专利名称：一种轮状病毒抗原临界值质控物的配制方法
一种轮状病毒抗原临界值质控物的配制方法
技术领域：
本发明涉及一种室内质控物的配置方法，尤其涉及一种轮状病毒抗原临界值质控物的配制方法。
背景技术：
全世界每年因轮状病毒感染导致的婴幼儿死亡的人数大约为900000人，其中大多数发生在发展中国家。在我国，O 2岁以内的婴幼儿人数约为4000万人(含新生儿)，每年大约有1000万婴幼儿患轮状病毒感染性胃肠炎，占婴幼儿人数的1/4，是引起婴幼儿
严重腹泻的最主要病原。轮状病毒感染从无症状、轻微发病到严重发病，严重时发生致命性胃肠炎、脱水及电解质平衡失调。轮状病毒胃肠炎的症状包括发烧、呕吐、腹痛以及无血色水样腹泻，症状可持续3 9天。轮状病毒是由粪口路径(fecal-oral route)所传染的，借由与接触弄脏的手、弄脏的表面以及弄脏的物体来传染，而且有可能经由呼吸路径传染。受感染病患的粪便每克可以包含超过1000亿亿个有传染性的病毒颗粒；而其中只要10颗到100颗就可以借由传播而感染另一个人。粪便轮状病毒抗原检测是诊断该病的常用方法，其检测方法有多种，其中金标法因其灵敏度、特异性与酶联免疫 法相当，省时、省力，不需特殊设备，故在临床中被广泛应用。目前，多数定量检测(如谷丙转氨酶活性测定等)已有商品化质控物，但粪便轮状病毒抗原检测(金标定性法)没有商品化质控物，如不自行配制就难以开展室内质控，为监测检验试剂的灵敏度，防止假阴性出现，定性试验的阳性质控物一般采用弱阳性样本，检验试剂灵敏度稍微下降即可通过使用该质控物反应出来，而高浓度质控物不利于监测试剂灵敏度，且使用的原材料多。
发明内容本发明的目的是提供一种轮状病毒抗原临界值质控物的配制方法，本发明是通过以下技术方案来实现的一种轮状病毒抗原临界值质控物的配制方法，包括如下步骤(I)质控物容器封闭处理将O. 5ml规格的离心管用O. 5%至2. O %的小牛血清白蛋白加满，放置于4°C冰箱内，封闭24小时后，然后弃悼所述离心管管内液体，再将所述离心管放置于生物安全柜内自然凉干备用；(2)配制临界质控物在收集到的轮状病毒抗原阳性的粪便标本中加适量生理盐水，充分混匀，移至20ml离心管内，用3000转/分的转速离心5分钟，收集上清液置56°C灭活30分钟，用倍比稀释法以轮状病毒抗原检测出极弱阳性的稀释度作为最大稀释度，将所述离心管上清液用无菌生理盐水稀释至2倍最大稀释度浓度，加蛋白稳定剂、叠氮钠至终浓度分别为1. 0-10. 0g/L、0. 3-3. Og/L,分装至封闭后的O. 5ml塑料离心管内，每管50-500 μ L ；(3)质控物保存将分装好的临界值质控物保存于4°C至-20°c条件下。进一步地，所述离心管为塑料离心管。本发明的有益效果在于本发明的被测物浓度设计在临界值水平，检验试剂灵敏度稍微下降即可通过使用该质控物反应出来，可监测相应试剂在流通、保存、使用过程中是否出现变质，临界值质控物因被测物含量很低，容易在保存过程中降解和被塑料离心管壁吸附，本发明制备的轮状病毒抗原临界值质控物，因预先将一次性塑料离心管进行了封闭处理，并加入了防腐剂和蛋白稳定剂，通过低温保存措施，有效期大于一年。
具体实施方式下面根据具体实施方式
对本发明做进一步描述实施例1 :一种轮状病毒抗原临界值质控物的配制方法，包括如下步骤(I)质控物容器封闭处理将O. 5ml规格的离心管用O. 5%的小牛血清白蛋白加满，放置于4°C冰箱内，封闭24小时后，然后弃悼所述离心管管内液体，再将所述离心管放置于生物安全柜内自然凉干备用；(2)配制临界质控物在收集到的轮状病毒抗原阳性的粪便标本中加适量生理盐水，充分混匀，移至20ml离心管内，用3000转/分的转速离心5分钟，收集上清液置56°C灭活30分钟，用倍比稀释法以轮状病毒抗原检测出极弱阳性的稀释度作为最大稀释度，将所述离心管上清液用无菌生理盐水稀释至2倍最大稀释度浓度，加蛋白稳定剂、叠氮钠至终浓度分别为1. 0g/L、0. 