专利名称：一种经酸水解研究蓝莓果化学组分的方法
技术领域：
本发明涉及一种蓝莓果化学组分研究的方法，尤其是涉及一种蓝莓果化学组分提取物经水解后采用气相色谱质谱联用(GC-MS)柱前衍生化法研究其组分的方法。
背景技术：
蓝莓是世界粮农组织推荐的五大健康水果之一，具有很强的抗氧化能力；能够预防高血压、高血脂及肥胖，特别是对眼睛的健康有特别的好处。蓝莓中含有丰富的多酚类、黄酮类以及多糖类物质，特别是其中的花青素具有促进视力的功效，是提供蓝莓保健功效的重要因子。对蓝莓果的化学组分的研究是合理利用蓝莓资源的基础。近年来，蓝莓果实中的化学组分的结构鉴定引起了越来越多研究者的广泛兴趣。到目前为止，研究者多数使用液相色谱质谱联用仪(HPLC-MS)为研究手段，少量研究者用核磁共振仪(NMR)研究其化学组分结构。气相色谱质谱联用仪(GC-MS)是另一种广谱的化学组分研究手段，具有线性范围宽、灵敏度高、使用成本低、应用广泛的特点，而迄今尚未有相关手段研究蓝莓化学组分的报道。为了更全面细致地研究蓝莓果化学组分，需尝试开发一种GC-MS研究其化学组分的快捷、简便、经济、实用的新方法。本研究以采用高效、快捷、简便、经济的手段研究蓝莓果化学组分为研究目标，将蓝莓果化学组分提取物经水解后采用GC-MS柱前衍生化法研究其组分，为全面细致地研究蓝莓果化学组分提供工艺参数，为合理利用生物量丰富的蓝莓资源提供指导。
发明内容
本发明旨在以我国资源十分丰富的蓝莓果为原料，开发一种将蓝莓果化学组分提取物经水解后采用GC-MS柱前衍生化法研究其组分的简便、经济、实用的新方法。一种将蓝莓果化学组分提取物经水解后采用GC-MS柱前衍生化法研究其组分的方法，其流程示意图见图1，其特征在于；I)制备蓝莓果化学组分提取液将蓝莓鲜果用榨汁机研磨，得到蓝莓果泥，准确称量蓝莓果泥5g左右，用不同体系不同配比的有机溶液作为提取液浸没果泥，室温浸提2小时，1500rpm离心10分钟,取上清液，该上清液为蓝莓果化学组分提取液，其中所述不同体系不同配比的有机溶液的体积为100-200mL，所述的不同体系不同配比的有机溶液有四种，第一种为含甲酸的甲醇溶液，所述的甲醇溶液中含甲酸的体积百分比为O. 1-1% ;第二种为甲醇溶液，所述的甲醇溶液的体积浓度(V/V)为30% -60% ;第三种为丙酮溶液，所述的丙酮溶液的体积浓度(V/V)为40% -70% ;第四种为乙醇溶液，所述的乙醇溶液的体积浓度(V/V)为30% -60% ;(2)提取物水解准确量取上述蓝莓果化学组分提取液O. 5mL,置于5mL磨口玻璃离心管中，加入O. 5mL三氟乙酸溶液，80-120°C保温1_3小时，取出离心管，冷却至室温，IOOOrpm离心4分钟，将上层清液移至IOOmL鸡心瓶中，减压蒸馏，得到透亮紫红色的贴壁物，将此贴壁物用ImL甲醇溶解，得到水解物溶液，所述的三氟乙酸溶液的浓度为4moL/L，所述减压蒸馏的水浴温度45度，真空度为O. 09Mpa ；(3)水解物衍生化将ImL水解物溶液置于离心中，用氮吹仪吹干，再加入O.1-1mL BSTFA衍生化试齐U，放入烘箱中，60-100°C保温lh，取出后冷却至室温，得到衍生化溶液；(4) GCMS仪测试衍生化溶液设置GCMS仪器条件，测试衍生化溶液，得到衍生化溶液总离子流图、各峰所对应的化合物质谱图等数据信息，所述的GCMS仪器条件为Rtx-5石英毛细管柱，进样口温度280°C，分流比10 1，程序升温，接口温度250°C，进样量I微升，所述的程序升温程序为柱初温100°C，升温速率6°C /min,升至250°C，继续升温，速率15°C /min,升至280°C，保持时间 20min ；(5)获得蓝莓果化合物组分信息利用得到衍生化溶液数据信息，利用图谱库检索和人工图谱解析确定化合物结构。
