专利名称：一种伤筋正骨酊的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种伤筋正骨酊的检测方法，属于制药技术领域。
背景技术：
伤筋正骨酊具有消肿镇痛的功能，用于治疗跌打扭伤及骨折、脱白等病症。在伤筋正骨酊的成分中，木香、桂枝、当归和樟脑是特征性指标成分。在现有的伤筋正骨酊生产过程中，由于缺少有效的检测方法，难以对伤筋正骨酊中的主要成分做成分鉴别和含量測定，这样伤筋正骨酊主要药物成分会不确定，使得产品质量差异比较大，造成疗效的不稳定，既不利于生产厂家和管理部门对产品的控制，也影响产品在医疗部门和患者中的声誉。并且伤筋正骨酊中含有毒性成分乌头碱，而现有检测方法中缺少伤筋正骨酊中的乌头碱限量方法，这导致在生产过程中不能很好的对乌头碱进行限量控制，影响产品的质量。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种伤筋正骨酊的检测方法。该检测方法可以对伤筋正骨酊的主要成分进行有效鉴别和測定，弥补了原质量控制方法的不足，提高了产品的质量控制水平，也有利于管理部门对产品的监测。为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案如下:一种伤筋正骨酊的检测方法，包括以下步骤:
性状，本品(伤筋正骨酊)为棕红色的澄明液体，气芳香；
木香的鉴别，取本品25ml，蒸至近干，残渣加こ醇2ml使溶解，用60°C 90°C的石油醚振摇提取3次，毎次5ml，合并石油醚液，低温浓缩至2ml，作为供试品溶液；另取木香对照药材0.5g，加こ醚10ml，振摇10分钟，弃去こ醚液，残渣挥尽こ醚，加醋酸こ酷10ml，加热回流I小时，滤过，滤液蒸干，残渣加60°C 90°C的石油醚2ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 10ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以10:3的环己烷ー丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。前述的伤筋正骨酊的检测方法，还包括以下步骤:
桂枝的鉴别，取桂枝对照药材0.5g，加こ醇10ml，密塞，浸溃24小时，滤过，滤液低温挥干，残留物加入60°C 90°C的石油醚2ml使溶解，作为对照药材溶液；取本品25ml，蒸至近干，残渣加こ醇2ml使溶解，用60°C 90°C的石油醚振摇提取3次，每次5ml，合并石油醚液，低温浓缩至2ml，作为供试品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及上述对照药材溶液各5 10ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以17: 3温度为60°C 90°C的石油醚ーこ酸こ酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以ニ硝基苯肼试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同顔色的主斑点。前述的伤筋正骨酊的检测方法，还包括以下步骤:
当归的鉴别，取本品10ml，用正己烷萃取两次，毎次5ml，合并正己烷液，于水浴挥至lml，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.2g，加正己烷2ml冷浸2小时，滤过，滤液作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 10ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9: I的正己烷-こ酸こ脂为展开剂，展开，取出，晾干；于365nm的紫外线下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的主斑点位置上，显相同颜色荧光斑点。前述的伤筋正骨酊的检测方法，还包括以下步骤:
检查:こ醇量应为76% 86% ；
乌头碱限量，精密量取本品25ml，加入稀硫酸调节pH值至2 3的酸性饱和氯化钠溶液250ml，用こ醚振摇提取3次，每次25ml，弃去こ醚液，水液用氨试液调节pH至9，再用こ醚振摇提取3次，毎次25ml，合并こ醚液，低温蒸干，残渣加三氯甲烷适量使溶解，转移至Iml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，作为供试品溶液；另精密称取乌头碱对照品，加氯仿制成每Iml含1.75mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液20ml，对照品溶液10ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以2: 3: 4: 0.4的甲苯一丙酮一こ酸こ酯ー浓氨水为展开剂，展开，取出，挥干，喷以改良碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。前述的伤筋正骨酊的检测方法，还包括以下步骤:
樟脑的含量測定，照高效液相色谱法測定；
