干试剂的制造方法、干试剂、以及使用其的分析用具的制作方法

文档序号:6183798
专利名称:干试剂的制造方法、干试剂、以及使用其的分析用具的制作方法
技术领域
本发明涉及用于分析液体试样所含的成分的干试剂的制造方法、干试剂、以及使用该干试剂的分析用具。
背景技术
在用于通过酶法测定液体试样中所含的AST (天门冬氨酸氨基转移酶)或LDH (乳酸脱氢酶)等成分的量的试剂中,经常使用烟酰胺辅酶(例如β-NAD+、β-NADH、β-NADP+、β-NADPH)作为检测试剂。例如,专利文献I中记载了含有烟酰胺辅酶、并用于测定液体试样中所含的成分的液状试剂。在该液状试剂中,通过使用了紫外光区的波长(340nm)的光的透射法,来测定烟酰胺辅酶的增加或减少。已提出了一种具备含有烟酰胺辅酶的干试剂作为检测试剂的、用于简易测定液体试样中所含的成分的量的分析用具。例如,专利文献2中记载了在基板上形成多层的胶质层、并在其中含有作为烟酰胺辅酶的一种的β-NAD+的分析用具。该分析用具不是直接检测β-NAD+被还原而生成的β-NADH,而是含有电子转移剂和甲膜染料(formazan dye)前体作为β-NADH检测剂。具体地,使用黄递酶来作为电子转移剂。另外,使用硝基四氮唑蓝(以后称NTB)来作为甲臜染料前体。该NTB的颜色变化通过使用可见光区的波长的光的反射法来进行检测。另外,专利文献3中记载了由将液体试样提供到内部的试样提供口、对所述液体试样进行测定的测定室、以及连通所述试样提供口和所述测定室的流路构成的分析用具。所述流路和所述测定室通过多个板部件的层叠而形成,这些多个板部件中的至少一个为具有通气性的多孔质的板部件。在该分析用具中,液体试样的移送不是通过毛细管现象,而是通过从试样提供口施加压力等来进行。该分析用具的测定室中配置有干试剂。该干试剂也使用β-MD+作为检测试剂。并且,该干试剂也不直接测定还原β-MD+而产生的β-NADH,而是含有检测还原β -NAD+而产生的β -NADH的β -NADH检测剂。使用黄递酶来作为电子转移剂。使用作为水溶性四唑盐的WST-4来作为甲臜染料前体。该WST-4的颜色变化通过使用可见光区的波长的透射法来进行检测。另一方面,专利文献4中记载了由透明基板和透明盖构成的分析用具以及用于测定其的分析装置。在该分析用具中,通过贴合透明基板和透明盖,而形成了配置有干试剂的测定室和将液体试样移送到所述测定室的毛细管流路。移送到测定室中的液体试样溶解所述干试剂。所述分析装置通过使用可见光区的光的透射法来测定干试剂中所含的检测试剂与液体试样中的特定成分反应而发生的颜色变化。该分析用具由于将液体试样密封而进行测定,因此能够防止所述分析装置内变脏。由此,不需要对所述分析装置内进行清洗。另外,该分析装置通过改良光学系统而小型化。此外,该干试剂并不是包含烟酰胺辅酶作为检测试剂的干试剂。但是,在所述现有技术中,如下所述,还存在应当改善的余地。即,如专利文献1至3中所述,广泛采用了使用烟酰胺辅酶的酶法。但是,其测定值中若没有相容性,则不能比较患者数据,有可能阻碍诊断。因此,国际上,由国际临床化学联合会(IFCC)提示了标准测定法(IFCC推荐法)。另外,在日本,由日本临床化学会(JSCC)公布了 JSCC推荐法。这些推荐法的主要特征在于,使用紫外光区的波长的340nm直接测定烟酰胺辅酶的量。这样的推荐法一般应用于记载在专利文献I中的液状试剂,但在专利文献2和3所记载的那样的简易测定用分析用具中也优选采用。但是,在反射法中,通过紫外光区的波长(340nm)的光进行的测定在原理上是困难的。因此,在如专利文献2中记载的那样的使用反射法的分析用具中,不得不采用与上述推荐法不同的、使用可见光区的光的测定原理。专利文献3和4所记载的分析用具通过透射法来进行测定。如上所述,专利文献3和4中记载的分析用具并不是使用紫外光区的波长直接测定烟酰胺辅酶的量的。在专利文献3中记载的分析用具中,液体试样的移送通过从试样提供口施加压力等来进行。这种用于测定分析用具的分析装置由于具备移送液体试样的泵等,因此有大型化的倾向。就能够将分析装置小型化的观点来说,优选采用如专利文献4中记载的那样的、通过毛细管现象来移送液体试样的分析用具。