专利名称：一种治疗青光眼、初中期白内障的中药制剂的质量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗青光眼、初中期白内障的中药制剂的质量检测方法，属于制药技术领域。
背景技术：
青光眼和白内障是眼科领域的高发疾病，青光眼是由于各种原因引起的房水循环障碍，眼压增高，进而导致失明，而白内障是晶状体浑浊所致的视物模糊，失明，世界上约25 %的盲人为青光眼和白内障所致。患者可通过手术和非手术两种治疗方法，有些体质好的患者术后恢复较好，但对有些不适合手术的患者来说，唯有选择药物治疗的方法，中医领域对其治疗有独特的一面，对部分患者的视力提高有一定的效果。现检索到2011年11月16日公开的公开号为CN102240366A的专利提供了一种中药复明制剂的质量检测方法，该发明检测范围有限，仅检测了盐酸小檗碱和大黄 K本发明所述中药制剂通过滋补肝肾，养阴生津，清肝明目，用于肝肾阴虚所致的羞明畏光、视物模糊，主要治疗青光眼，初、中期白内障，该中药制剂采用由羚羊角0.15%、蒺藜6.19%、木贼3.87%、菊花7.74%、车前子3.87%、夏枯草3.87%、决明子6.19%、人参2.32%、制山茱萸3.87%、石斛6.19%、枸杞子6.19%、菟丝子
3.87%、女贞子3.87%、石决明7.74%、黄连1.55%、谷精草3.87%、木通3.87%、熟地黄3.87%、山药3.87%、泽泻1.55%、茯苓3.87%、牡丹皮3.87%、地黄3.87%、槟榔3.87%制成药剂学上任一种中药制剂。本发明提供了一种该中药制剂的质量检测方法，该质量检测方法简单方便且稳定可靠，一定程度上扩大了检测范围，有效确保产品质量。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗青光眼、初中期白内障的中药制剂的质量检测方法，该质量检测方法简单方便且稳定可靠，检测了不同的有效物质，有效确保产品质量。为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案:
本发明所述的中药制剂由羚羊角0.15%、蒺藜6.19%、木贼3.87%、菊花7.74%、车前子3.87%、夏枯草3.87%、决明子6.19%、人参2.32%、制山茱萸3.87%、石斛6.19%、枸杞子
6.19%、菟丝子3.87%、女贞子3.87%、石决明7.74%、黄连1.55%、谷精草3.87%、木通3.87%、熟地黄3.87%、山药3.87%、泽泻1.55%、茯苓3.87%、牡丹皮3.87%、地黄3.87%、槟榔3.87%制成，该中药制剂可以是药剂学上所述的任一种剂型，其质量检测方法可以是显微鉴别方法、薄层鉴别方法或含量测定方法中的一种或几种。1.显微鉴别方法:
(O显微鉴别蒺藜果皮纤维上下纵横交错排列；
(2)显微鉴别木贼表面观细胞呈长方形，垂周壁甚厚，深波状弯曲；
(3)显微鉴别决明子种皮栅状细胞I列，无色或淡黄色，长40 72mm；
(4)显微鉴别石斛纤维束周围细胞中含类圆形硅质块，直径3 15_，壁稍厚，排成纵行；
(5)显微鉴别羚羊角不规则碎块近无色、淡黄白色或淡灰色，微透明，稍有光泽，表明颗粒性，可见长圆形、新月形、长条形或裂缝状的空隙；
(6)显微鉴别菊花花粉粒黄色，类圆形，直径22 38_，表面为负网状纹饰并具刺。2.薄层鉴别方法1:
(I)黄连薄层鉴别
取相当于9.69g生药粉的该中药制剂，研细，加甲醇40ml，超声处理25分钟，滤过，滤液加入100 200目、内径约1cm、重量为IOg的中性氧化铝柱上，收集洗脱液，置水浴上蒸至近干，加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取黄连对照药材lg，同法制备对照药材溶液；再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每Iml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液4 8:1 4:2 3:1 2:0.5 2为展开剂,置氨蒸气饱和的展开缸内，预饱和15分钟，展开，展距约15cm，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(2)决明子薄层鉴别
取相当于17.23g生药粉的该中药制剂，研细，加甲醇30ml，浸溃I小时，振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml使溶解，再加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液；另取决明子对照药材lg，同法制备对照药材溶液；再取大黄酚对照品，加三氯甲烷制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4ml，分别点于同一娃胶G薄层板上，以30 60°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸10 20: 2 8: 0.5 2的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下斑点变为红色。3.薄层鉴别方法2:
(I)制山茱萸薄层鉴别
取相当于6.46g生药粉的该中药制剂，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水20ml使溶解，以水饱和正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取马钱苷对照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ml,分别点于同一娃胶G薄层板上，以三氯甲烧-甲醇-水2 6:0.5
1.5:0.1 0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)人参薄层鉴别
