一种止咳口服药物组合物的质量控制方法
【专利摘要】本发明涉及一种由百部、紫菀、前胡、桔梗、僵蚕、蝉蜕、麻黄、苦杏仁、乌梅、芦根、炙甘草组成的组合物的质量控制方法，属于药品质量控制【技术领域】。本发明质量控制方法包括鉴别、含量测定和性状检查项目中的部分或全部。其中鉴别包括百部、前胡、麻黄碱、甘草的薄层色谱鉴别，含量包括盐酸麻黄碱、甘草酸铵和原百部碱的含量测定。本发明质量控制方法精密度高，重现性好，回收率高，测量结果准确，可以有效的控制产品质量，从而保证疗效。
【专利说明】一种止咳口服药物组合物的质量控制方法
[0001]【技术领域】:本发明涉及一种具有止咳化痰、宣肺利气、疏表散邪功能的中药组合物的质量控制方法，属于药品质量控制【技术领域】。所述中药组合物的活性成分由百部、紫菀、前胡、桔梗、僵蚕、蝉蜕、麻黄、苦杏仁、乌梅、芦根、炙甘草组成。
[0002]【背景技术】:申请号为201210005887.4的中国专利申请，记载了由百部2?3.5份、紫菀1.5?3份、前胡1.5?3份、桔梗1.5?3份、僵蚕1.0?2.5份、蝉蜕0.8?2份、麻黄0.8?2份、苦杏仁1.0?2.5份、乌梅0.8?2份、芦根1.5?3份、甘草0.8?2份制成的中药组合物，该组合物具有止咳化痰、宣肺利气、疏表散邪功能。
[0003]如何快速、准确的控制该组合物的质量是急需解决的技术问题。
[0004]本发明要解决的技术问题:提供一种申请号为201210005887.4的专利所述组合物(活性组分由百部、紫菀、前胡、桔梗、僵蚕、蝉蜕、麻黄、苦杏仁、乌梅、芦根、炙甘草组成)的质量控制方法。
[0005]本发明的目的是:提供一种申请号为201210005887.4的专利所述组合物(活性组分由百部、紫菀、前胡、桔梗、僵蚕、蝉蜕、麻黄、苦杏仁、乌梅、芦根、炙甘草组成)的质量控制方法，该方法能够快速、准确的控制组合物的质量。
[0006]本发明的技术方案是:
[0007]本发明的技术方案是:申请号为201210005887.4的专利所述组合物(活性组分由百部、紫菀、前胡、桔梗、僵蚕、蝉蜕、麻黄、苦杏仁、乌梅、芦根、炙甘草组成)的质量控制方法，其特征是包括鉴别。
[0008]本发明所述鉴别包括:
[0009](I)方中百部(直立)的鉴别:
[0010]取本品10g，研细，加0.lmol/L盐酸溶液40ml冷浸过夜，超声处理10分钟，滤过，滤液以饱和氢氧化钠溶液调节PH值至12，加三氯甲烷提取3次，每次30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取直立百部4g，同法制成对照药材溶液。照中国药典一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各20 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-浓氨试液(7: 0.25: 0.1，体积比)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点。
[0011 ] 本办法阴性对照无干扰。
[0012](2)方中白花前胡的鉴别:
[0013]取本品8g，研细，加乙醚20ml冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取白花前胡对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照中国药典一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60?90°C)_醋酸乙酯(4: 2，体积比)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0014]本办法阴性对照无干扰。
[0015](3)方中麻黄所含主要成分麻黄碱的鉴别:[0016]取鉴别(I)项下的供试品溶液，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照中国药典一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比是20: 3: 0.2的三氯甲烷-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.2%茚三酮溶液，105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点。
[0017]本办法阴性对照无干扰。
[0018](4)方中炙甘草的鉴别:
[0019]取本品5g，研细，加乙醚40ml，加热回流I小时，滤过，滤液弃去，药渣加甲醇30ml，加热回流I小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照中国药典一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5 μ 1、对照药材溶液2 μ 1，分别点于同一用I %氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比是15: I: I: 2的醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0020]本办法阴性对照无干扰。
[0021]本发明的技术方案，还包括紫菀、芦根、桔梗、乌梅、苦杏仁的鉴别。
[0022]本发明紫菀的鉴别方法，其特征在于:
[0023]方法一:
[0024]供试品溶液制备:取本品粉末0.50g，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml，使溶解，即得。
