波长为254nm，从输液袋中取相当于头孢匹罗IOmg的适量硫酸头孢匹罗/碳酸钠混合粉末，置于IOml量瓶中；加水溶解并稀释至刻度，摇匀；取20μ I注入液相色谱仪中，头孢匹罗峰与其前面的杂质峰之间的分离度应符合规定。优选为，取输液袋中相当于头孢匹罗IOmg的适量硫酸头孢匹罗/碳酸钠混合粉末，称定(称取重量精确至所取重量的千分之一)，加水溶解并制成每Iml中含头孢匹罗I· Omg的溶液，作为供试品溶液(临用新配)；另取硫Ife头抱匹罗对照品适量，称定，加水溶解并稀释成每Iml中含头孢匹罗5μ g的溶液,作为对照品溶液；量取供试品溶液与对照品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪中，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20% 25%，进行检测，记录色谱图；按外标法以峰面积计算保留时间小于头孢匹罗的杂质总量，以头孢匹罗计，不得超过I. 5%，S卩，输液袋中的硫酸头孢匹罗/碳酸钠的杂质总量不得超过硫酸头孢匹罗/碳酸钠自身的I. 5%。发明的效果本发明的检测方法采用以球状蛋白色谱用的亲水硅胶作为充填剂的色谱柱进行分析测定，先进可靠，准确度高，专属性强，作为质量控制方法具有良好的精密度、重现性、稳定性，能够有效地检测出硫酸头孢匹罗/氯化钠注射液非PVC即配型输液产品中的头孢匹罗有关物质II聚合物，能够用于质量控制。本发明作为申报质量标准经权威机构中国北京市药品检验所检测，证实其具有可操作性、检测方法先进、准确率高、具有良好的精密度、重现性、稳定性。
图I表示本发明一实施例为硫酸头孢匹罗/氯化钠注射液中的头孢匹罗有关物质II的检测方法中，以磷酸盐缓冲液为流动相的液相色谱测试图。图2表示本发明另一实施例所述的头孢匹罗有关物质II的检测方法中，以磷酸盐缓冲液一乙腈(体积比90 :10)为流动相的液相色谱测试图。图3表示本发明再一实施例所述的头孢匹罗有关物质II的检测方法中，以磷酸盐缓冲液一乙腈(体积比85 :15)为流动相的液相色谱测试图。
具体实施例方式以下，通过具体实施方式
对本发明进行进一步说明。本发明一实施例为硫酸头孢匹罗/氯化钠注射液非PVC即配型输液中的头孢匹罗有关物质II的检测方法，采用高效液相色谱法，将适合分离分子量为1000-5000球状蛋白的色谱用亲水硅胶作为填充剂；以由磷酸氢二钠与O. 05mol/L磷酸二氢钠构成的磷酸盐缓冲液-乙腈为流动相，流速为O. 5ml/min,使用装有硫酸头孢匹罗/碳酸钠混合粉末的输液袋，从输液袋中取相当于头孢匹罗IOmg的适量硫酸头孢匹罗/碳酸钠混合粉末，置于IOml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，取20 μ I注入液相色谱仪，头孢匹罗峰与其前面的杂质峰之间的分离度应符合规定。具体而言，按照以下的条件进行检测试验。I)使用仪器岛津LC-10AT泵，配有岛津SPD-10A紫外检测器。2)使用试剂乙臆(色谱纯，concordtechnology (tianjin) Co.,)
磷酸氢二钠(分析纯，北京化工厂制)
磷酸二氢钠(分析纯，北京化工厂制)水(纯化水，自制)。3)色谱条件与系统适用性的试验本发明另一实施例的所述头孢匹罗有关物质II的检测方法的具体步骤为取输液袋中相当于头孢匹罗IOmg的硫酸头孢匹罗/碳酸钠混合粉末，称定(称取重量精确至所取重量的千分之一)，加水溶解并制成每Iml中含头孢匹罗I. Omg的溶液，作为供试品溶液(临用新配);另取硫酸头孢匹罗对照品适量，称定，加水溶解并稀释成每Iml中含头孢匹罗5μ g的溶液，作为对照品溶液。