取相当于38.76g生药粉的该中药制剂，研细，加三氯甲烷40ml，超声处理20分钟，滤过，弃去三氯甲烷液，药渣加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，加于已处理好的100 120目、内径10 15mm、重量为15g的中性氧化铝柱上，用40%甲醇150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次25ml，合并提取液，用水洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷RgpReAb1对照品，加甲醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各6ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烧-甲醇-水10 15: 5 9:1 3的下层溶液为展开剂,展开,取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的三个紫红色斑点，365nm紫外光灯下，显相同的突光斑点。4.含量测定方法:
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水6 8:88 90为流动相，检测波长为236nm。理论板数按马钱苷峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备取马钱苷对照品，加50%甲醇制成每Iml含20μ g的溶液，即得。供试品溶液的制备取该中药制剂，研细，取约相当于6.46g生药粉的细粉，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流I小时，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加在100 200目、内径1cm、重量为4g的中性氧化铝柱上，用40%甲醇50ml洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，并转移至IOml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ml，注入液相色谱仪，测定，即得。5.由薄层鉴别方法和含量测定方法构成的检测方法:
薄层鉴别: (I)制山茱萸薄层鉴别
取相当于6.46g生药粉的该中药制剂，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水20ml使溶解，以水饱和正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取马钱苷对照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ml,分别点于同一娃胶G薄层板上，以三氯甲烧-甲醇-水2 6:0.5
1.5:0.1 0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)人参薄层鉴别
取相当于38.76g生药粉的该中药制剂，研细，加三氯甲烷40ml，超声处理20分钟，滤过，弃去三氯甲烷液，药渣加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，加于已处理好的100 120目、内径10 15mm、重量为15g的中性氧化铝柱上，用40%甲醇150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次25ml，合并提取液，用水洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷RgpR^Rb1对照品，加甲醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各6ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烧-甲醇-水10 15: 5 9:1 3的下层溶液为展开剂,展开,取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的三个紫红色斑点，365nm紫外光灯下，显相同的突光斑点。含量测定方法:
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水6 8:88 90为流动相，检测波长为236nm。理论板数按马钱苷峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备取马钱苷对照品，加50%甲醇制成每Iml含20 μ g的溶液，即得。供试品溶液的制备取该中药制剂，研细，取约相当于6.46g生药粉的细粉，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流I小时，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加在100 200目、内径1cm、重量为4g的中性氧化铝柱上，用40%甲醇50ml洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，并转移至IOml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ml，注入液相色谱仪，测定，即得。6.由显微鉴别方法、薄层鉴别方法和含量测定方法构成的检测方法。取本品适量，研细，置显微镜下观察:
(O显微鉴别蒺藜果皮纤维上下纵横交错排列；
(2)显微鉴别木贼表面观细胞呈长方形，垂周壁甚厚，深波状弯曲；
(3)显微鉴别决明子种皮栅状细胞I列，无色或淡黄色，长40 72mm；
(4)显微鉴别石斛纤维束周围细胞中含类圆形硅质块，直径3 15_，壁稍厚，排成纵
行；
(5)显微鉴别羚羊角不规则碎块近无色、淡黄白色或淡灰色，微透明，稍有光泽，表明颗粒性，可见长圆形、新月形、长条形或裂缝状的空隙；
(6)显微鉴别菊花花粉粒黄色，类圆形，直径22 38_，表面为负网状纹饰并具刺。薄层鉴别方法:
(I)黄连薄层鉴别
