快速测定原料血浆醇沉过程中免疫球蛋白g含量的方法
【专利摘要】本发明公开了一种快速测定原料血浆醇沉过程中免疫球蛋白G含量的方法，操作简单，分析快速，能准确测定醇沉液中IgG的含量。具体步骤如下：（1）每间隔10～15min从条件一致的不同批次原料血浆醇沉过程中采集样品并离心处理；（2）采用近红外光谱分析仪采集样品的原始近红外光谱，并按照常规方法测定样品中IgG的实际含量；（3）将步骤（2）中所得近红外光谱数据与IgG实际含量数据相关联，采用数学方法划分样品集为校正集与验证集，利用化学计量学软件建立校正集样品IgG含量的定量模型；（4）所有光谱经过一阶导数+SG9点平滑处理之后建立模型，并比较不同变量选择方法对建模结果的影响；（5）采用验证集样品对上述建立的数学模型的预测能力进行验证。
【专利说明】快速测定原料血浆醇沉过程中免疫球蛋白G含量的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种测量方法，具体涉及一种利用近红外光谱分析技术快速测定原料血浆醇沉过程中免疫球蛋白G含量的方法。
【背景技术】
[0002]免疫球蛋白G (immunoglobulin G, IgG)是静脉注射人免疫球蛋白(Intravenouslmmunoglobulin G, IVIG)的主要成分,主要用于治疗原发性体液免疫缺陷、特发性血小板减少性紫癜、川崎综合征、格林.巴利综合征和新生儿ABO溶血症，此外，IVIG还可用于重症肌无力、系统性红斑狼疮等。
[0003]IVIG独特的药理活性使得其需求量急剧增加，国内外所生产产品多处于供不应求阶段。增加生产量提高IgG收率不仅是解决国内外现状的有效途径，也有利于稀缺生物资源原料血浆的综合开发利用。从原料血浆中以乙醇沉淀得到F I + II + III是生产IVIG的重要环节，其中上清液中残留的IgG含量是评价醇沉效果的重要指标，对于提高IVIG收率，综合利用血浆具有重要意义。目前IgG的含量测定方法主要包括免疫比浊法、免疫扩散法、紫外分光光度法等，这些方法耗费试剂、方法复杂，过程繁琐，测试费用昂贵，操作时间长，耗时耗力，操作复杂，不能满足实际生产过程中快速分析的需要，因此提出一种快速的分析方法显得尤为重要。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种快速测定原料血浆醇沉过程中免疫球蛋白G含量的方法，操作简单，分析快速，能准确测定醇沉液中IgG的含量，对于提高血浆综合利用率、静注人免疫球蛋白G工艺优化和醇沉过程控制提供数据支持。
[0005]为实现上述目的，本发明采用下述技术方案:
[0006]一种快速测定原料血浆醇沉过程中免疫球蛋白G含量的方法，具体步骤如下:
[0007](I)每间隔10?15min从条件一致的不同批次原料血浆醇沉过程中采集样品并离心处理；
[0008](2)采用近红外光谱分析仪采集样品的原始近红外光谱，并按照常规方法测定样品中IgG的实际含量；
[0009](3)将步骤(2)中所得近红外光谱数据与IgG实际含量数据相关联，采用数学方法划分样品集为校正集与验证集，利用化学计量学软件建立校正集样品IgG含量的定量模型；
[0010](4)所有光谱经过一阶导数+SG9点平滑处理之后建立模型，并比较不同变量选择方法对建模结果的影响；
[0011](5)采用验证集样品对上述建立的数学模型的预测能力进行验证。
[0012]所述步骤(I)中，间隔时间优选为1min。
[0013]所述步骤(I)中，每一批次的醇沉时间为80min，取醇沉条件一致的7个批次，共采集得到63个样品，每个样品的量为lmL，4°C离心处理所有样品。
[0014]所述步骤(1)中，原料血浆为人血浆。
[0015]所述步骤(2 )中，常规方法是指免疫比浊法或免疫扩散法或紫外分光光度法。
[0016]优选的，样品中IgG实际含量的测定方法参照药典选择紫外分光光度法。
[0017]所述步骤(2)中近红外光谱仪为Antaris II傅里叶变换近红外光谱仪，扫描范围为lOOOO100cnT1，分辨率为8CHT1，扫描次数32次，每小时采集一次背景。
[0018]所述步骤(3)中，所采用数学方法为K-S分类方法，划分为42个校正集与21个验证集，所采用化学计量学软件为TQ Analyst及MATLAB R2010a化学计量学软件。
[0019]所述步骤(4)的具体方法为:
[0020]光谱经过一阶导数+SG9点平滑后在全光谱范围区间，即lOOOO100cnT1内考察不同的变量选择方法对模型性能的影响，采用留一法交互验证法确定模型的最佳主因子数，以校正集相关系数R。、交互验证均方根误差(RMSECV)、验证集相关系数Rp、预测均方根误差(RMSEP)为评价指标，以相关系数法、连续投影算法(SPA)、间隔偏最小二乘法(iPLS)选择最佳光谱区间，最终选择最佳光谱区间为10000-7600(^1'