在专利文献4记载的分析用具中,使用配置在测定室中的干试剂,通过可见光进行测定。为了对这样的分析用具应用上述推荐法,尤其是为了通过使用紫外光的透射法来进行精度良好的测定,需要在所述测定室中均匀地溶解干试剂。因此,配置在所述测定室中的干试剂必须没有龟裂而且平滑。但是,已弄清了溶解了烟酰胺辅酶的试剂溶液如果仅单纯地干燥,则变得不平滑,并会发生龟裂。这样的干试剂在不经搅拌地溶解的情况下,由于产生不均,因此在使用紫外光区的光进行测定的情况下,难以获得目标吸光度。另外,干试剂的龟裂是液体试样流入测定室时带入气泡的原因。这种存在于测光部的气泡是导致测定值的误差的原因。现有技术文献专利文献专利文献1:日本特开平8-248028号公报专利文献2:日本特公平5-60360号公报专利文献3:国际公开第2009/090756号小册子专利文献4:日本特开平10-197526号公报

发明内容
发明要解决的课题本发明是鉴于上述问题而作出的,其目的在于,提供如下干试剂的制造方法、干试齐U、以及使用其的分析用具,所述干试剂在为了定量液体试样所含的成分而通过使用紫外光区的光的透射法来测定烟酰胺辅酶的增减的情况下,能够进行精度良好的测定。用于解决问题的手段为了解决上述问题,本发明考虑如下技术手段。通过本发明的第I方面提供的干试剂的制造方法是用于对液体试样中所含的特定成分进行定量分析的干试剂的制造方法,其特征在于,包括:将烟酰胺辅酶和用于平滑所述干试剂的平滑化剂溶解在溶解液中,来调制试剂溶液的步骤,其中,通过使用紫外光区的光的透射法来测定所述烟酰胺辅酶的增加或减少;以及在分析用具的基材或盖上滴下预定量的所述试剂溶液之后,进行干燥的步骤。优选的构成为:所述平滑化剂为选自糖类和表面活性剂中的至少一种与碱的组合。此外,本发明中所述的“糖类”的概念包括单糖类、二糖类等的寡糖、以及糖醇。优选的构成为:所述糖类为蔗糖,在调制所述试剂溶液的步骤中,所述试剂溶液中的蔗糖的浓度调节为6W/V%以上。优选的构成为:所述表面活性剂为选自η-辛酰基-N-甲基-D-葡糖胺和3-[(3_胆酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸盐中的至少一种,在调制所述试剂溶液的步骤中,所述试剂溶液中的η-辛酰基-N-甲基-D-葡糖胺的浓度调节为2W/V%以上。优选的构成为:所述平滑化剂含有所述糖类和所述表面活性剂,所述糖类为选自D-山梨醇和蔗糖中的至少一种,在调制所述试剂溶液的步骤中,所述试剂溶液中的D-山梨醇的浓度调节为6W/V%以上,蔗糖的浓度调节为3W/V%以上,所述表面活性剂为选自η-辛酰基-N-甲基-D-葡糖胺和3-[ (3-胆酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸盐中的至少一种,在调制所述试剂溶液的步骤中,所述试剂溶液中的η-辛酰基-N-甲基-D-葡糖胺的浓度调节为3W/V%以上,所述试剂溶液中的3-[ (3-胆酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸盐的浓度调节为0.1W/V%以上。通过本发明的第2方面提供的干试剂,是用于进行液体试样中所含的特定成分的定量分析的干试剂,其特征在于, 包括:烟酰胺辅酶、和用于平滑所述干试剂的平滑化剂,其中,所述干试剂被构成为通过使用紫外光区的光的透射法,来测定所述烟酰胺辅酶的增加或减少。优选的构成为:所述平滑化剂为选自糖类和表面活性剂中的至少一种与碱的组