取相当于9.69g生药粉的该中药制剂，研细，加甲醇40ml，超声处理25分钟，滤过，滤液加入100 200目、内径约1cm、重量为IOg的中性氧化铝柱上，收集洗脱液，置水浴上蒸至近干，加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取黄连对照药材lg，同法制备对照药材溶液；再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每Iml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液4 8:1 4:2 3:1 2:0.5 2为展开剂,置氨蒸气饱和的展开缸内，预饱和15分钟，展开，展距约15cm，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。( 2)决明子薄层鉴别
取相当于17.23g生药粉的该中药制剂研细，加甲醇30ml，浸溃I小时，振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml使溶解，再加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液；另取决明子对照药材lg，同法制备对照药材溶液；再取大黄酚对照品，加三氯甲烷制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4ml，分别点于同一娃胶G薄层板上，以30 60°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸10 20: 2 8: 0.5 2的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下斑点变为红色。(3)制山茱萸薄层鉴别
取相当于6.46g生药粉的该中药制剂，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水20ml使溶解，以水饱和正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取马钱苷对照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ml,分别点于同一娃胶G薄层板上，以三氯甲烧-甲醇-水2 6:0.5
1.5:0.1 0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(4)人参薄层鉴别
取相当于38.76g生药粉的该中药制剂，研细，加三氯甲烷40ml，超声处理20分钟，滤过，弃去三氯甲烷液，药渣加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，加于已处理好的100 120目、内径10 15mm、重量为15g的中性氧化铝柱上，用40%甲醇150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次25ml，合并提取液，用水洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷RgpReAb1对照品，加甲醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各6ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烧-甲醇-水10 15: 5 9:1 3的下层溶液为展开剂,展开,取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的三个紫红色斑点，365nm紫外光灯下，显相同的突光斑点。含量测定方法:
(I)盐酸小檗碱的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液40 45: 55 60为流动相，检测波长为265nm。，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每Iml含0.0lmg的溶液，即得。供试品溶液的制备取该中药制剂，研细，取约相当于3.23g生药粉的细粉，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50ml甲醇-盐酸100: 1，称定重量，超声处理30分钟，功率为250W、频率为40kHz，取出，放凉，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用直径为0.45mm的微孔滤膜滤过，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ml，注入液相色谱仪，测定，即得。(2)马钱苷的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水6 8:88 90为流动相，检测波长为236nm。理论板数按马钱苷峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备取马钱苷对照品，加50%甲醇制成每Iml含20 μ g的溶液，即得。供试品溶液的制备取该中药制剂，研细，取约相当于6.46g生药粉的细粉，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流I小时，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加在100 200目、内径1cm、重量为4g的中性氧化铝柱上，用40%甲醇50ml洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，并转移至IOml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ml，注入液相色谱仪，测定，即得。本发明提供了一种治疗青光眼、初中期白内障的中药制剂的质量检测方法，该中药制剂由羚羊角0.15%、蒺藜6.19%、木贼3.87%、菊花7.74%、车前子3.87%、夏枯草3.87%、决明子6.19%、人参2.32%、制山茱萸3.87%、石斛6.19%、枸杞子6.19%、菟丝子3.87%、女贞子3.87%、石决明7.74%、黄连1.55%、谷精草3.87%、木通3.87%、熟地黄3.87%、山药3.87%、泽泻1.55%、茯苓3.87%、牡丹皮3.87%、地黄3.87%、槟榔3.87%制成药剂学上任一种剂型，通过滋补肝肾，养阴生津，清肝明目，用于肝肾阴虚所致的羞明畏光、视物模糊，主治青光目艮、初中期白内障。本发明通过大量的实验研究、对比，确定了一种可操作性强、准确度高的质量检测方法，显微鉴别制剂中的蒺藜、木贼、决明子、石斛、羚羊角和菊花；薄层鉴别黄芩、决明子、制山茱萸和人参；含量测定盐酸小檗碱和马钱苷。该质量检测方法能够有效的检测产品是否合格、质量是否优劣，保证了患者用药的安全性、有效性。现就本发明的重要研究方法介绍如下:
一、实验药品
实验药品处方:
羚羊角Ig蒺藜40g木贼25g
菊花50g车前子25g夏枯草25g
决明子40g人参15g制山茱萸25g
石斛40g枸杞子40g英丝子25g
女贞子25g石决明50g黄连IOg
谷精草25g木通25g熟地黄25g
山药25g泽湾IOg获茶25g
牡丹皮25g地黄25g槟榔25g
实验药品制备方法:
以上二十四味，蒺藜、木贼、菊花、车前子、决明子、山茱萸、人参、石斛粉碎成细粉，过筛，混匀；羚羊角粉碎成细粉，与上述细粉混匀；其余枸杞子等十五味，加水煎煮二次，每次2小时，煎液滤过，滤液合并，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10 1.15 (60°C)的清膏。将上述药粉及淀粉适量混匀，与清膏喷雾制粒，装入胶囊，制成1000粒，即得。二、主要研究过程 含量测定方法的研究:
I仪器与试药仪器:戴安U3000高效液相色谱仪；FA2004 0.lmg/210g型电子分析天平。
试药:试剂均为分析纯，乙腈为色谱纯；
对照品:马钱苷(中检所提供，批号111640-200604)
样品及药材:西安碑林药业股份有限公司提供，样品批号:201211001、201211002、201211003、201211004、201211005、201211006、201211007、201211008、2012110092实验部分2.1色谱条件
色谱柱:十八烷基键合硅胶柱；
波长:236nm ；
柱温:40°C ；流速:1.0ml/min ；
流动相:乙腈-水(7: 89)； 理论踏板数不得低于2000。2.2供试品溶液的制备
样品溶液制备:取本品的内容物，研细，取细粉约3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流I小时，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加在中性氧化铝柱(100 200目，4g，内径Icm)上，用40%甲醇50ml洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，并转移至IOml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。对照品溶液的制备的:取马钱苷对照品，加50%甲醇制成每Iml含2(^g的溶液，即得。2.3专属性试验
按照处方制备不含制山茱萸的阴性样品，按照供试品溶液的制备方法制备空白对照溶液，按2.2方法进行测定，结果表明:在与马钱苷对照品保留时间相同位置处，无干扰峰出现，可见该质量检测方法专属性强。2.4精密度试验
精密吸取浓度为0.2096mg/ml的对照品溶液，重复进样5次，结果见下表I。表I
权利要求
1.一种治疗青光眼、初中期白内障的中药制剂的质量检测方法，该中药制剂由羚羊角0.15%、蒺藜6.19%、木贼3.87%、菊花7.74%、车前子3.87%、夏枯草3.87%、决明子6.19%、人参2.32%、制山茱萸3.87%、石斛6.19%、枸杞子6.19%、菟丝子3.87%、女贞子3.87%、石决明7.74%、黄连1.55%、谷精草3.87%、木通3.87%、熟地黄3.87%、山药3.87%、泽泻1.55%、茯苓3.87%、牡丹皮3.87%、地黄3.87%、槟榔3.87%制成，其特征在于该中药制剂的质量检测方法为显微鉴别方法、薄层鉴别方法或含量测定方法中的一种或几种。
2.根据权利要求1所述的一种治疗青光眼、初中期白内障的中药制剂的质量检测方法，该中药制剂由羚羊角0.15%、蒺藜6.19%、木贼3.87%、菊花7.74%、车前子3.87%、夏枯草3.87%、决明子6.19%、人参2.32%、制山茱萸3.87%、石斛6.19%、枸杞子6.19%、菟丝子3.87%、女贞子3.87%、石决明7.74%、黄连1.55%、谷精草3.87%、木通3.87%、熟地黄3.87%、山药3.87%、泽泻1.55%、茯苓3.87%、牡丹皮3.87%、地黄3.87%、槟榔3.87%制成，其特征在于该中药制剂的质量检测方法为显微鉴别方法。
3.根据权利要求2所述的一种治疗青光眼、初中期白内障的中药制剂的质量检测方法，其特征在于:取本品适量，研细，置显微镜下观察: (1)显微鉴别蒺藜果皮纤 维上下纵横交错排列； (2)显微鉴别木贼表面观细胞呈长方形，垂周壁甚厚，深波状弯曲； (3)显微鉴别决明子种皮栅状细胞I列，无色或淡黄色，长40 72mm； (4)显微鉴别石斛纤维束周围细胞中含类圆形硅质块，直径3 15_，壁稍厚，排成纵行； (5)显微鉴别羚羊角不规则碎块近无色、淡黄白色或淡灰色，微透明，稍有光泽，表明颗粒性，可见长圆形、新月形、长条形或裂缝状的空隙； (6)显微鉴别菊花花粉粒黄色，类圆形，直径22 38_，表面为负网状纹饰并具刺。
4.根据权利要求1所述的一种治疗青光眼、初中期白内障的中药制剂的质量检测方法，该中药制剂由羚羊角0.15%、蒺藜6.19%、木贼3.87%、菊花7.74%、车前子3.87%、夏枯草3.87%、决明子6.19%、人参2.32%、制山茱萸3.87%、石斛6.19%、枸杞子6.19%、菟丝子3.87%、女贞子3.87%、石决明7.74%、黄连1.55%、谷精草3.87%、木通3.87%、熟地黄3.87%、山药3.87%、泽泻1.55%、茯苓3.87%、牡丹皮3.87%、地黄3.87%、槟榔3.87%制成，其特征在于该中药制剂的质量检测方法为薄层鉴别方法。