(1)色谱条件与系统适用性实验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以14:52:30的用冰こ酸调至PH3.0的三氯甲烧一甲醇一水为流动相；检测波长为289nm，柱温为35°C ;理论塔板数按樟脑峰计算应不低于3000 ；
(2)对照品溶液的制备:精密称取樟脑对照品适量，加甲醇制成每Iml含0.75mg樟脑的溶液，摇匀，即得；
(3)供试品溶液制备:精密量取本品5ml，置50ml容量瓶中，加こ醇稀释至刻度，经
0.45 u m的微孔滤膜滤过，即得；
(4)測定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5yl，注入液相色谱仪，測定，即得；
本品含樟脑(CltlH16O)为 6.75mg 8.25mg/ml。前述的伤筋正骨酊的检测方法中，所述的伤筋正骨酊由细辛1.5g、独活6.75g、泽兰10g、莪术13.5g、草乌10g、乌药13.5g、威灵仙10g、续断10g、过江龙20g、天南星10g、当归10g、两面针13.5g、半夏10g、川乌13.5g、石菖蒲6.8g、良姜6.75g、买麻藤20g、丢了棒16.75g、穿破石13.5g、大皂角10g、小驳骨1.5g、十八症20g、小罗伞13.5g、大驳骨16.75g、木香8.5g、桂枝16.25g、徐长卿20g、白]E 12g、薄荷脑11.2g、冰片9.3g、樟脑7.5g,制成IOOOrnl成品酊剂。前述的伤筋正骨酊的检测方法中，所述的伤筋正骨酊由以下方法制成:将配方中除薄荷脑、樟脑、冰片，其余二十八味药材，粉碎成粗粉，加95%こ醇950ml，浸溃15天，滤过，滤液加入薄荷脑、冰片、樟脑，搅拌溶解，加こ醇和水至规定量(1000ml)，使こ醇浓度达76% 86%，分装，即得。与现有技术相比，本发明相对于原有质量标准増加了可以对伤筋正骨酊的主要药物成分进行有效检测的方法，使得伤筋正骨酊中的主要药物成分比较确定，毒性成分的控制标准精确，产品质量的监控水平有很大的提高，本发明的应用，既有利于生产厂家和管理部门对产品的监测，也可以为医疗部门和患者的治疗提供较好的保障。为了验证本发明检测方法的合理性，申请人对该方法进行了试验研究和筛选。增加当归药材的薄层鉴别方法:
取本品10ml，用正己烷萃取两次，毎次5ml，合并正己烷液，于水浴挥至1ml，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.2g,加正己烷2ml冷浸2小吋，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 10ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-こ酸こ脂(9: I)为展开剂，展开，取出，晾干。于紫外(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的主斑点位置上，显相同颜色荧光斑点。伤筋正骨酊样品与阴性和对照药材对比鉴别试验结果均为:在与对照药材色谱相应的主斑点位置上，显相同顔色的荧光斑点，斑点清晰，分离效果好，阴性无干扰，异板重现性好，说明本方法可行，可作为鉴别伤筋正骨酊供试品中当归的方法，故将该方法列入质量标准正文。制订了专属性强的含量測定方法，累计了含量测定数据，制订了合理的含量測定限度:
含量测定指标选择:我们进行了多个指标的摸索，如对处方中桂枝的桂皮醛、徐长卿中的丹皮酚等进行了高效液相測定方法研究，但因干扰大，无专属性，故选用樟脑作为含量测定指标，研究制定了专属性强的測定方法，将试行标准中专属性不强的总挥发油測定方法修订为专属性强的用樟脑作为含量測定指标的高效液相色谱法:
照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)測定。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；三氯甲烷一甲醇一水(14:52:30，用冰こ酸调pH3.0)为流动相；检测波长为289nm，柱温:35°C。理论塔板数按樟脑峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备:精密称取樟脑对照品适量，加甲醇制成每Iml含0.75mg的溶液，摇勻，即得。供试品溶液制备:精密量取本品5ml，置50 ml容量瓶中，加こ醇稀释至刻度，经微孔滤膜(0.45 ym)滤过，即得。測定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 yl，注入液相色谱仪，測定，即得。专属性:取不含樟脑成分的供试品溶液，依上述含量測定方法測定，从色谱图可见，其它成分对樟脑的测定无干扰。见
图1.线性关系考察:精密称取樟脑对照品300.0400mg置IOOml容量瓶中，加甲醇至刻度，溶解摇匀，分别精密量取对照液制成(0.45006,0.60008,0.75010,0.90012,1.05014mg/ml)的樟脑对照品，各取5iU注入液相色谱仪，进行含量測定，以樟脑峰面积A对樟脑浓度C进行线性回归，线性回归方程:A = 227.4+83.887X103C，线性范围:0.45006 mg/ml 1.05014 mg/ml,相关系数r=0.9999。根据实验结果，以樟脑浓度在0.45006 mg/ml 1.05014 mg/ml范围内，峰面积与进样量呈良好性关系。结果见表I。表I线性关系