[0025]对照药材溶液制备:取对照药材粉末1.0Og,同上述供试品溶液制法，制成对照药材溶液。
[0026]阴性对照溶液制备:取阴性对照粉末0.52g，同上述供试品溶液制法，制成阴性对照溶液。
[0027]按药典规定的薄层色谱法进行色谱鉴别。用石油醚-乙醚(9: I)作为展开剂，用10%硫酸乙醇溶液显色，105°C加热至斑点显色清晰。
[0028]方法二:
[0029]供试品溶液的制备:取本品4g，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml，使溶解，即得。
[0030]阴性对照溶液制备:取阴性对照粉末4g，同上述供试品溶液制法，制成阴性对照溶液。
[0031]对照药材溶液制备:取对照药材粉末1.0Og,同上述供试品溶液制法，制成对照药材溶液。
[0032]点样量:供试品溶液15ul，阴性对照15ul，对照药材5ul。
[0033]按药典规定的薄层色谱法进行色谱鉴别。用石油醚-乙醚(100: I)作展开剂，用10%硫酸乙醇溶液显色，105°C加热至斑点显色清晰。
[0034]本发明芦根的鉴别方法:其特征在于:
[0035]方法一[0036]制样方法:分别称取供试品1.00g、对照药材1.0Og,阴性对照1.0Og,加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml，使溶解，即得供试品溶液、对照药材溶液、阴性对照溶液。
[0037]按药典规定的薄层色谱法进行色谱鉴别。展开剂选自下列展开剂中的一种，用香草醛-10%硫酸乙醇溶液显色，105°C加热至斑点显色清晰。
[0038]展开剂:①三氯甲烷-甲酸(100: I);②石油醚-三氯甲烷(I: I);③石油醚-三氯甲烷(4: I);⑤石油醚-三氯甲烷(2:1)。
[0039]方法二
[0040]制样方法:分别称取芦根药材0.50g,供试品2.0Og,阴性对照2.0Og,加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml，使溶解，即得对照药材溶液、供试品溶液、阴性对照溶液。
[0041]按药典规定的薄层色谱法进行色谱鉴别。展开剂是石油醚-三氯甲烷-甲酸(4:1: 0.05)，用香草醛-10%硫酸乙醇溶液显色，105°C加热至斑点显色清晰。
[0042]本发明桔梗的鉴别方法:其特征在于:
[0043]方法一
[0044]按2010版药典桔梗项下薄层鉴别方法制备供试品溶液
[0045]取样品颗粒0.56g，加7%硫酸乙醇-水(I: 3)混合溶液20ml，加热回流3h，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，加水洗涤2次，每次30ml，弃去洗液，三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，即得供试品溶液。再分别取对照药材、阴性对照1.06g、0.55g，同供试品溶液的制备方法，分别制得对照药材溶液、阴性对照溶液。并将三种溶液分别点于同一块硅胶G薄层板上，选择以下展开剂中的一种展开，用10%硫酸乙醇溶液显色，在105°C加热至斑点显色清晰。
[0046]①展开剂:三氯甲烷-乙醚混合溶液(2:1)。
[0047]②展开剂:三氯甲烷-乙醚混合溶液(I: I)。
[0048]③展开剂:三氯甲烷-石油醚混合溶液(I: 5)。
[0049]④展开剂:三氯甲烷-石油醚混合溶液(I: I)。
[0050]方法二
[0051]直接提取皂苷类成分制备供试品溶液
[0052]取样品颗粒0.50g,加15ml水,超声IOmin,用正丁醇萃取2次,每次15ml,取正丁醇层，加热浓缩至5ml，即得供试品溶液。取阴性对照0.50g,同供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液。再取桔梗对照药材1.0g，研成粉末，加30ml水,煎煮30min,过滤,得滤液，冷却，用正丁醇萃取2次，每次20ml，取正丁醇层，加热浓缩至5ml，即得对照品溶液。并将三种溶液分别点于同一块硅胶G薄层板上，选用下列展开剂中的一种展开，用10%硫酸乙醇溶液显色，在105°C加热至斑点显色清晰。
[0053]①展开剂:正丁醇-乙酸乙酯-水混合溶液(4: I: 5)，上层。
[0054]②展开剂:正丁醇-乙酸乙酯-水(I: 4: 5)，上层。
[0055]③展开剂:三氯甲烷-甲醇-水混合溶液(13: 7: 2)，下层。
[0056]④展开剂:三氯甲烷-甲醇-水混合溶液(15: 5: 2)，下层。
[0057]⑤展开剂:三氯甲烷-甲醇-水混合溶液(9: I: 1)，下层。[0058]本发明乌梅的鉴别方法:其特征在于:
[0059]方法一
[0060]取样品颗粒1.0Og,加甲醇25ml,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残洛加乙酸乙酯1ml，使溶解，作为供试品溶液。再取阴性对照1.00g，取乌梅药材(乌梅肉)1.00g，砸成碎片，同供试品溶液的制备方法，分别制得对照药材溶液、阴性对照溶液。并将三种溶液分别点于同一块硅胶G薄层板上，选择下列展开剂中的一种展开，用香草醛-浓硫酸溶液显色，在105°C加热至斑点显色清晰。
[0061]①展开剂:三氯甲烷-丙酮-甲酸混合溶液(5: 2: 0.8)。
[0062]②展开剂:环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶液(4:1: 0.1)。
[0063]③展开剂:三氯甲烷-丙酮-甲酸混合溶液(9: 0.5: 0.5)。
[0064]④展开剂:三氯甲烷。