5.根据权利要求4所述的一种治疗青光眼、初中期白内障的中药制剂的质量检测方法，其特征在于鉴别该中药制剂中的黄连、决明子； (I)黄连薄层鉴别 取相当于9.69g生药粉的该中药制剂，研细，加甲醇40ml，超声处理25分钟，滤过，滤液加入100 200目、内径约1cm、重量为IOg的中性氧化铝柱上，收集洗脱液，置水浴上蒸至近干，加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取黄连对照药材lg，同法制备对照药材溶液；再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每Iml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液4 8:1 4:2 3:1 2:0.5 2为展开剂,置氨蒸气饱和的展开缸内，预饱和15分钟，展开，展距约15cm，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；决明子薄层鉴别 (2)决明子薄层鉴别 取相当于17.23g生药粉的该中药制剂，研细，加甲醇30ml，浸溃I小时，振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml使溶解，再加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液；另取决明子对照药材lg，同法制备对照药材溶液；再取大黄酚对照品，加三氯甲烷制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4ml，分别点于同一娃胶G薄层板上，以30 60°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸10 20: 2 8: 0.5 2的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下斑点变为红色。
6.根据权利要求4所述的一种治疗青光眼、初中期白内障的中药制剂的质量检测方法，其特征在于鉴别该中药制剂中的制山茱萸、人参； (1)制山茱萸薄层鉴别 取相当于6.46g生药粉的该中药制剂，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水20ml使溶解，以水饱和正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取马钱苷对照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ml,分别点于同一娃胶G薄层板上，以三氯甲烧-甲醇-水2 6:0.5 1.5:0.1 0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (2)人参薄层鉴别 取相当于38.76g生药粉的该中药制剂，研细，加三氯甲烷40ml，超声处理20分钟，滤过，弃去三氯甲烷液，药渣加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，加于已处理好的100 120目、内径10 15mm、重量为15g的中性氧化铝柱上，用40%甲醇150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次25ml，合并提取液，用水洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷RgpR^Rb1对照品，加甲醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各6ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烧-甲醇-水10 15: 5 9:1 3的下层溶液为展开剂,展开,取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的三个紫红色斑点，365nm紫外光灯下，显相同的突光斑点。
7.根据权利要求1所述的一种治疗青光眼、初中期白内障的中药制剂的质量检测方法，该中药制剂由羚羊角0.15%、蒺藜6.19%、木贼3.87%、菊花7.74%、车前子3.87%、夏枯草3.87%、决明子6.19%、人参2.32%、制山茱萸3.87%、石斛6.19%、枸杞子6.19%、菟丝子3.87%、女贞子3.87%、石决明7.74%、黄连1.55%、谷精草3.87%、木通3.87%、熟地黄3.87%、山药3.87%、泽泻1.55%、茯苓3.87%、牡丹皮3.87%、地黄3.87%、槟榔3.87%制成，其特征在于该中药制剂的质量检测方法为含量测定方法。
8.根据权利要求7所述的一种治疗青光眼、初中期白内障的中药制剂的质量检测方法，其特征在于: 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水6 8:88 90为流动相，检测波长为236nm ;理论板数按马钱苷峰计算应不低于2000 ； 对照品溶液的制备取马钱苷对照品，加50%甲醇制成每Iml含20μ g的溶液，即得； 供试品溶液的制备取该中药制剂，研细，取约相当于6.46g生药粉的细粉，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流I小时，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加在100 200目、内径1cm、重量为4g的中性氧化铝柱上，用40%甲醇50ml洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，并转移至IOml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ml，注入液相色谱仪，测定，即得。
