专利名称：利用管家蛋白对组织细胞蛋白进行检测的方法
技术领域：
本发明涉及一种组织细胞蛋白定量检测方法，特别涉及一种利用管家蛋白对组织细胞蛋白进行定量检测的方法。
背景技术：
以往的肿瘤治疗，特别是化疗，因为药物作用范围广泛，在杀死肿瘤细胞的同时，也杀死了大量的正常细胞，导致了难以忍受的毒副作用。随着医学研究的快速进展，科学家们逐渐开发出了针对性强、毒副作用小的肿瘤靶向治疗药物。目前，这种靶向治疗由于治疗作用好、毒副作用小越来越成为肿瘤治疗的发展趋势。然而，如何能够在临床中快速、准确的判断患者肿瘤的分子类型，进而确定该患者是否适用于某种靶向治疗方案仍是目前医学界急需解决的一个难题。以乳腺癌为例，我国大约20% -30%的乳腺癌患者为人类表皮生长因子受体-2(HER2)阳性乳腺癌。HER2阳性的患者同其他乳腺癌病人相比，肿瘤恶性程度更高，进展更快，更容易复发和向远处转移，且此类病人通常对内分泌治疗不敏感，预后较差。故几家国际制药公司研发出针对HER2阳性乳腺癌的靶向治疗药物，如赫赛汀，收到了比较好的治疗效果。然而，这类靶向药只对HER2阳性的乳腺癌患者有效，对于70% -80% HER2阴性的患者却没有任何治疗效果，如果在治疗前不及时诊断明确，不仅耽误了治疗，还会给患者背负沉重的经济负担(治疗费用)。因此，如何在最短的时间里对乳腺癌患者肿瘤组织中HER2表达水平(阴性或阳性)作出准确判断对于其靶向治疗意义重大。目前对癌细胞肿瘤组织进行检测主要采用免疫组织化学(IHC)检测HER2蛋白表达水平。虽然免疫组化(IHC)已经经过了 FDA批准，但不同的检测方法、计算的准确性和试剂的选择都会影响HER2检测的结果。美国的一项调查结果显示，近1/4患者是因检测结果不准确而接受了不恰当的治疗。IHC检测HER2蛋白过度表达的错误率平均为18%，FISH检测HER2基因扩增的错误率在13%。因此，我国病理学家根据国内外最新的研究数据讨论后达成共识，于2006年10月制订发布了我国《乳腺癌HER2检测指南》。美国临床肿瘤学会(ASCO)和美国病理学医学院(CAP)也于2006年12月11日联合发布了《乳腺癌HER2检测的ASC0/CAP指南共识》。这些指南强调了检测中易出现误差的环节、内部及外部质量控制和保证程序，旨在使HER2检测的操作程序和对结果判读的标准化，提高HER2检测的可重复性和准确性，更准确地筛选出适用于曲妥珠单抗(赫赛汀)等药物治疗的乳腺癌患者，避免无效治疗，使患者承受不必要的经济负担。另外，目前市场上有一种对瘦肉精等进行快速检测的方法一金标法。金标法是在酶联免疫吸附法的基础上发展起来的一种固相标记免疫测定新技术。其检测原理是，以微孔滤膜为载体，包被已知抗原，加入待检标本后，经滤膜的毛细管作用，标本中的抗原与胶体金结合的抗原结合，再通过与膜上包被的抗原结合显色而达到检测目的。金标法的试剂为试纸条形式，即为金标试纸条。但是，金标法不仅灵敏度太低，不同批次间的实验误差太大，而且，只能通过显色来判断被检测蛋白的有和无，不能判读被检蛋白的绝对定量或相对定量。因此，现有的金标法根本无法对组织细胞中的蛋白进行检测。所以，开发出一种对肿瘤组织中靶点蛋白表达水平进行快速、准确检测的技术，不仅在胶体免疫检测技术中属于一种突破性进展，具有重要意义，而且也具有广泛的市场应用前景。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种利用管家蛋白对组织细胞蛋白进行定量检测的方法。为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种利用管家蛋白对组织细胞蛋白进行检测的方法，其包括如下步骤I)将管家蛋白、被检测蛋白的单抗或多抗分别与胶体金或胶体银偶联，将偶联后形成的胶体金或胶体银抗体复合物滴加于试纸条的金标垫上；2)在试纸条的检测区将另外一种抗相应管家蛋白或被检测蛋白的单抗或多抗固定在试纸条上； 3)根据试纸条上管家蛋白显色与被检测蛋白显色的相对量计算相应比值，进而判断该被检测蛋白的表达水平是阴性还是阳性。优选地，所述管家蛋白为GAPDH或Actin。优选地，所述试纸条检测区上设有数个按阵列状分别的检测圆点。如上所述，本发明的利用管家蛋白对组织细胞蛋白进行检测的方法具有以下有益效果该检测方法采用在进行检测时设置管家蛋白，使管家蛋白与胶体金或胶体银偶联，最后根据试纸条上管家蛋白显色与被`检测蛋白显色的相对量计算相应比值，进而判断该被检测蛋白的表达水平是阴性还是阳性。该检测方法解决了胶体金免疫检测方法中定量的难题，提高了检测灵敏度，扩大了其在蛋白检测中的应用；另外，该检测方法相对于其它的蛋白检测技术具有速度快、精确度高等优势。