合优选的构成为:所述碱为氢氧化钠。优选的构成为:所述糖类为选自D-山梨醇和蔗糖中的至少一种化合物。优选的构成为:所述表面活性剂为选自η-辛酰基-N-甲基-D-葡糖胺和3-[(3_胆酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸盐中的至少一种。优选的构成为:所述干试剂容纳在分析用具的内部,所述分析用具具备使所述紫外光区的光透射的测定室,所述干试剂配置在所述测定室中。优选的构成为:所述分析用具具备用于通过毛细管现象将所述液体试样移送到所述测定室的毛细管流路,所述干试剂在不搅拌的情况下通过由所述毛细管流路移送的所述液体试样溶解。通过本发明的第3方面提供的分析用具是用于进行液体试样中所含的特定成分的定量分析的分析用具,其特征在于,所述分析用具的内部容纳有通过本发明的第2方面提供的干试剂。优选的构成为:分析用具的内部具备测定室,所述测定室是为了测定所述烟酰胺辅酶的增减而使所述紫外光区的光透射的部分,所述干试剂配置在所述测定室中。优选的构成为:分析用具具备用于通过毛细管现象来将所述液体试样移送到所述测定室的毛细管流路,所述干试剂在不搅拌的情况下通过由所述毛细管流路移送的所述液体试样溶解。
通过以下参照附图对发明的实施方式进行的说明,本发明的其他特征和优点将会
变得更为清楚。


图1是示出本发明涉及的具备干试剂的分析用具的示例的平面图;图2是沿着图1所示的分析用具的I1-1I线的截面图;图3A至图3C是说明图1所示的分析用具的动作的截面图;图4是示出比较例I的干试剂的表面状态的照片;图5是示出液体试样被移送到比较例I的干试剂上的状态的照片;图6是示出比较例2的干试剂的表面状态的照片;图7是示出实施例2的干试剂的表面状态的照片;图8是示出实施例5的干试剂的表面状态的照片;图9是比较比较例I和实施例2的吸光度的时间进程(time course)的曲线图;图10是比较比较例I和实施例5的吸光度的时间进程的曲线图;图11是比较比较例I和实施例6的吸光度的时间进程的曲线图;图12是示出比较例3的干试剂的表面状态的照片;图13是示出实施例7的干试剂的表面状态的照片。符号说明A分析用具S血清(液体试样)I 盖2 基材30毛细管流路31测定室4干试剂
具体实施例方式下面,参照附图对本发明的优选实施方式进行具体说明。图1和图2不出了应用了本发明的干试剂和含有该干试剂的分析用具的一个例子。该分析用具A安装在诊疗所、医院的病房中设置的小型的分析装置中,用于对血清中所含的成分的量进行定量分析。血清相当于本发明所述的液体试样的一个示例。分析用具A也能够应用于血清以外的液体试样。作为血清以外的液体试样,具体地,例如可举出全血、血浆、尿、唾液、间质液等生物体试样。这些液体试样可以直接应用,也可以用稀释液稀释后应用。如图1和图2所示,分析用具A具备盖1、基材2、隔片3、毛细管流路30、32、测定室31、和干试剂4。此外,在以后的说明中,上下方向等方向假定按照附图所记载的方向。盖I例如为以聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)为材料并具有紫外线透射性的透明的板状部件。该板状部件的厚度为0.1mm。作为盖1,只要是具有紫外线透射性的板状部件则可以使用任何的部件。具体地,例如可举出以聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)为材料的板状部件。另外,厚度也不限于0.1mm。具体地,例如厚度优选0.1mm 1.0mm,更优选为0.1mm 0.2mm。盖I上形成有试样提供口 10和通气口 11。如图2所示,试样提供口 10为用于分析装置所具备的喷嘴5将血清S提供给分析用具A的开口部。通气口 11是为了在分析用具A的内部使通过毛细管现象的血清S的移送顺畅地进行而形成的开口部。基材2与盖I同样,例如为以PMMA为材料的具有紫外线透射性的透明板状部件。该板状部件的厚度为0.1mm0作为基材2,只要是具有紫外线透射性的板状部件则可以使用任何部件。具体地,例如,可以举出以PET为材料的板状部件。另外,厚度也不限于0.1_。具体地,例如厚度优选0.1mm 1.0mm,更优选为0.1mm 0.2mm。如图1和图2所示,干试剂4形成并配置在基材2的作为后述的测定室31的底壁部的部分上。如图1和图2所示,隔片3用于在贴合盖I和基材2的同时在分析用具A的内部形成毛细管流路30、32和测定室31。作为隔片3,例如,使用厚度为0.5_的双面胶带。通过该厚度来限定测定室的池长(力力長)。该双面胶带是在合成树脂制的薄膜的两面上涂布粘接剂而形成的。