图1.蓝莓果化学组分提取物经水解后采用GC-MS柱前衍生化法研究其组分的流程示意2. O.1 %甲酸的甲醇溶液提取物经水解及衍生化后的GC-MS总离子流3. 30%甲醇溶液提取物经水解衍生化后的GC-MS总离子流4.丙酮水乙酸溶液提取物经水解衍生化后的GC-MS总离子流5. 50%乙醇溶液提取物经水解衍生化后的GC-MS总离子流图
具体实施例方式以下，关于本发明的一种蓝莓果化学组分研究的方法，基于实施方式进行说明。一种将蓝莓果化学组分提取物经水解后采用GC-MS柱前衍生化法研究其组分的方法，其步骤为(I)制备蓝莓果化学组分提取液将蓝莓鲜果用榨汁机研磨，得到蓝莓果泥；准确称量蓝莓果泥5g左右，用不同体系不同配比的有机溶液作为提取液浸没果泥，室温浸提2小时，1500rpm离心10分钟,取上清液，该上清液为蓝莓果化学组分提取液，其中所述不同体系不同配比的有机溶液的体积为100-200mL，所述的不同体系不同配比的有机溶液有四种，第一种为含甲酸的甲醇溶液，所述的甲醇溶液中含甲酸的体积百分比为O. 1-1% ;第二种为甲醇溶液，所述的甲醇溶液的体积浓度(V/V)为30% -60% ;第三种为丙酮溶液，所述的丙酮溶液的体积浓度(V/V)为40% -70% ;第四种为乙醇溶液，所述的乙醇溶液的体积浓度(V/V)为30% -60% ;(2)提取物水解准确量取上述蓝莓果化学组分提取液O. 5mL，置于5mL磨口玻璃离心管中，加入
O.5mL三氟乙酸溶液，80-120°C保温1_3小时；取出离心管，冷却至室温，IOOOrpm离心4分钟，将上层清液移至IOOmL鸡心瓶中，减压蒸馏，得到透亮紫红色的贴壁物，将此贴壁物用ImL甲醇溶解，得到水解物溶液，所述的三氟乙酸溶液的浓度为4moL/L，所述减压蒸馏的水浴温度45°C，真空度为O. 09Mpa ；(3)水解物衍生化将ImL水解物溶液置于离心中，用氮吹仪吹干，再加入O.1-1mL BSTFA衍生化试齐U，放入烘箱中，60-100°C保温lh，取出后冷却至室温，得到衍生化溶液；⑷GCMS仪测试衍生化溶液设置GCMS仪器条件，测试衍生化溶液，得到衍生化溶液总离子流图、各峰所对应的化合物质谱图等数据信息，所述的GCMS仪器条件为Rtx-5石英毛细管柱，进样口温度280°C，分流比10 1，程序升温，接口温度250°C，进样量I微升，所述的程序升温程序为柱初温100°C，升温速率6°C /min,升至250°C，继续升温，速率15°C /min,升至280°C，保持时间 20min ；(5)获得蓝莓果化合物组分信息利用得到衍生化溶液数据信息，利用图谱库检索和人工图谱解析确定化合物结构。这种蓝莓果化学组分研究方法，能够得到丰富的蓝莓果组分结构信息，主要包括醇类、酸类、酯类、小分子糖类、酮类、酸类等化合物。实施例1将爱国者蓝莓鲜果用榨汁机研磨,准确称量果泥5g，用含甲酸O. 1%的甲醇溶液IOOmL浸没果泥，室温浸提2小时，1500rpm离心10分钟，取上清液；准确量取上清液O. 