[0021]本发明的有益效果是，近红外光谱分析技术反映了含氢基团的倍频与合频吸收，具有准确、快速、不消耗试剂及环境友好等诸多优点，是过程分析技术的有力工具。通过实验验证，对于原料血浆醇沉过程中免疫球蛋白G的含量测定，采用近红外光谱分析的方法准确性高，分析结果可靠，并且，与常规方法相比，具有方法简单、操作时间短、操作方便等优势，因此，完全可以利用近红外光谱法代替常规方法快速测定原料血浆醇沉过程中免疫球蛋白G的含量，这对于提高血浆综合利用率、IVIG工艺优化和醇沉过程控制也提供了快速的技术数据支持。
【专利附图】
【附图说明】
[0022]图1为本发明采集的原料血浆醇沉液的原始透过光谱；
[0023]图2为本发明获得的经过一阶导数+SG9点平滑预处理后的图谱；
[0024]图3为本发明获得的iPLS所选择的区间图谱；
[0025]图4为本发明获得的校正集样品真实值和预测值相关系数图。
【具体实施方式】
[0026]下面结合附图和实施例对本发明进行进一步的阐述，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。
[0027]实施例1
[0028](I)每间隔1min从原料血浆醇沉过程中采集ImL样品，每一批次醇沉时间为80min。择取醇沉条件一致的7个批次,共采集得到63个样品,4°C、5000rpm的条件下离心样品20min,采用Antarais II傅里叶变换近红外光谱仪(Thermo Fisher, USA)采集上清液样品光谱，采集条件为透射模式，扫描范围为lOOOO^OOOcnT1，分辨率为8CHT1，扫描次数32次，每小时扫描一次背景，采集光谱前仪器开机预热至少30min使仪器稳定，所述上清液样品的原始光谱如图1所示。
[0029](2)采用紫外分光光度法测定样品中IgG的实际含量:取待检样品20 μ L于干净试管中，按序向试管中加入已预热至37°C的稀释后的抗体液(中国生物制品检定所，冻干抗人IgG血清，批号20070101，效价1:80，规格ImL/支)2.0mL,混匀，在37°C水浴中保温lh，轻轻摇匀，按序在340nm波长下测定吸光度值。根据标准曲线计算各样品的IgG含量值。测定值如表1所示。
[0030]表1IgG含量分布表
[0031]
【权利要求】
1.一种快速测定原料血浆醇沉过程中免疫球蛋白G含量的方法，其特征在于，具体步骤如下: (1)每间隔10~15min从条件一致的不同批次原料血浆醇沉过程中采集样品并离心处理； (2)采用近红外光谱分析仪采集样品的原始近红外光谱，并按照常规方法测定样品中IgG的实际含量； (3)将步骤(2)中所得近红外光谱数据与IgG实际含量数据相关联，采用数学方法划分样品集为校正集与验证集，利用化学计量学软件建立校正集样品IgG含量的定量模型； (4)所有光谱经过一阶导数+SG9点平滑处理之后建立模型，并比较不同变量选择方法对建模结果的影响； (5)采用验证集样品对上述建立的数学模型的预测能力进行验证。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，间隔时间为lOmin。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，每一批次的醇沉时间为80min,取醇沉条件一致的7个批次,共采集得到63个样品,每个样品的量为ImL, 4°C离心处理所有样品。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，原料血浆为人血浆。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，常规方法是指免疫比浊法或免疫扩散法或紫外分光光度法。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中近红外光谱仪为Antaris II傅里叶变换近红外光谱仪，扫描范围为lOOOO100cnT1，分辨率为8CHT1，扫描次数32次，每小时采集一次背景。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所采用数学方法为K-S分类方法，划分为42个校正集与21个验证集，所采用化学计量学软件为TQ Analyst及MATLAB R2010a化学计量学软件。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)的具体方法为: 光谱经过一阶导数+SG9点平滑后在全光谱范围区间，即lOOOO100cnT1内考察不同的变量选择方法对模型性能的影响，采用留一法交互验证法确定模型的最佳主因子数，以校正集相关系数R。、交互验证均方根误差、验证集相关系数Rp、预测均方根误差为评价指标，以相关系数法、连续投影算法、间隔偏最小二乘法选择最佳光谱区间，最终选择最佳光谱区间为 10000-7600(^1。
【文档编号】G01N21/359GK104048938SQ201310082861
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2013年3月15日 优先权日:2013年3月15日
【发明者】臧恒昌, 庞广礼, 张惠, 仲立军, 姜玮, 李连, 王金凤 申请人:山东大学