[0065]⑤展开剂:三氯甲烷-丙酮混合溶液(50: I)。
[0066]⑥展开剂:三氯甲烷-甲酸混合溶液(100: I)。
[0067]方法二
[0068]按提取有机酸的方法:分别取供试品1.0Og,阴性对照1.04g,对照药材1.06g,研成粉末，加稀盐酸20ml，超声处理30min，取上清液，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚液，挥干溶剂，残渣加无水乙醇1ml，使溶解，即分别制得供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液。并将三种溶液分别点于同一块硅胶G薄层板上，选择下列展开剂中的一种展开，并显色，观察。
[0069]①展开剂:环己烷-二氯甲烷-冰醋酸混合溶液(8: 8: I)
[0070]显色:I %三氯化铁乙醇溶液与I %铁氰化钾溶液等量混合(现配)，可见光检视。
[0071]②展开剂:环己烷-三氯甲烷(I: 10)，显色:香草醛-浓硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。
[0072]③展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶液(1: 5: 5)。
[0073]④展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶液(I: 5: 5)，+2滴甲酸。
[0074]⑤展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶液(I: 2: 2)，+2滴甲酸。
[0075]⑥展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶液(I: 2: 4)，+4滴甲酸。
[0076]⑦展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶液(I: I: 1)，+4滴甲酸。
[0077]⑧展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸混合溶液(4:1:1: 0.1)。
[0078]选择③-⑧所述的展开剂展开时，用5%香草醛-浓硫酸溶液显色，在105°C加热至斑点显色清晰。
[0079]方法三
[0080]按药典方法:分别取供试品4.0Og,阴性对照4.0Og,对照药材1.0Og,研成粉末,力口甲醇30ml，超声处理30min，滤过，取滤液，蒸干，残渣加20ml水，溶解，再加乙醚萃取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣用石油醚浸泡2次，每次15ml，倾去石油醚，残渣用2ml无水乙醇溶解，即分别制得供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液。并将三种溶液分别点于同一块硅胶G薄层板上，选择下列展开剂中的一种展开，用10%硫酸乙醇溶液显色，在105°C加热至斑点显色清晰。
[0081]①展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸混合溶液(20: 5: 8: 0.1)，显色:
[0082]②展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶液(I: I: 1)，+1滴甲酸。
[0083]③展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶液(I: 3: 3)，+2滴甲酸。
[0084]本发明苦杏仁的鉴别方法:其特征在于:
[0085]按药典方法制样:分别取样品5.51g,对照药材1.03g,阴性对照5.35g,置索氏提取器中，加入50ml 二氯甲烧,加热回流2h,弃去二氯甲烧液,药洛挥干,再加甲醇50ml,加热回流40min，放冷，滤过，得滤液，回收甲醇，浓缩至15ml，即得三种溶液。并将三种溶液分别点于同一块硅胶G薄层板上，若选择下列(1)-(5)展开剂中的一种展开，用0.8%磷钥酸的15%硫酸乙醇溶液浸板显色，105°C加热至斑点显色清晰；若选择展开剂(6)展开，用0.8%磷钥酸的15%硫酸乙醇溶液浸板显色，105°C加热至斑点显色清晰；若选择展开剂(7)展开，用香草醛浓硫酸显色，105°C加热至斑点显色清晰。
[0086](I)三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合溶液(15: 40: 22: 10)，下层，5?10°C 放置 12h。
[0087](2)三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合溶液(2: 4:1: 1)，下层。
[0088](3)三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合溶液(4: I: I: 1)，下层。
[0089](4)三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合溶液(8: I: 0.5: I),下层。
[0090](5)三氯甲烷。
[0091](6)三氯甲烷-甲醇混合溶液(1:1)。
[0092](7)三氯甲烷-甲醇混合溶液(1:5)。
[0093]本发明僵蚕和蝉蜕的鉴别方法:其特征在于:
[0094]僵蚕、蝉蜕双阴性对照溶液的制备:称取百部16.59g、前胡12.52g、麻黄6.24g、苦杏仁 9.38g，70% 乙醇回流 3 次(358ml X 2h, 234ml X lh, 234ml X 0.5h)，合并提取液，滤过，