5mL,置于5mL磨口玻璃离心管中，加入O. 5mL浓度为4moL/L的三氟乙酸溶液，80°C保温2小时；取出离心管，冷却至室温，IOOOrpm离心4分钟，将上层清液移至IOOmL鸡心瓶中，减压蒸馏，得到透亮紫红色的贴壁物，将此贴壁物用ImL甲醇溶解后置于离心管中，用氮吹仪吹干，力口入O. 5mL BSTFA，将离心管放入烘箱中，80°C保温lh，得到衍生化溶液；使用GCMS仪测试衍生化溶液，得到衍生化溶液总离子流图，见图2，通过图谱库检索和人工图谱解析共鉴定出41个化合物结构，其中包括酸类化合物10个、醇类化合物2个、酚类化合物I个、酯类化合物5个、小分子糖类化合物13个、酮类化合物2个、其他类化合物8个。实施例2将爱国者蓝莓鲜果用榨汁机研磨,准确称量果泥5g,用30%甲醇溶液150mL浸没果泥，室温浸提2小时，1500rpm离心10分钟，取上清液；准确量取上清液O. 5mL,置于5mL磨口玻璃离心管中，加入O. 5mL浓度为4moL/L的三氟乙酸溶液，100°C保温I小时；取出离心管，冷却至室温，IOOOrpm离心4分钟，将上层清液移至IOOmL鸡心瓶中，减压蒸馏，得到透亮紫红色的贴壁物，将此贴壁物用ImL甲醇溶解后置于离心管中，用氮吹仪吹干，加入O. 5mLBSTFA，将离心管放入烘箱中，100°C保温lh，得到衍生化溶液；使用GCMS仪测试衍生化溶液，得到衍生化溶液总离子流图，见图3，通过图谱库检索和人工图谱解析共鉴定出56个化合物结构，其中包括酸类化合物14个、醇类化合物2个、酚类化合物I个、酯类化合物7个、小分子糖类化合物14个、酮类化合物I个、烷烃类化合物4个、其他类化合物13个。实施例3.将爱国者蓝莓鲜果用榨汁机研磨，准确称量果泥5g，用50 %丙酮溶液IOOmL浸没果泥，室温浸提2小时，1500rpm离心10分钟，取上清液；准确量取上清液O. 5mL,置于5mL磨口玻璃离心管中，加入O. 5mL浓度为4moL/L的三氟乙酸溶液，80°C保温2小时；取出离心管，冷却至室温，IOOOrpm离心4分钟，将上层清液移至IOOmL鸡心瓶中，减压蒸馏，得到透亮紫红色的贴壁物，将此贴壁物用ImL甲醇溶解后置于离心管中，用氮吹仪吹干，加入ImLBSTFA，将离心管放入烘箱中，100°C保温lh，得到衍生化溶液；使用GCMS仪测试衍生化溶液，得到衍生化溶液总离子流图，见图4，通过图谱库检索和人工图谱解析共鉴定出48个化合物结构，其中包括酸类化合物11个、醇类化合物2个、酯类化合物7个、小分子糖类化合物17个、烷烃类化合物I个、其他类化合物10个。实施例4.将爱国者蓝莓鲜果用榨汁机研磨，准确称量果泥5g，用50 %乙醇溶液180mL浸没果泥，室温浸提2小时，1500rpm离心10分钟，取上清液；准确量取上清液O. 5mL,置于5mL磨口玻璃离心管中，加入O. 5mL浓度为4moL/L的三氟乙酸溶液，100°C保温I小时；取出离心管，冷却至室温，IOOOrpm离心4分钟，将上层清液移至IOOmL鸡心瓶中，减压蒸馏，得到透亮紫红色的贴壁物，将此贴壁物用ImL甲醇溶解后置于离心管中，用氮吹仪吹干，加入ImLBSTFA，将离心管放入烘箱中，80°C保温lh，得到衍生化溶液；使用GCMS仪测试衍生化溶液，得到衍生化溶液总离子流图，见图5，通过图谱库检索和人工图谱解析共鉴定出40个化合物结构，其中包括酸类化合物11个、醇类化合物酚类化合物2个、酚类化合物I个、酯类化合物7个、小分子糖类化合物6个、酮类化合物I个、醛类化合物I个、烷烃类化合物I个、其他类化合物10个。以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案的范围内，当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上的实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
