专利名称：一种高粱中单宁含量的试纸检测方法
技术领域：
本发明涉及一种植物成分含量的检测方法，具体涉及一种高粱中单宁含量的试纸检测方法。
背景技术：
单宁是一类广泛存在于植物的果实、根、叶及皮等部位的复杂多元酚类化合物，它可以和蛋白质、生物碱、多糖等生物大分子及多种金属离子发生络合反应形成难溶于水的复合物。它所具有的特殊结构使其在医药、食品、化工、环境等学科领域，均已得到了不同程度应用研究。单宁作为高粱中一种重要的次级代谢产物，是评价高粱品质的一个重要因素。一定条件下，单宁不仅影响食味，而且会产生抗营养作用[8]，降低食物的营养价值。因此，对高粱中单宁的检测就具有十分重要的意义。目前，应用于高粱中单宁检测的方法主要有分光光度法、滴定法和色谱法等，但这些检测方法均具有缺陷，主要体现在以下几个方面:1、整个检测过程容易受外界温度，待检测样品的选择等其他因素的影响，检测结果重复性差；2、整个检测过程操作繁琐，耗时耗力，无法实现现场快速检测；3、检测需要大型仪器和专业的操作人员，对操作人员的要求较高，应用范围窄。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题，本发明要解决的技术问题是:如何提供一种简单，且重现性和稳定性好，同时能现场快速检测高粱中单宁含量的方法。解决该技术问题，本发明采用的技术方案是:一种高粱中单宁含量的试纸检测方法，包括如下步骤:
51:硫氰酸铁试纸制备，该步骤包括:
511:取浓度为0.04 0.06mol.L—1的硫氰酸铁水溶液和浓度为1.0% 3.0%的壳聚糖溶液置于烧杯中，充分混匀，其中硫氰酸铁水溶液与壳聚糖水溶液的体积比为1:1 ;
512:将滤纸放入步骤Sll制备的硫氰酸铁水溶液和壳聚糖水溶液的混合溶液中，充分润湿后取出避光，自然悬垂晾干，即得硫氰酸铁试纸，剪成纸片后使用锡箔纸封存备用；
52:硫氰酸铁试纸标准色阶的制备，该步骤包括:
521:取单宁标准样品溶于蒸馏水中，制成单宁浓度各不相同的N份单宁工作溶液，且该N份单宁工作溶液单宁的浓度范围为O 5.0 mg.ml/1 ；
522:向N份单宁工作溶液的每份中均置入I片步骤SI制备的硫氰酸铁试纸，然后再分别向所述N份单宁工作溶液中加入氢氧化钠水溶液调节pH值至7.(T9.0,混匀静置反应
5 IOmin ；
523:取出硫氰酸铁试纸立即拍照，照片处理后制成硫氰酸铁试纸标准色阶；
53:高粱样品中单宁含量的检测，该步骤包括:
S31:将高粱样品溶于浓度为75%的二甲基甲酰胺水溶液中得高粱储备溶液，其中高粱样品的质量与二甲基甲酰胺水溶液的体积比为1:20，然后将所述高粱储备溶液置于离心管中密封，并用搅拌器搅拌60min± Imin,再以3000r/min离心15min,最后取上清液作为高粱样品单宁提取液；
S32:取步骤S31制备的高粱样品单宁提取液置于容器中，加入蒸馏水，震荡摇匀得到高粱样品的单宁待测溶液，然后将步骤SI制备的硫氰酸铁试纸置入高粱样品的单宁待测溶液中，再加入氢氧化钠水溶液调节pH值至7.(T9.0,混匀静置反应5 IOmin后取出硫氰酸铁试纸，将取出的硫氰酸铁试纸与步骤S2制备的硫氰酸铁试纸标准色阶进行对比，判断出高粱样品的单宁待测溶液的浓度，然后根据高粱样品的单宁待测溶液的体积计算得到单宁的含量。进一步地，所述步骤S22和步骤S32中混匀静置的时间均为5min。所述步骤Sll中硫氰酸铁水溶液的浓度为0.05mol.Γ1。相对于现有技术，本发明具有如下优点:
1、由于本发明提供的对高粱中单宁含量的检测方法是先制备硫氰酸铁试纸和硫氰酸铁试纸标准色阶，然后再将硫氰酸铁试纸置入高粱样品的单宁待测溶液中，反应一定时间后，取出硫氰酸铁试纸与硫氰酸铁试纸标准色阶做比对，从而通过确定高粱样品的单宁待测溶液的浓度来最终确定高粱样品中单宁的含量，本方法不需要依靠负责的仪器，对操作人员的要求较低，同时操作简单，适合广泛应用。2、本发明检测单宁方法中单宁检 测试纸制备简单、方便、稳定性良好，实现了高粱样品中单宁的实时、快速检测。3、本发明提供的对高粱中单宁含量的检测方法，可以避免大型仪器的使用和专业的操作人员，实现检测速度快，稳定性强，便于携带，同时外界因素对其的干扰较小，可以实现单宁的实时、现场快速检测。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。以下实施例中所用的氯化铁、硫氰酸胺、氢氧化钠、壳聚糖和单宁均为分析纯，用蒸馏水配制得实验溶液。实施例1:一种高粱中单宁含量的试纸检测方法，包括如下步骤:
51:硫氰酸铁试纸制备，该步骤包括:
Sll:分别取IOmL浓度为0.05mol -Γ1的硫氰酸铁水溶液和IOmL浓度为2%的壳聚糖水溶液，共同置于50mL的烧杯中，充分混匀；
S12:将滤纸放入步骤Sll制备的硫氰酸铁水溶液和壳聚糖水溶液的混合溶液中，充分润湿后取出避光，自然悬垂晾干，即得硫氰酸铁试纸，然后将该硫氰酸铁试纸裁剪成IcmXlcm的纸片，然后使用锡箔纸封存备用，制备好的硫氰酸铁试纸为淡红色；该硫氰酸铁试纸的最低检出限达即能检出高粱样品的单宁待测溶液单宁的最小浓度为lCT3mg.πιΤΓ1 ；
52:硫氰酸铁试纸标准色阶的制备，该步骤包括:
S21:取1.0g标准单宁，用蒸馏水溶解并定容至IOOmL,避光条件下，加水稀释成8份单宁浓度分别为 0.02 mg.mL '0.04 mg.mL '0.06 mg.mL '0.08 mg.mL '0.10 mg.mL 1 >0.12 mg.mL \θ.14mg.mL \0.16mg.mL \0.18 mg.mL \0.20 mg.mL 1 的溶液作为单宁
工作溶液；
522:向上述8份单宁工作溶液的每份中均置入I片步骤SI制备的硫氰酸铁试纸，然后再分别向所述8份单宁工作溶液中10 μ L浓度为lirtiol -Γ1的氢氧化钠水溶液调节pH值至8.3，混匀静置反应5min;
523:取出硫氰酸铁试纸立即拍照，照片采用现有的具有截图功能的软件进行截图处理，然后制成硫氰酸铁试纸标准色阶；立即指的是取出硫氰酸铁试纸后，再不做任何时间耽误直接拍照；
S3:高粱样品中单宁含量的检测，以泸州糯高粱作为高粱样品，该步骤包括:
531:用移液管取20mL浓度为75%的二甲基甲酰胺水溶液进装有1.0g泸州糯高粱的离心管中，盖好密闭盖并用搅拌器搅拌提取60min± Imin,再以3000r/min离心15min,取上清液作为泸州糯高粱样品单宁提取液；
532:分别取泸州糯高粱单宁样品提取液1.0mL于IOml的试管中，加入蒸馏水9mL，震荡摇匀得到泸州糯高粱样品的单宁待测溶液，然后将步骤SI制备的硫氰酸铁试纸置入泸州糯高粱样品的单宁待测溶液中，再加入10 μ L浓度为10-3mol -L-1的氢氧化钠水溶液调节pH值至8.3，混匀静置反应5min后取出硫氰酸铁试纸，将取出的硫氰酸铁试纸与步骤S2制备的硫氰酸铁试纸标准色阶进行对比，判断出泸州糯高粱样品的单宁待测溶液的浓度，然后根据泸州糯高粱样品的单宁待测溶液的体积计算得到高粱样品中单宁的含量。具体计算如下:
泸州糯高粱中单宁含量以干基中单宁酸的质量分数(％)表示，按下面公式计算
权利要求
1.一种高粱中单宁含量的试纸检测方法，其特征在于，包括如下步骤: 51:硫氰酸铁试纸制备，该步骤包括: 511:取浓度为0.04 0.06mol.L—1的硫氰酸铁水溶液和浓度为1.0% 3.0%的壳聚糖溶液置于烧杯中，充分混匀，其中硫氰酸铁水溶液与壳聚糖水溶液的体积比为1:1 ; 512:将滤纸放入步骤Sll制备的硫氰酸铁水溶液和壳聚糖水溶液的混合溶液中，充分润湿后取出避光，自然悬垂晾干，即得硫氰酸铁试纸，剪成纸片后使用锡箔纸封存备用； 52:硫氰酸铁试纸标准色阶的制备，该步骤包括: 521:取单宁标准样品溶于蒸馏水中，制成单宁浓度各不相同的N份单宁工作溶液，且该N份单宁工作溶液单宁的浓度范围为O 5.0 mg.ml/1 ； 522:向N份单宁工作溶液的每份中均置入I片步骤SI制备的硫氰酸铁试纸，然后再分别向所述N份单宁工作溶液中加入氢氧化钠水溶液调节pH值至7.(T9.0,混匀静置反应5 IOmin ； 523:取出硫氰酸铁试纸立即拍照，照片处理后制成硫氰酸铁试纸标准色阶； 53:高粱样品中单宁含量的检测，该步骤包括: 531:将高粱样品溶于浓度为75%的二甲基甲酰胺水溶液中得高粱储备溶液，其中高粱样品的质量与二甲基甲酰胺水溶液 的体积比为1:20，然后将所述高粱储备溶液置于离心管中密封，并用搅拌器搅拌60min± Imin,再以3000r/min离心15min,最后取上清液作为高粱样品单宁提取液； 532:取步骤S31制备的高粱样品单宁提取液置于容器中，加入蒸馏水，震荡摇匀得到高粱样品的单宁待测溶液，然后将步骤SI制备的硫氰酸铁试纸置入高粱样品的单宁待测溶液中，再加入氢氧化钠水溶液调节pH值至7.(T9.0,混匀静置反应5 IOmin后取出硫氰酸铁试纸，将取出的硫氰酸铁试纸与步骤S2制备的硫氰酸铁试纸标准色阶进行对比，判断出高粱样品的单宁待测溶液的浓 度，然后根据高粱样品的单宁待测溶液的体积计算得到单宁的含量。
2.根据权利要求1所述的高粱中单宁含量的试纸检测方法，其特征在于:所述步骤S22和步骤S32中混匀静置的时间均为5min。
3.根据权利要求1所述的高粱中单宁含量的试纸检测方法，其特征在于:所述步骤Sll中硫氰酸铁水溶液的浓度为0.05mol.L'
全文摘要
本发明涉及一种高粱中单宁含量的试纸检测方法，该方法包括三个步骤，首先利用硫氰酸铁水溶液和壳聚糖水溶液制备硫氰酸铁试纸；其次，再利用制备出的硫氰酸铁试纸制备该试纸对浓度范围为0～5.0mg·mL-1的单宁工作溶液的标准色阶；最后，将从高粱中提取出的高粱样品的单宁待测溶液与硫氰酸铁试纸反应，再将硫氰酸铁试纸于标准色阶比对即可测得该高粱样品的单宁待测溶液的浓度，从而计算出单宁的含量。本发明方法不依赖大型仪器，无需专业的操作人员，可适用范围广泛；另外本发明方法中单宁检测试纸制备简单、方便、稳定性良好，可实现高粱样品中单宁的实时、快速检测。
文档编号G01N21/78GK103217418SQ20131012755
公开日2013年7月24日 申请日期2013年4月12日 优先权日2013年4月12日
发明者霍丹群, 周荣灵, 张宿义, 周军, 侯长军 申请人:泸州品创科技有限公司, 重庆大学