滤液减压回收乙醇浓缩至稠膏状，稠膏备用。
[0095]称取紫菀12.50g、桔梗12.48g、甘草6.25g、芦根12..52g、乌梅6.21g，水煎煮2次(600ml X lh，500ml Xlh)，合并水煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.03- 1.05 (50°C ),再加入乙醇使醇含量达60% (浓缩后体积50ml，乙醇用量为75ml)，静置24h，取上清液滤过，滤液减压回收乙醇浓缩至稠膏状，稠膏备用。
[0096]将两种稠膏混匀，得阴性稠膏。
[0097]称取阴性稠膏1.28g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇5ml，密塞，超声处理30min，滤过，取续滤液即得。
[0098]供试品溶液的制备:称取样品颗粒3.19g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇5ml，密塞，超声处理30min，滤过，取续滤液即得。
[0099]僵蚕对照药材溶液制备:取僵蚕对照药材0.64g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇5ml，密塞，超声处理30min，滤过，取续滤液即得。
[0100]蝉蜕对照药材溶液制备:取蝉蜕对照药材0.40g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇5ml，密塞，超声处理30min，滤过，取续滤液即得。
[0101]按药典规定的薄层色谱法进行色谱鉴别。其中，展开剂选自下列展开剂中的一种，用茚三酮溶液(0.1lg — 54ml乙醇)显色。
[0102]①展开剂:正丁醇-冰醋酸-水混合溶液(8: 3: 3)。[0103]②展开剂:正丁醇-冰醋酸-水混合溶液(8: 3: 3)。
[0104]③展开剂:正丁醇-冰醋酸-水混合溶液(3:1: 1.2)。
[0105]本发明所述技术方案，还包括盐酸麻黄碱含量的测定。
[0106]色谱条件与系统适用性:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水-乙腈-磷酸-十二烷基硫酸钠(520ml: 480ml: lml: 5克)为流动相(流动相配制时，要先用水将十二烷基硫酸钠溶解，再依次按比例加入乙腈、磷酸，混匀，用0.45 μ m微孔滤膜滤过，即得);检测波长为21Onm ;柱温25。。，流速1.0ml/min。
[0107]本发明优选的技术方案是理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于5000。
[0108]对照品溶液的制备:取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含
0.043mg的溶液，即得。
[0109]供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品，研细，取lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入1%盐酸-甲醇溶液20ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率20kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用1%盐酸-甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μ m)滤过，取续滤液，即得。
[0110]测定:分别精密量取对照品溶液、供试品溶液各?ομ 1，分别注入液相色谱仪，测定，即得。该含量测定照中国药典附录VID高效液相色谱法的相关规定测定。
[0111]本发明所述技术方案，还包括甘草酸铵含量的测定。
[0112]色谱条件与系统适`用性:色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(HypersilODS, 4.6mmX250mm,5ym);流动相:乙睛-0.05%磷酸水溶液(35: 65);检测波长:250nm ;流速:1.0ml/min ;柱温:室温。
[0113]供试品溶液的制备:取样品颗粒(20111101批)约1.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，密塞，称重，超声处理(250w，40kHZ)30分钟，放冷，再称定重量，用70 %乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0114]对照品溶液的制备:取甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1ml含甘草酸铵0.2mg的溶液，再稀释10倍即得。
[0115]测定:分别吸取甘草酸铵对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μ 1，分别进样，测定，即得。该含量测定照中国药典附录VI D高效液相色谱法的相关规定测定。
[0116]本发明所述技术方案，还包括原百部碱含量的测定。
[0117]色谱条件:色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Hypersil ODS,4.6mmX250mm,5ym);流动相:乙睛-0.1 %三乙胺水溶液(36: 64);检测波长:305nm ;流速:1.0ml/min ;柱温:室温。