通过在隔片3上形成后述的毛细管流路30、32和测定室31的形状的贯通口,并使用隔片3贴合盖I和基材2,来形成毛细管流路30、32和测定室31。此外,隔片3的厚度不限于0.5mm。在分析用具A用于测定血清S中大量含有的成分的量的情况下,通过减少隔片3的厚度来降低灵敏度。反之,在分析用具A用于测定血清S中仅微量含有的成分的量的情况下,通过增加隔片3的厚度来提高灵敏度。如图2所示,毛细管流路30用于通过毛细管现象将由喷嘴5从试样提供口 10提供的血清S移送到后述的测定室31。另外,毛细管流路32用于将血清S从测定室31移送至通气口 11。毛细管流路32为了 将测定室31中可靠地装满血清S而设置。如图1和图2所示,测定室31是形成在分析用具A的内部的、由上壁部、侧壁部和底壁部包围的小空间。测定室31用于容纳后述的干试剂4。如图2所示,干试剂4固定在测定室31的底壁面31a上。血清S从毛细管流路30流入测定室31。流入的血清S溶解干试剂4。溶解的试剂在测定室31中扩散。此时,不搅拌溶解的试剂和血清S。此外,也能够将干试剂4固定在测定室31的上壁面31b上。另外,在存在如不与其他试剂分离就不能保持稳定性的试剂的情况下,也可以将分开含有这些试剂的多个干试剂4固定在上壁面31b和底壁面31a两者上来配置。如图1和图2所示,毛细管流路30、32和测定室31的上壁部由盖I形成。侧壁部由隔片3形成。另外,底壁部由基材2形成。为了容易产生毛细管现象,对盖I和基材2的表面进行紫外线处理或等离子处理等物理处理。另外,盖I和基材2的表面处理不限于物理处理,也可以通过涂布表面活性剂来进行。干试剂4是混合了用于检测血清S中所含的特定成分的多种试剂、并进行了干燥的试剂。干试剂4含有烟酰胺辅酶作为检测试剂。烟酰胺辅酶是某种氧化还原酶进行催化的反应所需要的。作为烟酰胺辅酶,具体地,可举出烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(β -NAD+)、β -烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(β -NADH)、β -烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(β -NADP+), β -烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸还原型(β -NADPH)。通过氧化还原酶进行催化的反应,β -NAD+与β -NADH相互转变。另夕卜,β -NADP+和β -NADPH相互转变。其中,作为还原型的烟酰胺辅酶的β-NADH和β-NADPH在340nm附近具有极大吸收。因此,在需要烟酰胺辅酶的检测体系中,分析装置通过检测β-NADH或β-NADPH的增加或减少来对血清S中所含的特定成分进行定量。
作为通过烟酰胺辅酶所参与的检测体系可检测的成分,可举出葡萄糖、尿酸、中性脂肪、氨、肌酐等物质、以及肌酸激酶、转氨酶、亮氨酸氨肽酶、α -淀粉酶、乳酸脱氢酶等酶。例如,乳酸脱氢酶(LDH)催化由乳酸生成丙酮酸的反应。此时,β-NAD+被还原成β-NADH。如上所述,β-NAD+和β-NADH在紫外光区的波长处的吸收光谱显著不同。β -NAD+仅在260nm附近有吸收,β -NADH在340nm附近也有吸收。由此,通过测定340nm处的β -NADH的吸光度的增加,能够检测LDH的活性。化学反应式I
权利要求
1.一种干试剂的制造方法,其中,所述干试剂用于进行液体试样中所含的特定成分的定量分析,所述制造方法包括: 将烟酰胺辅酶和用于平滑所述干试剂的平滑化剂溶解在溶解液中,来调制试剂溶液的步骤,其中,通过使用紫外光区的光的透射法来测定所述烟酰胺辅酶的增加或减少;以及 在分析用具的基材或盖上滴下预定量的所述试剂溶液之后,进行干燥的步骤。
2.根据权利要求1所述的干试剂的制造方法,其中, 所述平滑化剂为选自糖类和表面活性剂中的至少一种与碱的组合。
3.根据权利要求2所述的干试剂的制造方法,其中, 所述糖类为蔗糖,在调制所述试剂溶液的步骤中,所述试剂溶液中的蔗糖的浓度调节为6W/V%以上。