9.根据权利要求1所述的一种治疗青光眼、初中期白内障的中药制剂的质量检测方法，该中药制剂由羚羊角0.15%、蒺藜6.19%、木贼3.87%、菊花7.74%、车前子3.87%、夏枯草3.87%、决明子6.19%、人参2.32%、制山茱萸3.87%、石斛6.19%、枸杞子6.19%、菟丝子.3.87%、女贞子3.87%、石决明7.74%、黄连1.55%、谷精草3.87%、木通3.87%、熟地黄3.87%、山药3.87%、泽泻1.55%、茯苓3.87%、牡丹皮3.87%、地黄3.87%、槟榔3.87%制成，其特征在于该中药制剂的质量检测方法由薄层鉴别方法和含量测定方法组成； 薄层鉴别: (1)制山茱萸薄层鉴别 取相当于6.46g生药粉的该中药制剂，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水20ml使溶解，以水饱和正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取马钱苷对照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ml,分别点于同一娃胶G薄层板上，以三氯甲烧-甲醇-水2 6:0.5 .1.5:0.1 0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (2)人参薄层鉴别 取相当于38.76g生药粉的该中药制剂，研细，加三氯甲烷40ml，超声处理20分钟，滤过，弃去三氯甲烷液，药渣加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，加于已处理好的100 120目、内径10 15mm、重量为15g的中性氧化铝柱上，用40%甲醇150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次25ml，合并提取液，用水洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷RgpR^Rb1对照品，加甲醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各6ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烧-甲醇-水10 15: 5 9:1 3的下层溶液为展开剂,展开,取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的三个紫红色斑点，365nm紫外光灯下，显相同的突光斑点； 含量测定方法:色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水6 8:88 90为流动相，检测波长为236nm ;理论板数按马钱苷峰计算应不低于2000 ； 对照品溶液的制备取马钱苷对照品，加50%甲醇制成每Iml含20μ g的溶液，即得； 供试品溶液的制备取该中药制剂，研细，取约相当于6.46g生药粉的细粉，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流I小时，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加在100 200目、内径1cm、重量为4g的中性氧化铝柱上，用40%甲醇50ml洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，并转移至IOml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ml，注入液相色谱仪，测定，即得。
10.根据权利要求1所述的一种治疗青光眼、初中期白内障的中药制剂的质量检测方法，该中药制剂由羚羊角0.15%、蒺藜6.19%、木贼3.87%、菊花7.74%、车前子3.87%、夏枯草3.87%、决明子6.19%、人参2.32%、制山茱萸3.87%、石斛6.19%、枸杞子6.19%、菟丝子。3.87%、女贞子3.87%、石决明7.74%、黄连1.55%、谷精草3.87%、木通3.87%、熟地黄3.87%、山药3.87%、泽泻1.55%、茯苓3.87%、牡丹皮3.87%、地黄3.87%、槟榔3.87%制成，其特征在于该中药制剂的质量检测方法由显微鉴别方法、薄层鉴别方法和含量测定方法组成； 显微鉴别方法: 取本品适量，研细，置显微镜下观察: (1)显微鉴别蒺藜果皮纤维上下纵横交错排列； (2)显微鉴别木贼表面观细胞呈长方形，垂周壁甚厚，深波状弯曲； (3)显微鉴别决明子种皮栅状细胞I列，无色或淡黄色，长40 72mm； (4)显微鉴别石斛纤维束周围细胞中含类圆形硅质块，直径3 15_，壁稍厚，排成纵行； (5)显微鉴别羚羊角不规则碎块近无色、淡黄白色或淡灰色，微透明，稍有光泽，表明颗粒性，可见长圆形、新月形、长条形或裂缝状的空隙； (6)显微鉴别菊花花粉粒黄色，类圆形，直径22 38_，表面为负网状纹饰并具刺； 薄层鉴别方法: (1)黄连薄层鉴别 取相当于9.69g生药粉的该中药制剂，研细，加甲醇40ml，超声处理25分钟，滤过，滤液加入100 200目、内径约1cm、重量为IOg的中性氧化铝柱上，收集洗脱液，置水浴上蒸至近干，加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取黄连对照药材lg，同法制备对照药材溶液；再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每Iml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液4 8:1 4:2 3:1 2:0.5 2为展开剂,置氨蒸气饱和的展开缸内，预饱和15分钟，展开，展距约15cm，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (2)决明子薄层鉴别 取相当于17.23g生药粉的该中药制剂研细，加甲醇30ml，浸溃I小时，振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml使溶解，再加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液；另取决明子对照药材lg，同法制备对照药材溶液；再取大黄酚对照品，加三氯甲烷制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4ml，分别点于同一娃胶G薄层板上，以30 