[0118]供试品溶液的制备:取样品约1.5g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入50ml甲醇，密塞，称重，超声30min，放冷后，再称重，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。
[0119]对照品溶液的制备:精密称取原百部碱对照品0.0054g，置容量瓶中，用甲醇定容至10ml，使溶解，摇匀，再从中精密吸取1ml，稀释10倍，即得0.054mg/ml的原百部碱对照品溶液。
[0120]测定:分别吸取供试品溶液、对照品溶液各10ul，分别进样，测定。该含量测定照中国药典附录VID高效液相色谱法的相关规定测定。[0121]本发明的技术方案还包括:性状的检查。
[0122]性状:本品为棕褐色的颗粒；气微香，味酸甜、微苦。
[0123]本发明的有益效果是:提供了一种活性成分由百部、紫菀、前胡、桔梗、僵蚕、蝉蜕、麻黄、苦杏仁、乌梅、芦根、炙甘草组成的中药组合物的质量控制方法，该方法包括鉴别、含量测定和性状检查项目中的部分或全部。其中鉴别包括百部、前胡、麻黄碱、甘草的薄层色谱鉴别，含量包括盐酸麻黄碱的含量测定。本发明质量控制方法精密度高，重现性好，回收率高，测量结果准确，能够快速、准确的控制组合物的质量，从而保证疗效。
【专利附图】
【附图说明】
[0124]图1，盐酸麻黄碱含量标准曲线。
[0125]图2，甘草酸铵含量测定专属性实验色谱图，其中:图2A，甘草酸铵对照品专属性实验色谱图；图2B，供试品专属性实验色谱图；图2C，阴性对照专属性实验色谱图。
[0126]图3，甘草酸铵的标准曲线。
[0127]图4，原百部碱含量测定专属性试验HPLC色谱图，其中:图4A原百部碱对照品专属性实验色谱图；4B供试品专属性实验色谱图；图4C阴性对照专属性实验色谱图。
[0128]图5，原百部碱标准曲线。
实施例
[0129]实施例1按技术方案部分鉴别项下的规定，对按申请号为201210005887.4发明专利申请制备的样品201101、201102、201103三批组合物进行鉴别，结果记录于表1。
[0130]表1三批样品鉴别(I)、⑵、⑶、⑷检验结果
[0131]
【权利要求】
1.一种由百部、紫菀、前胡、桔梗、僵蚕、蝉蜕、麻黄、苦杏仁、乌梅、芦根、炙甘草组成的组合物的质量控制方法，其特征是包括百部的鉴别，前胡的鉴别，麻黄碱的鉴别，灸甘草的鉴别，盐酸麻黄碱含量的测定。
2.权利要求1所述组合物的质量控制方法，其中: (1)百部的鉴别方法是:取本品10g，研细，加0.lmol/L盐酸溶液40ml冷浸过夜，超声处理10分钟，滤过，滤液以饱和氢氧化钠溶液调节pH值至12，加三氯甲烷提取3次，每次30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液； 另取直立百部4g，同法制成对照药材溶液；照中国药典一部附录VIB规定的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各20 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为7: 0.25: 0.1的醋酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点； (2)前胡的鉴别方法是:取本品Sg，研细，加乙醚20ml冷浸过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液； 另取白花前胡对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照中国药典一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4: 2的60~90°C石油醚-醋酸乙酯做展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (3)麻黄碱的鉴别方法是:取权利要求3的供试品溶液，作为供试品溶液；另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶液，照中国药典一部附录VI B薄层色谱法试验，吸 取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为20: 3: 0.2的三氯甲烷-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.2%茚三酮溶液，105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点； (4)灸甘草的鉴别方法是:取本品5g，研细，加乙醚40ml，加热回流I小时，滤过，滤液弃去，药渣加甲醇30ml，加热回流I小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5 μ 1、对照药材溶液2 μ 1，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为15: I: I: 2的醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.