4.根据权利要求2或3所述的干试剂的制造方法,其中, 所述表面活性剂为选自η-辛酰基-N-甲基-D-葡糖胺和3-[ (3-胆酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸盐中的至少一种,在调制所述试剂溶液的步骤中,所述试剂溶液中的η-辛酰基-N-甲基-D-葡糖胺的浓度调节为2W/V%以上。
5.根据权利要求2所述的干试剂的制造方法,其中, 所述平滑化剂含有所述糖类和所述表面活性剂, 所述糖类为选自D-山梨醇和蔗糖中的至少一种,在调制所述试剂溶液的步骤中,所述试剂溶液中的D-山梨醇的浓度调节为6W/V%以上,蔗糖的浓度调节为3W/V%以上, 所述表面活性剂为选自η-辛酰基-N-甲基-D-葡糖胺和3-[ (3-胆酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸盐中的至少一种,在调制所述试剂溶液的步骤中,所述试剂溶液中的η-辛酰基-N-甲基-D-葡糖胺的浓度调节为3W/V%以上,所述试剂溶液中的3-[ (3-胆酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸盐的浓度调节为0.1W/V%以上。
6.—种干试剂,用于进行液体试样中所含的特定成分的定量分析,并包含: 烟酰胺辅酶;和 用于平滑所述干试剂的平滑化剂, 其中,所述干试剂被构成为通过使用紫外光区的光的透射法,来测定所述烟酰胺辅酶的增加或减少。
7.根据权利要求6所述的干试剂,其中, 所述平滑化剂为选自糖类和表面活性剂中的至少一种与碱的组合。
8.根据权利要求7所述的干试剂,其中, 所述碱为氢氧化钠。
9.根据权利要求7或8所述的干试剂,其中, 所述糖类为选自D-山梨醇和蔗糖中的至少一种化合物。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的干试剂,其中, 所述表面活性剂为选自η-辛酰基-N-甲基-D-葡糖胺和3-[ (3-胆酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸盐中的至少一种。
11.根据权利要求6至10中任一项所述的干试剂,其中, 所述干试剂容纳在分析用具的内部, 所述分析用具具备使所述紫外光区的光透射的测定室,所述干试剂配置在所述测定室中。
12.根据权利要求11所述的干试剂,其中, 所述分析用具具备用于通过毛细管现象将所述液体试样移送到所述测定室的毛细管流路, 所述干试剂在不搅拌的情况下通过由所述毛细管流路移送的所述液体试样溶解。
13.一种分析用具,用于进行液体试样中所含的特定成分的定量分析,其中, 所述分析用具的内部容纳有权利要求6至12中任一项所述的干试剂。
14.根据权利要求13所述的分析用具,其中, 所述分析用具的内部具备测定室, 所述测定室是为了测定所述烟酰胺辅酶的增加或减少而使所述紫外光区的光透射的部分,所述干试剂配置在所述测定室中。
15.根据权利要 求14所述的分析用具,其中, 所述分析用具具备用于通过毛细管现象来将所述液体试样移送到所述测定室的毛细管流路,所述干试剂在不搅拌的情况下通过由所述毛细管流路移送的所述液体试样溶解。
全文摘要
本发明提供一种干试剂的制造方法、干试剂、以及使用其的分析用具,该干试剂在为了定量液体试样中所含的成分而通过使用紫外光区的光的透射法来测定烟酰胺辅酶的增减的情况下,能够进行精度良好的测定。干试剂(4)用于进行液体试样(S)中所含的特定成分的定量分析,并包含烟酰胺辅酶以及用于平滑干试剂(4)的平滑化剂,其中,所述烟酰胺辅酶的增加或减少通过使用紫外光区的光的透射法来测定。所述平滑化剂为选自糖类和表面活性剂中的至少一种与碱的组合。
文档编号G01N33/52GK103217521SQ20131002376
公开日2013年7月24日 申请日期2013年1月22日 优先权日2012年1月22日
发明者矢里优衣, 今井敏博, 中村勤 申请人:爱科来株式会社
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