一种红花黄芪提取物的指纹图谱的鉴别方法
【专利摘要】本发明提供了红花黄芪提取物的指纹图谱鉴别方法，包括供试品溶液的制备、指纹图谱的测定、对照指纹图谱的确定和红花黄芪提取物指纹图谱的鉴别。通过对红花黄芪提取物进行高效液相色谱（HPLC）指纹图谱测定和分析，确定了8个红花黄芪提取物的特征峰，这些共有特征峰构成了红花黄芪提取物的指纹特征，可作为红花黄芪提取物的对照指纹图谱；对需要鉴别的红花黄芪提取物可以与对照指纹图谱进行比对，检查共有特征峰的情况，以鉴别质量。本发明具有方法简便、重现性好、特征峰明显、准确可靠等特点，有利于鉴别红花黄芪提取物的质量。
【专利说明】一种红花黄芪提取物的指纹图谱的鉴别方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种红花黄芪提取物指纹图谱的鉴别方法，具体地说是用高效液相色谱指纹图谱法来对红花黄芪提取物的有效成分进行质量控制的一种鉴别方法。
【背景技术】
[0002]红花具有活血通径、散瘀止痛的功效，为菊科植物红花CarthamustinctoriusL.的干燥花。中国药典2010版以羟基红花黄色素A、山柰素(C15HltlO6)为指标进行含量测定；姚苗苗采用RP-HPLC法同时测定红花中羟基红花黄色素A与红花黄色素A的含量(药物分析杂志，2010年02期)。黄苗为豆科植物蒙古黄苗Astragalusmembranaceus (Fisch)Bge.var.mongholicus (Bge) Hsiao 或膜英黄苗 Astragalusmembranaceus (Fisch) Bge.的干燥根。黄芪含黄酮、皂苷类成分；黄酮类成分如芒柄花素、3’-羟基芒柄花黄素(毛蕊异黄酮)及其葡萄糖苷、2’，3’ - 二羟基-7，4’ -二甲氧基异黄酮、7，2’ - 二羟基-3’，4’ -二甲氧基异黄烧及其匍萄糖苷、7，3’- 二轻基-4’，5’- 二甲氧基异黄烧、3-轻基-9，10-二甲氧基紫檀烷及其葡萄糖苷等；皂苷类成分有黄芪皂苷I?珊及大豆皂苷I ;黄芪甲苷(即黄芪皂苷IV)与黄芪乙苷。中国药典2010版黄芪以黄芪甲苷(C22H22Oltl)、毛蕊异黄酮葡萄糖苷(C22H22O10)为指标进行含量测定；李颜建立高效液相色谱法测定黄芪饮片中4个异黄酮成分毛蕊异黄酮-7-葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素的含量方法(中国药师，2012年02期)；王宗权采用HPLC-ELSD法测定不同产地黄芪药材中的黄芪皂苷1、黄芪皂苷II和黄芪皂苷IV的含量(药物分析杂志，2010年07期)。
[0003]中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。“整体性”和“模糊性”为其显著特点。中国食品药品监督管理局于2000年颁布了《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》，要求中药注射剂必须进行指纹图谱的研究，并建立其相关的标准。规范了中药指纹图谱的研究，从而掀起了国内近几年来对指纹图谱的研究热潮。目前，采用指纹图谱技术除了能反映几乎全部成分的含量、种类外，尚能反映成分的比例、未知成分(含量测定方法中可能已被作为无效或干扰成分扣除)的产生，更多的是从药物稳定性、安全性上进行监测。目前中药提取物产业发展迅速，但其质量控制技术水平不高，对质量控制较成熟的方法有单个成分含量测定或一类成分如总皂苷、总黄酮等的紫外分光光度测定法，不能对提取物进行全面直观的质量控制。本发明通过指纹图谱技术对红花黄芪提取物种的化学成分进行整体控制和综合评价，能够有效的鉴别红花黄芪提取物的质量。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种红花黄芪提取物的指纹图谱鉴别方法，通过指纹图谱测定对红花黄芪提取物进行全面而有效的鉴别。[0005]红花黄芪提取物的制备方法:
以红花、黄芪为原料，两味药材以重量份计为:红花80-150g，黄芪150-280g。取红花、黄芪，混合，加水煎煮，煎液浓缩后加乙醇沉淀，吸取上清液，回收乙醇，再加水稀释，静置，取上清液制成。
[0006]本发明的目的是通过如下技术方案实现的。
[0007]本发明红花黄芪提取物的指纹图谱鉴别方法，该方法包括如下步骤:
(a)色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈或甲醇、乙腈甲醇混合溶剂为流动相A，以甲酸水溶液或冰醋酸水溶液、磷酸水溶液、三氟乙酸水溶液为流动相B。检测器为紫外检测器、示差检测器或蒸发光检测器；
(b)精密吸取供试品溶液至量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，收取滤液，备用。
[0008](C)测定法吸取供试品溶液适量，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
[0009]进一步优选的测定条件为:
(a)色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长l(T25cm，内径3~5cm，粒径为f 10 μ m);以乙腈为流动相A，以0.0f 2%冰醋酸水溶液为流动相B ;紫外检测器，检测波长20(T400nm ;柱温2(T50°C，流速为每分钟0.2~2ml。
[0010](b)供试品溶液的制备精密吸取红花黄芪提取物供试品溶液0.5~Iml至10~20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。用微孔滤膜0.22~0.45 μ m滤过，收取滤液，备用。
[0011](c)测定法吸取供试品溶液5~40 μ 1，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，SP得。
[0012]最佳测定条件:
(a)色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱柱长为25cm,内径为4.6mm,粒径为5 μ m ;以乙腈为流动相A，以0.3%冰醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为280nm ;柱温25°C ;流速为每分钟0.9ml。
【权利要求】
1.红花黄芪提取物的指纹图谱鉴别方法，其特征在于包括以下步骤: (1)按下述方法制备红花黄芪提取物: 将红花80-150g、黄芪150-280g混合，加水煎煮，煎液浓缩后加乙醇沉淀，吸取上清液，回收乙醇，再加水稀释，静置，取上清液制成； (2)供试品溶液的制备:精密吸取红花黄芪提取物供试品溶液0.5?Iml至10?20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜0.22?0.45 μ m滤过，收取滤液，备用； (3)指纹图谱测定:取供试品溶液适量，注入高效液相色谱仪，记录75分钟以内的色谱图，得到由其共有特征峰构成的红花黄芪提取物对照高效液相指纹图谱；其中高效液相色谱分析的条件如下:用十八烷基键合硅胶为填充剂；AgilentZorbax Eclipse XDB C18色谱柱4.6X250mm ；乙臆-0.01-2%冰醋酸为流动相梯度洗脱，梯度程序为:0min — 5min — 30min — 45min — 60min — 62min — 75min对应流动相:乙腈:2% — 7% — 15% — 20% — 35% — 50% — 50% ；0.01-2% 冰醋酸:98% — 93% — 85% — 80% — 65% — 50% — 50%,检测波长为 200nm_400nm ;流速为 0.2ml/min-2ml/min ;柱温为20°C -50°C ;所得到的红花黄芪提取物的对照指纹图谱有8个共有特征峰，其相对保留时间分别为:1号峰:0.18，2号峰:0.23，3号峰:0.24，4号峰:0.57，5号峰:0.76,6 号峰(S):1.00，7 号峰:1.15,8 号峰:1.75。
2.根据权利要求1所述的红花黄芪提取物的指纹图谱鉴别方法，其特征在于:其中所述的检测波长为280nm ;流速为0.9ml/min ;柱温为25°C。
3.根据权利要求1所述的红花黄芪提取物的指纹图谱鉴别方法，其特征在于:其中的流动相乙腈-0.01-2%冰醋酸用乙腈-0.03%磷酸溶液或乙腈-0.03%甲酸溶液代替。
【文档编号】G01N30/88GK103969382SQ201310040438
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2013年2月2日 优先权日:2013年2月2日
【发明者】果德安, 吴婉莹, 赵丙贤, 吕延英, 刘蓉霞, 姚帅, 王俊平, 赵兴, 蔡录影, 王丹丹, 侯晋军, 笪娟 申请人:西安世纪盛康药业有限公司