权利要求1所述组合物的质量控制方法，其特征在于，盐酸麻黄碱含量的测定方法是: 色谱条件与系统适用性:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水-乙腈-磷酸-十二烷基硫酸钠为流动相，检测波长为210nm ;柱温25°C，理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于5000 ;其中，流动相的比例是水520ml,乙腈480ml:磷酸1ml，十二烷基硫酸钠5克； 流动相配制方法:用水将十二烷基硫酸钠溶解，再依次按比例加入乙腈、磷酸，混匀，用·0.45 μ m微孔滤膜滤过，即得； 对照品溶液的制备:取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含，0.043mg的溶液，即得；供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品，研细，取lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入1%盐酸-甲醇溶液20ml，密塞，称定重量，超声处理频率30分钟，放冷，再称定重量，用I %盐酸-甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，用0.45 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；测定:分别精密量取对照品溶液、供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，按药典规定的高效液相色谱法测定，即得。
4.权利要求1所述组合物的质量控制方法，包括性状的检查，其特征在于，组合物性状为棕褐色的颗粒；气微香，味酸甜、微苦。
5.权利要求1所述组合物的质量控制方法，其特征在于还包括甘草酸铵含量的测定。
6.权利要求5所述组合物的质量控制方法，其特征在于甘草酸铵含量测定方法是: 色谱条件与系统适用性:色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂Hypersil ODS,，4.6mmX 250mm, 5 μ m ;流动相:乙睛-0.05%磷酸水溶液为35: 65 ;检测波长:250nm ;流速:，1.0ml/min ;柱温:室温； 供试品溶液的制备:取样品颗粒约1.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，密塞，称重，超声处理250w，40kHZ 30分钟，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 对照品溶液的制备:取甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1ml含甘草酸铵0.2mg的溶液，再稀释10倍即得； 测定法:分别吸取甘草酸铵对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μ 1，分别进样，照中国药典 附录VI D高效液相色谱法的相关规定测定。
7.权利要求1所述组合物的质量控制方法，其特征在于还包括原百部碱含量的测定。
8.权利要求7所述组合物的质量控制方法，其特征在于原百部碱含量的测定方法是: 色谱条件:色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂Hypersil ODS, 4.6mmX 250mm,，5μ m ;流动相:乙睛-0.1 %三乙胺水溶液为36: 64 ;检测波长:305nm ;流速:1.0ml/min ；柱温:室温； 供试品溶液的制备:取样品约1.5g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入50ml甲醇，密塞，称重，超声30min，放冷后，再称重，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液； 对照品溶液的制备:精密称取原百部碱对照品0.0054g，置容量瓶中，用甲醇定容至，10ml，使溶解，摇匀，再从中精密吸取1ml，稀释10倍，即得0.054mg/ml的原百部碱对照品溶液； 测定:分别吸取供试品溶液、对照品溶液各10ul，分别进样，照中国药典附录VI D高效液相色谱法的相关规定测定。
9.权利要求1所述组合物的质量控制方法，其特征在于还包括紫菀的鉴别方法，其特征在于: 方法一: 供试品溶液制备:取本品粉末0.50g，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml，使溶解，即得； 对照药材溶液制备:取对照药材粉末1.0Og,同上述供试品溶液制法，制成对照药材溶液； 阴性对照溶液制备:取阴性对照粉末0.52g，同上述供试品溶液制法，制成阴性对照溶液； 按药典规定的薄层色谱法进行色谱鉴别，用9: I的石油醚-乙醚溶液作为展开剂，用.10%硫酸乙醇溶液显色，105°C加热至斑点显色清晰； 方法二: 供试品溶液的制备:取本品4g，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯lml，使溶解，即得； 阴性对照溶液制备:取阴性对照粉末4g，同上述供试品溶液制法，制成阴性对照溶液； 对照药材溶液制备:取对照药材粉末1.0Og,同上述供试品溶液制法，制成对照药材溶液； 点样量:供试品溶液15ul，阴性对照15ul，对照药材5ul ； 按药典规定的薄层色谱法进行色谱鉴别，用100: I的石油醚-乙醚溶液作展开剂，用.10%硫酸乙醇溶液显色，105°C加热至斑点显色清晰。