取对照品溶液20 μ I注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20% 25%，量取供试品溶液与对照品溶液各20 μ I，注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算保留时间小于头孢匹罗的杂质总量，以头孢匹罗计，不得超过I. 5%，即，输液袋中的硫酸头孢匹罗/碳酸钠的杂质总量不得超过硫酸头孢匹罗/碳酸钠自身的1.5%。采用TSKgel G2500PWXL色谱柱，对方法进行优化选择研究，采用的流速为O. 5ml/min ;检测波长参照国家食品药品监督管理局硫酸头孢匹罗/氯化钠注射液试行标准(YBH17062005)中头孢匹罗聚合物的检测波长为254nm ;并在新的色谱条件下对聚合物进行定位，参照原标准中流动相A,对流动相进行优化选择研究,具体如下流动相选择流动相I :以磷酸盐缓冲液(O. 05mol/L磷酸氢二钠0. 05mol/L磷酸二氢钠和体积比=50 50)为流动相,进样,记录色谱图，由图可知保留时间为62. 029min，采集时间较晚，优化流动相，使用检测器A通道l/254nm进行检测，参见附图I。高效液相色谱检测结果数据表I
权利要求
1.一种硫酸头孢匹罗/氯化钠注射液中的头孢匹罗有关物质II的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法，进行色谱条件与系统适用性的试验，将适合分离分子量1000-5000球状蛋白的色谱用亲水硅胶作为填充剂，以体积比85 15的磷酸盐缓冲液-乙腈作为流动相，流速为O. 5ml/min，其中所述磷酸盐缓冲液由体积比50 50的O. 05mol/L磷酸氢二钠和O. 05mol/L磷酸二氢钠构成，检测波长为254nm，从输液袋中取相当于包含头孢匹罗IOmg的适量硫酸头孢匹罗/碳酸钠混合粉末，置IOml量瓶中；加水溶解并稀释至刻度，摇匀；取20μ I注入液相色谱仪中，进行色谱测试，记录色谱图。
2.根据权利要求I所述的硫酸头孢匹罗/氯化钠注射液中的头孢匹罗有关物质II的检测方法，其特征在于，从输液袋中取相当于含头孢匹罗IOmg的适量硫酸头孢匹罗/碳酸钠混合粉末，称定，加水溶解并制成每Iml中约含头孢匹罗I. Omg的溶液，作为供试品溶液；另取硫酸头孢匹罗对照品适量，称定，加水溶解并稀释成每Iml中含头孢匹罗5 μ g的溶液，作为对照品溶液；分别量取供试品溶液与对照品溶液各20μ I注入液相色谱仪中，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20% 25%，进行色谱测试，记录色谱图。
全文摘要
本发明提供一种硫酸头孢匹罗/氯化钠注射液中的头孢匹罗有关物质Ⅱ的检测方法，采用高效液相色谱法，进行色谱条件与系统适用性的试验，将适合分离分子量为1000-5000球状蛋白的色谱用亲水硅胶作为填充剂，以体积比8515的磷酸盐缓冲液-乙腈作为流动相，流速为0.5ml/min，其中所述磷酸盐缓冲液由体积比5050的0.05mol/L磷酸氢二钠与0.05mol/L磷酸二氢钠构成，检测波长为254nm，从输液袋中取相当于包含头孢匹罗10mg的适量硫酸头孢匹罗/碳酸钠混粉，置10ml量瓶中；加水溶解并稀释至刻度，摇匀；取20μl注入液相色谱仪进行色谱测试，记录色谱图。所述检测方法先进可靠，准确度高，专属性强，作具有良好的精密度、重现性、稳定性，能够有效地检测出头孢匹罗有关物质Ⅱ，可用于质量控制。
文档编号G01N30/02GK102928525SQ20121038006
公开日2013年2月13日 申请日期2012年10月9日 优先权日2012年10月9日
发明者徐卫东, 李长宏, 陈秀艳, 杨园园 申请人:北京锐业制药有限公司