权利要求
1.一种伤筋正骨酊的检测方法，其特征在于，包括以下步骤:性状，本品为棕红色的澄明液体，气芳香； 木香的鉴别，取本品25ml，蒸至近干，残渣加乙醇2ml使溶解，用60°C 90°C的石油醚振摇提取3次，每次5ml，合并石油醚液，低温浓缩至2ml，作为供试品溶液；另取木香对照药材0.5g，加乙醚IOml，振摇10分钟，弃去乙醚液，残渣挥尽乙醚，加乙酸乙酯IOml，加热回流I小时，滤过，滤液蒸干，残渣加60V 90°C的石油醚2ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以10:3的环己烷一丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。
2.根据权利要求1所述的伤筋正骨酊的检测方法，其特征在于，还包括以下步骤: 桂枝的鉴别，取桂枝对照药材0.5g，加乙醇10ml，密塞，浸溃24小时，滤过，滤液低温挥干，残留物加入60°C 90°C的石油醚2ml使溶解，作为对照药材溶液；取本品25ml，蒸至近干，残渣加乙醇2ml使溶解，用60V 90°C的石油醚振摇提取3次，每次5ml，合并石油醚液，低温浓缩至2ml，作为供试品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及上述对照药材溶液各5 10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以17: 3温度为60V 90°C的石油醚一乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
3.根据权利要求1或2所述的伤筋正骨酊的检测方法，其特征在于，还包括以下步骤: 当归的鉴别，取本品10ml，用正己烷萃取两次，每次5ml，合并正己烷液，于水浴挥至lml，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.2g，加正己烷2ml冷浸2小时，滤过，滤液作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9: I的正己烷-乙酸乙脂为展开剂，展开，取出，晾干；于365nm的紫外线下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的主斑点位置上，显相同颜色荧光斑点。
4.根据权利要求3所述的伤筋正骨酊的检测方法，其特征在于，还包括以下步骤； 检查: 乙醇量应为76% 86% ； 乌头碱限量，精密量取本品25ml，加入稀硫酸调节pH值至2 3的酸性饱和氯化钠溶液250ml，用乙醚振摇提取3次，每次25ml，弃去乙醚液，水液用氨试液调节pH至9，再用乙醚振摇提取3次，每次25ml，合并乙醚液，低温蒸干，残渣加三氯甲烷适量使溶解，转移至Iml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，作为供试品溶液；另精密称取乌头碱对照品，加三氯甲烷制成每Iml含1.75mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液20 μl,对照品溶液10 μl,分别点于同一娃胶G薄层板上，以2: 3: 4: 0.4的甲苯一丙酮一乙酸乙酯一浓氨水为展开剂，展开，取出，挥干，喷以改良碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。
5.根据权利要求4所述的伤筋正骨酊的检测方法，其特征在于，还包括以下步骤: 樟脑的含量测定，照高效液相色谱法测定； (I)色谱条件与系统适用性实验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以14:52:30的用冰乙酸调至ΡΗ3.0的三氯甲烧一甲醇一水为流动相；检测波长为289nm，柱温为35°C ;理论塔板数按樟脑峰计算应不低于3000 ；(2)对照品溶液的制备:精密称取樟脑对照品适量，加甲醇制成每Iml含0.75mg樟脑的溶液，摇匀，即得；(3)供试品溶液制备:精密量取本品5ml，置50ml容量瓶中，加こ醇稀释至刻度，经.0.45um的微孔滤膜滤过，即得； (4)測定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5yl，注入液相色谱仪，測定，即得； 本品含樟脑(CltlH16O )为 6.75mg 8.25mg/ml。
全文摘要
本发明公开了一种伤筋正骨酊的检测方法。该方法相对于原有质量标准增加了可以对伤筋正骨酊的主要药物成分(木香、桂枝、当归和樟脑)进行有效检测的方法，使得伤筋正骨酊中的主要药物成分比较确定，毒性成分(乌头碱)的控制标准精确，产品质量的监控水平有很大的提高，产品的质量本发明的应用，既有利于生产厂家和管理部门对产品的监测，也可以为医疗部门和患者的治疗提供较好的保障。
文档编号G01N30/02GK103115995SQ20131002853
公开日2013年5月22日 申请日期2013年1月25日 优先权日2013年1月25日
发明者张沛 申请人:贵州盛世龙方制药股份有限公司