10.权利要求1所述组合物的质量控制方法,其特征在于还包括芦根、桔梗、乌梅、苦杏仁、僵蚕和蝉蜕的鉴别:其特征在于: 芦根的鉴别:` 方法一 制样方法:分别称取供试品1.00g、对照药材1.00g、阴性对照1.0Og,加甲醇25ml,超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml，使溶解，即得供试品溶液、对照药材溶液、阴性对照溶液； 按药典规定的薄层色谱法进行色谱鉴别，展开剂选自下列展开剂中的一种，用香草醛-10%硫酸乙醇溶液显色，105°C加热至斑点显色清晰； 展开剂:①三氯甲烷-甲酸混合溶液，体积比100: I 石油醚-三氯甲烷混合溶液，体积比1:1 ;③石油醚-三氯甲烷混合溶液，体积比4: I ;⑤石油醚-三氯甲烷混合溶液，体积比2: I ； 方法二 制样方法:分别称取芦根药材0.50g，供试品2.0Og,阴性对照2.00g，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml，使溶解，即得对照药材溶液、供试品溶液、阴性对照溶液； 按药典规定的薄层色谱法进行色谱鉴别，展开剂是石油醚-三氯甲烷-甲酸混合溶液，体积比4: I: 0.05，用香草醛-10%硫酸乙醇溶液显色，105°C加热至斑点显色清晰；桔梗的鉴别: 方法一 按2010版药典桔梗项下薄层鉴别方法制备供试品溶液:取样品颗粒0.56g，加体积比是1: 3的7%硫酸乙醇-水的混合溶液20ml，加热回流3h，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，加水洗涤2次，每次30ml，弃去洗液，三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，即得供试品溶液。再分别取对照药材、阴性对照1.06g、0.55g，同供试品溶液的制备方法，分别制得对照药材溶液、阴性对照溶液，并将三种溶液分别点于同一块硅胶G薄层板上，选择以下展开剂中的一种展开，用10%硫酸乙醇溶液显色，在105°C加热至斑点显色清晰； ①展开剂:三氯甲烷-乙醚混合溶液，体积比2: I ； ②展开剂:三氯甲烷-乙醚混合溶液，体积比1:1; ③展开剂:三氯甲烷-石油醚混合溶液，体积比1: 5; ④展开剂:三氯甲烷-石油醚混合溶液，体积比1:1; 方法二 直接提取皂苷类成分制备供试品溶液:取样品颗粒0.50g，加15ml水，超声lOmin，用正丁醇萃取2次，每次15ml，取正丁醇层，加热浓缩至5ml，即得供试品溶液；取阴性对照.0.50g,同供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；再取桔梗对照药材1.0g，研成粉末，加.30ml水，煎煮30min，过滤，得滤液，冷却，用正丁醇萃取2次，每次20ml，取正丁醇层，加热浓缩至5ml，即得对照品溶液；并将三种溶液分别点于同一块硅胶G薄层板上，选用下列展开剂中的一种展开，用10%硫酸乙醇溶液显色，在105°C加热至斑点显色清晰； ①展开剂:正丁醇-乙酸乙酯-水混合溶液，体积比4: I: 5，上层； ②展开剂:正丁醇-乙酸乙酯-水混合溶液，体积比1: 4: 5，上层； ③展开剂:三氯甲烷-甲醇-水混合溶液，体积比13: 7: 2，下层； ④展开剂:三氯甲烷-甲醇-水混合溶液，体积比15: 5: 2，下层；` ⑤展开剂:三氯甲烷-甲醇-水混合溶液，体积比9: I: 1，下层； 乌梅的鉴别: 方法一 取样品颗粒1.0Og,加甲醇25ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯.lml，使溶解，作为供试品溶液；再取阴性对照1.00g，取乌梅药材1.00g，砸成碎片，同供试品溶液的制备方法，分别制得对照药材溶液、阴性对照溶液；并将三种溶液分别点于同一块硅胶G薄层板上，选择下列展开剂中的一种展开，用香草醛-浓硫酸溶液显色，在105°C加热至斑点显色清晰； ①展开剂:三氯甲烷-丙酮-甲酸混合溶液，体积比5: 2: 0.8； ②展开剂:环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶液，体积比4: I: 0.1 ； ③展开剂:三氯甲烷-丙酮-甲酸混合溶液，体积比9: 0.5: 0.5； ④展开剂:三氯甲烷； ⑤展开剂:三氯甲烷-丙酮混合溶液，体积比50: I ； ⑥展开剂:三氯甲烷-甲酸混合溶液，体积比100: I ； 方法二 按提取有机酸的方法:分别取供试品1.0Og,阴性对照1.04g，对照药材1.06g，研成粉末，加稀盐酸20ml，超声处理30min，取上清液，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚液，挥干溶剂，残渣加无水乙醇1ml，使溶解，即分别制得供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液；并将三种溶液分别点于同一块硅胶G薄层板上，选择下列展开剂中的一种展开，并显色，观察； ①展开剂:环己烷-二氯甲烷-冰醋酸混合溶液，体积比8:8:1; 显色:I %三氯化铁乙醇溶液与I %铁氰化钾溶液等量混合(现配)，可见光检视；②展开剂:环己烷-三氯甲烷混合溶液，体积比1: 10，显色:香草醛-浓硫酸溶液，在.