60°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸10 20: 2 8: 0.5 2的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下斑点变为红色； (3)制山茱萸薄层鉴别 取相当于6.46g生药粉的该中药制剂，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水20ml使溶解，以水饱和正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取马钱苷对照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ml,分别点于同一娃胶G薄层板上，以三氯甲烧-甲醇-水2 6:0.5 .1.5:0.1 0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (4)人参薄层鉴别 取相当于38.76g生药粉的该中药制剂，研细，加三氯甲烷40ml，超声处理20分钟，滤过，弃去三氯甲烷液，药渣加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，加于已处理好的100 120目、内径10 15mm、重量为15g的中性氧化铝柱上，用40%甲醇150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次25ml，合并提取液，用水洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷RgpR^Rb1对照品，加甲醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各6ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烧-甲醇-水10 15: 5 9:1 3的下层溶液为展开剂,展开,取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的三个紫红色斑点，365nm紫外光灯下，显相同的突光斑点； 含量测定方法: (1)盐酸小檗碱的含量测定 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液40 45: 55 60为流动相，检测波长为265nm;理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于2000 ； 对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每Iml含0.0lmg的溶液，即得； 供试品溶液的制备取该中药制剂，研细，取约相当于3.23g生药粉的细粉，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50ml甲醇-盐酸100: 1，称定重量，超声处理30分钟，功率为250W、频率为40kHz，取出，放凉，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用直径为0.45mm的微孔滤膜滤过，即得； 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ml，注入液相色谱仪，测定，即得； (2)马钱苷的含量测定 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水6 8:88 90为流动相，检测波长为236nm ;理论板数按马钱苷峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备取马钱苷对照品，加50%甲醇制成每Iml含20μ g的溶液，即得；供试品溶液的制备取该中药制剂，研细，取约相当于6.46g生药粉的细粉，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50 %甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流I小时，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加在100 200目、内径1cm、重量为4g的中性氧化铝柱上，用40%甲醇50ml洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，并转移至IOml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取 对照品溶液与供试品溶液各10ml，注入液相色谱仪，测定，即得。
全文摘要
本发明涉及一种治疗青光眼、初中期白内障的中药制剂的质量检测方法，该中药制剂由羚羊角0.15%、蒺藜6.19%、木贼3.87%、菊花7.74%、车前子3.87%、夏枯草3.87%、决明子6.19%、人参2.32%、制山茱萸3.87%、石斛6.19%、枸杞子6.19%、菟丝子3.87%、女贞子3.87%、石决明7.74%、黄连1.55%、谷精草3.87%、木通3.87%、熟地黄3.87%、山药3.87%、泽泻1.55%、茯苓3.87%、牡丹皮3.87%、地黄3.87%、槟榔3.87%制成药剂学上任一种剂型，过滋补肝肾，养阴生津，清肝明目，用于肝肾阴虚所致的羞明畏光、视物模糊，主要治疗青光眼、初中期白内障。本发明提供的质量检测方法为显微鉴别制剂中的蒺藜、木贼、决明子、石斛、羚羊角和菊花；薄层鉴别黄芩、决明子、制山茱萸和人参；含量测定盐酸小檗碱和马钱苷。该质量检测方法能够有效的检测产品是否合格、质量是否优劣，保证了患者用药的安全性、有效性。
文档编号G01N30/02GK103207148SQ20131013232
公开日2013年7月17日 申请日期2013年4月17日 优先权日2013年4月17日
发明者黄小华, 付彬, 王文宏, 周培 申请人:西安碑林药业股份有限公司