图1为本发明试纸条的主视图。图2为本发明试纸条的俯视图。元件标号说明I底板2聚脂膜3样品垫4金标垫5硝酸纤维膜6检测区61检测圆点7吸附垫
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式
加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。请参阅图1、2。需要说明的是，本实施例中所提供的图示仅以示意方式说明本发明的基本构想，所以图式中仅显示与本发明中有关的组件而非按照实际实施时的组件数目、形状及尺寸绘制，其实际实施时各组件的型态、数量及比例可为一种随意的改变，且其组件布局型态也可能更为复杂。下面以乳腺癌为例，对本发明技术方案做进一步的描述该方法包括如下步骤首先如图1、2所示,设置一试纸条,该试纸条包括底板I,底板I上设有聚脂膜2，聚酯膜2上设有硝酸纤维膜5、样品垫3、金标垫4，硝酸纤维膜5上设有检测区6、吸附垫7，在吸附垫7虹吸作用下，样品垫3上的液体可从左向右的移动。检测区6上设有多个按阵列形状分布的检测圆点61。在进行检测时，利用胶体金或胶体银与相应的管家蛋白actin、及被检测蛋白Her2的单抗或多抗分别偶联，并将偶联后形成的胶体金或胶体银抗体复合物滴加于金标垫上，在37° C环境下烘干后阴凉保存。将另外一种抗相应管家蛋白actin或被检测蛋白Her2的单抗或多抗以陈列方式固定在检测区上；5分钟检测区显色后，通过放大镜观测检测区上管家蛋白显色圆点与被检测蛋白显色圆点的个数，计算相应比值，进而判断该肿瘤细胞中被检测蛋白的表达是阳性还是阴性，进而确定是否采用以Her2为靶点的靶向治疗药物(如赫赛汀)进行治疗。该检测方法采用在进行检测时设置管家蛋白，使管家蛋白与胶体金或胶体银偶联，最后根据试纸条上管家蛋白显色与被检测蛋白显色的相对量计算相应比值，进而判断该被检测蛋白的表达水平是阴性还是阳性。该检测方法解决了胶体金免疫检测方法中对蛋白定量的难题，扩大了其在蛋白检测中的应用；另外，该检测方法相对于其它的蛋白检测技术具有速度快、重复性好、精确度高等优势。综上所述，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
权利要求
1.一种利用管家蛋白对组织细胞蛋白进行检测的方法，其特征在于，其包括如下步骤 1)将管家蛋白、被检测蛋白的单抗或多抗分别与胶体金或胶体银偶联，将偶联后形成的胶体金或胶体银抗体复合物滴加于试纸条的金标垫上； 2)在试纸条上将另外一种抗相应管家蛋白或被检测蛋白的单抗或多抗固定在试纸条的检测区； 3)根据试纸条上管家蛋白显色与被检测蛋白显色的相对量计算比值，进而判断该被检测蛋白的表达水平是阴性还是阳性。
2.根据权利要求1所述的利用管家蛋白对组织细胞蛋白进行检测的方法，其特征在于所述管家蛋白为GAPDH或Actin。
3.根据权利要求1所述的利用管家蛋白对组织细胞蛋白进行检测的方法，其特征在于所述试纸条检测区上设有数个按阵列状排列的检测圆点。
全文摘要
本发明提供一种利用管家蛋白对组织细胞蛋白进行快速检测的方法，该检测方法将管家蛋白、被检测蛋白的单抗或多抗分别与胶体金或胶体银偶联，将偶联后形成的胶体金或胶体银抗体复合物滴加于试纸条的金标垫上；在试纸条上将另外一种抗相应管家蛋白或被检测蛋白的单抗或多抗固定在试纸条的检测区，最后根据试纸条上管家蛋白显色与被检测蛋白显色的相对量计算比值，进而判断该被检测蛋白的表达水平是阴性还是阳性。该检测方法解决了胶体金免疫检测方法中定量的难题，扩大了其在蛋白检测中的应用；另外，该检测方法相对于其它的蛋白检测技术具有速度快、精确度高等优势。
文档编号G01N33/68GK103048467SQ201210520148
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月6日 优先权日2012年12月6日
发明者糜军 申请人:苏州海吉亚生物科技有限公司