`105°C加热至斑点显色清晰； ③展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶液，体积比1:5:5; ④展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶液，体积比1: 5: 5，+2滴甲酸； ⑤展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶液，体积比1: 2: 2，+2滴甲酸； ⑥展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶液，体积比1: 2: 4，+4滴甲酸； ⑦展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶液，体积比1:1: 1，+4滴甲酸； ⑧展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸混合溶液，体积比4: I: I: 0.1 ； 选择③-⑧所述的展开剂展开时，用5%香草醛-浓硫酸溶液显色，在105°C加热至斑点显色清晰； 方法二 按药典方法:分别取供试品4.0Og,阴性对照4.00g，对照药材1.00g，研成粉末，加甲醇.30ml，超声处理30min，滤过，取滤液，蒸干，残渣加20ml水，溶解，再加乙醚萃取2次，每次.20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣用石油醚浸泡2次，每次15ml，倾去石油醚，残渣用2ml无水乙醇溶解，即分别制得供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液，并将三种溶液分别点于同一块硅胶G薄层板上，选择下列展开剂中的一种展开，用10%硫酸乙醇溶液显色，在105°C加热至斑点显色清晰； ①展开剂:环己烷-二氯甲`烷-乙酸乙酯-甲酸混合溶液，体积比20: 5: 8: 0.1; ②展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶液，体积比1:1: 1，+1滴甲酸； ③展开剂:环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶液，体积比1: 3: 3，+2滴甲酸； 苦杏仁的鉴别: 按药典方法制样:分别取样品5.51g，对照药材1.03g,阴性对照5.35g，置索氏提取器中，加入50ml 二氯甲烧,加热回流2h,弃去二氯甲烧液,药洛挥干,再加甲醇50ml,加热回流40min，放冷，滤过，得滤液，回收甲醇，浓缩至15ml，即得三种溶液。并将三种溶液分别点于同一块硅胶G薄层板上，若选择下列(1)-(5)展开剂中的一种展开，用0.8%磷钥酸的15%硫酸乙醇溶液浸板显色，105°C加热至斑点显色清晰；若选择展开剂(6)展开，用0.8%磷钥酸的15%硫酸乙醇溶液浸板显色，105°C加热至斑点显色清晰；若选择展开剂(7)展开，用香草醛浓硫酸显色，105°C加热至斑点显色清晰； (1)三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合溶液，体积比15: 40: 22: 10，下层，5~.`10°C放置 12h ； (2)三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合溶液，体积比2: 4: I: 1，下层； (3)三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合溶液，体积比4: I: I: 1，下层； (4)三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合溶液，体积比8: I: 0.5: 1，下层； (5)三氯甲烷； (6)三氯甲烷-甲醇混合溶液，体积比1:1; (7)三氯甲烷-甲醇混合溶液，体积比1:5; 僵蚕和蝉蜕的鉴别 僵蚕、蝉蜕双阴性对照溶液的制备:称取百部16.59g、前胡12.52g、麻黄6.24g、苦杏仁`.9.38g，70%乙醇回流3次，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇浓缩至稠膏状，稠膏备用；称取紫菀12.50g、桔梗12.48g、甘草6.25g、芦根12.52g、乌梅6.21g，水煎煮2次，合并水煎液，滤过，滤液浓缩至50°C相对密度为1.03~1.05，再加入乙醇使醇含量达60%，静置.24h，取上清液滤过，滤液减压回收乙醇浓缩至稠膏状，稠膏备用； 将两种稠膏混匀，得阴性稠膏；称取阴性稠膏1.28g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇5ml，密塞，超声处理30min，滤过，取续滤液即得； 供试品溶液的制备:称取样品颗粒3.19g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇5ml，密塞，超声处理30min，滤过，取续滤液即得； 僵蚕对照药材溶液制备:取僵蚕对照药材0.64g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇.5ml，密塞，超声处理30min，滤过，取续滤液即得； 蝉蜕对照药材溶液制备:取蝉蜕对照药材0.40g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇.5ml，密塞，超声处理30min，滤过，取续滤液即得； 按药典规定的薄层色谱法进行色谱鉴别，展开剂选自下列展开剂中的一种，用2.04mg/ml的茚三酮乙醇溶液显色； ①展开剂:正丁醇-冰醋酸-水混合溶液，体积比8:3:3; ②展开剂:正丁醇-冰醋酸-水混合溶液，体积比8:3:3; ③展开剂:正丁醇-冰醋酸-水混合溶液，`体积比3:1: 1.2。
【文档编号】G01N30/02GK103869041SQ201210549017
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2012年12月8日 优先权日:2012年12月8日
【发明者】陈云鹏, 张丽丽, 李颖, 宋杰 申请人:迪沙药业集团有限公司, 迪沙药业集团山东迪沙药业有限公司, 威海迪素制药有限公司