3g/L，分装至封闭后的O. 5ml塑料离心管内，每管50 μ L ;(3)质控物保存将分装好的临界值质控物保存于4°C条件下。优选地，所述离心管为塑料离心管。本发明制备的轮状病毒抗原临界值质控物，用相应试剂进行检测，结果全部为极弱阳性，与预期结果一致，可监测轮状病毒抗原金标试剂的灵敏度。实施例2 一种轮状病毒抗原临界值质控物的配制方法，包括如下步骤(I)质控物容器封闭处理将0. 5ml规格的离心管用2. 0%的小牛血清白蛋白加满，放置于4°C冰箱内，封闭24小时后，然后弃悼所述离心管管内液体，再将所述离心管放置于生物安全柜内自然凉干备用；(2)配制临界质控物在收集到的轮状病毒抗原阳性的粪便标本中加适量生理盐水，充分混匀，移至20ml离心管内，用3000转/分的转速离心5分钟，收集上清液置56°C灭活30分钟，用倍比稀释法以轮状病毒抗原检测出极弱阳性的稀释度作为最大稀释度，将所述离心管上清液用无菌生理盐水稀释至2倍最大稀释度浓度，加蛋白稳定剂、叠氮钠至终浓度分别为10. 0g/L、3. 0g/L，分装至封闭后的0. 5ml塑料离心管内，每管500 μ L ;(3)质控物保存将分装好的临界值质控物保存于_20°C条件下。优选地，所述离心管为塑料离心管。本发明制备的轮状病毒抗原临界值质控物开展室内质控一年，确定因试剂灵敏度下降引起的失控次数有3次，及时地发现了试剂质量问题，保障了患者结果的准确性。根据上述说明书的揭示和教导，本发明所属领域的技术人员还可以对上述实施方式进行适当的变更和修改。因此，本发明并不局限于上面揭示和描述的具体实施方式
，对本发明的一些修改和变更也应当落入本发明的权利要求的保护范围内。此外，尽管本说明书中使用了一些特定的术语，但这些术语只是为了方便说明，并不对本发明构成任何限制。
权利要求
1.一种轮状病毒抗原临界值质控物的配制方法，其特征在于，包括如下步骤 (1)质控物容器封闭处理将O.5ml规格的离心管用O. 5%至2. 0%的小牛血清白蛋白加满，放置于4°C冰箱内，封闭24小时后，然后弃悼所述离心管管内液体，再将所述离心管放置于生物安全柜内自然凉干备用； (2)配制临界质控物在收集到的轮状病毒抗原阳性的粪便标本中加适量生理盐水，充分混匀，移至20ml离心管内，用3000转/分的转速离心5分钟，收集上清液置56°C灭活30分钟，用倍比稀释法以轮状病毒抗原检测出极弱阳性的稀释度作为最大稀释度，将所述离心管上清液用无菌生理盐水稀释至2倍最大稀释度浓度，加蛋白稳定剂、叠氮钠至终浓度分别为1. 0-10. 0g/L、0. 3-3. Og/L,分装至封闭后的O. 5ml塑料离心管内，每管50-500 μ L ； (3)质控物保存将分装好的临界值质控物保存于4°C至_20°C条件下。
2.根据权利要求1所述的轮状病毒抗原临界值质控物的配制方法，其特征在于所述离心管为塑料离心管。
全文摘要
本发明提供了一种轮状病毒抗原临界值质控物的配制方法，包括如下步骤(1)质控物容器封闭处理将0.5％至2.0％的小牛血清白蛋白加满离心管，置4℃冰箱封闭24小时，弃悼管内液体，凉干备用；(2)配制临界质控物在轮状病抗原阳性的粪便标本中加生理盐水，混匀，移至离心管，用3000转/分的转速离心5分钟，灭活30分钟，用腺病毒抗原检测出极弱阳性的稀释度作为最大稀释度，将离心管上清液稀释至2倍最大稀释度浓度，加蛋白稳定剂、叠氮钠至终浓度分别为1.0-10.0g/L、0.3-3.0g/L，分装至封闭后的0.5ml离心管，每管50-500μL；(3)质控物保存保存于4℃至-20℃条件下，本发明的有益效果在于制备简单、可监测相应试剂在流通、保存、使用过程中是否出现变质，有效期长。
文档编号G01N33/569GK103063839SQ20121056001
公开日2013年4月24日 申请日期2012年12月20日 优先权日2012年12月20日
发明者刘和录, 窦宇红, 杜纪坤, 华建江, 吴雄君, 徐志康, 丁华 申请人:刘和录