权利要求
1. 一种将蓝莓果化学组分提取物经水解后采用GC-MS柱前衍生化法研究其组分的方法，其特征在于I)制备蓝莓果化学组分提取液将蓝莓鲜果用榨汁机研磨，得到蓝莓果泥，准确称量蓝莓果泥5g左右，用不同体系不同配比的有机溶液作为提取液浸没果泥，室温浸提2小时，1500rpm离心10分钟，取上清液，该上清液为蓝莓果化学组分提取液，其中所述不同体系不同配比的有机溶液的体积为 100-200mL，所述的不同体系不同配比的有机溶液有四种，第一种为含甲酸的甲醇溶液，所述的甲醇溶液中含甲酸的体积百分比为O. 1-1% ;第二种为甲醇溶液，所述的甲醇溶液的体积浓度(V/V)为30% -60% ;第三种为丙酮溶液，所述的丙酮溶液的体积浓度(V/V)为 40% -70% ;第四种为乙醇溶液，所述的乙醇溶液的体积浓度(V/V)为30% -60% ;(2)提取物水解准确量取上述蓝莓果化学组分提取液O. 5mL，置于5mL磨口玻璃离心管中，加入O. 5mL 三氟乙酸溶液，80-120 V保温1-3小时，取出离心管，冷却至室温，IOOOrpm离心4分钟，将上层清液移至IOOmL鸡心瓶中，减压蒸馏，得到透亮紫红色的贴壁物，将此贴壁物用ImL甲醇溶解，得到水解物溶液，所述的三氟乙酸溶液的浓度为4moL/L，所述减压蒸馏的水浴温度 45度，真空度为O. 09Mpa ；(3)水解物衍生化将ImL水解物溶液置于离心中，用氮吹仪吹干，再加入O.1-1mL BSTFA衍生化试剂，放入烘箱中，60-100°C保温lh，取出后冷却至室温，得到衍生化溶液；(4)GCMS仪测试衍生化溶液设置GCMS仪器条件，测试衍生化溶液，得到衍生化溶液总离子流图、各峰所对应的化合物质谱图等数据信息，所述的GCMS仪器条件为Rtx-5石英毛细管柱，进样口温度280°C， 分流比10 1，程序升温，接口温度250°C，进样量I微升，所述的程序升温程序为柱初温 100°C，升温速率6°C /min，升至250°C，继续升温，速率15°C /min，升至280°C，保持时间 20min ；(5)获得蓝莓果化合物组分信息利用得到衍生化溶液数据信息，利用图谱库检索和人工图谱解析确定化合物结构。
全文摘要
本发明提供一种经酸水解研究蓝莓果化学组分的方法，属蓝莓果化学成分研究技术，包括下述步骤1)制备蓝莓果化学组分提取液，2)提取物水解，3)水解物衍生化，4)气质联用仪测试衍生化溶液，5)获得蓝莓果化合物组分信息。本发明将蓝莓果提取物水解后采用气质联用仪柱前衍生化法研究其组分，为全面细致地研究蓝莓果化学组分提供了工艺参数，为合理利用生物量丰富的蓝莓资源提供指导。
文档编号G01N30/02GK102998397SQ20121055937
公开日2013年3月27日 申请日期2012年12月21日 优先权日2012年12月21日
发明者吕兆林, 张柏林, 侯智霞, 潘月, 雷美玲, 任璇, 郭弘璇, 林西 申请人:北京林业大学