胶乳增强免疫比浊法甘胆酸测定试剂盒的制备方法
【专利摘要】胶乳增强免疫比浊法甘胆酸测定试剂盒的制备方法，它涉及甘胆酸测定试剂盒【技术领域】，它的制备方法为：生产设备准备；生产：生产前准备；生产线清场；生产操作者穿戴防护用品；测定所用纯化水电导率；名称正确、批号为指定使用者、原料物态正常；预称；预称容器上有下列内容的标签；核对称取的原料量；将原料容器上的资料记录到原料记录单上；产品配制；分装；组装。它适用于批量包装甘胆酸液体双试剂生产全过程，采用亲水性纳米胶乳颗粒，试剂更稳定；采用高纯度特异性单克隆甘胆酸抗体，准确性高，可以区分胆酸和其它结合胆汁酸，测定血清中真正的甘胆酸水平，适合临床孕妇产前健康普查，标本量很大，经济和社会效益明显。
【专利说明】胶乳增强免疫比浊法甘胆酸测定试剂盒的制备方法
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及甘胆酸测定试剂盒【技术领域】，具体涉及一种胶乳增强免疫比浊法甘胆 酸测定试剂盒的制备方法。
【背景技术】：
[0002] 甘胆酸（cholyglycine，CG)是胆酸和甘氨酸结合而成的结合胆酸。是主要胆酸之 一，胆酸（CA)和鶴去氧胆酸（CDCA)总称胆汁酸。在血清中主要W蛋白结合形式存在。肝脏 是胆汁酸合成的唯一器官。CG在肝细胞合成，经胆管排入胆囊胆存，餐后胆囊收缩，随同胆 汁排入小肠，参与脂肪的消化吸收，95%的胆酸由小肠粘膜重吸收入血，经口静脉输送至肝 脏由肝细胞摄取。正常情况下，肝脏能有效摄取口静脉血中99%W上的CG重新泌入胆汁， 仅有1% CG溢入体循环。当肝细胞受损时，肝细胞不能有效摄取经肠肝循环达肝脏的CG， 致使血中CG含量增高；胆汁齡滞时，肝脏排泄胆酸发生障碍而返流入血循环中，也可使血 中CG含量增高。临床证明；肝损伤的生化指标中CG比谷丙转氨酶，胆红素等试验更敏感。
[0003] 1、甘胆酸是评价肝细胞功能及其肝胆系统循环功能的敏感指标，其诊断价值优于 现有常规肝功能实验，可W在临床上起到决定性作用。
[0004] 正常成人无论是空腹还是餐后，其甘胆酸浓度均稳定在低水平，而在急性肝炎、肝 硬化、慢性迁延性（活动性）肝炎、肝癌、胆囊炎W及胆汗癒滞患者甘胆酸浓度均有不同程 度的增高，升高的阳性率均在80% W上；尤其当弥漫性肝实质损害时，其浓度高低与肝脏 病变范围及程度密切相关，可作为肝硬化早期诊断的一项灵敏指标。究其原因是由于在肝 硬化患者血清白蛋白水平降低，n体分流W及对甘胆酸清除率的降低，从而导致肝硬化患 者血中甘胆酸值增高。
[0005] 2、妊娠期肝内胆汁齡积症（IC巧是妊娠期特有的并发症，常发生于妊娠中晚期， 临床上W皮肤瘦痒及肝内胆汁齡积为指标特征。由于ICP可引起早产、胎儿窘迫、死胎、新 生儿死亡及产后出血，故被列为高危妊娠而逐渐引起人们的重视。
[0006] 血清甘胆酸测定是诊断孕产妇ICP最敏感最特异的唯一指标，并且可对妊娠期肝 内不同胆汁齡积程度进行动态跟踪。因此建议将血清甘胆酸测定作为孕妇产前检查的常规 项目。
[0007] 3、由于小肠在甘胆酸代谢过程中（肝肠循环）有着非常重要的作用，因此肠道功 能的变化可引起甘胆酸结果异常。是现有所有诊断指标中唯一反映肠道功能的指标。
[0008] 综上所述，研制出一种高效的甘胆酸试剂盒是十分必要的。
【发明内容】
：
[0009] 本发明的目的是提供一种胶乳增强免疫比浊法甘胆酸测定试剂盒的制备方法，它 适用于批量包装甘胆酸液体双试剂生产全过程，采用亲水性纳米胶乳颗粒，试剂更稳定；采 用高纯度特异性单克隆甘胆酸抗体，准确性高，可W区分胆酸和其它结合胆汁酸，测定血清 中真正的甘胆酸水平，适合临床孕妇产前健康普查，标本量很大，经济和社会效益明显。
[0010] 为了解决【背景技术】所存在的问题，本发明是采用W下技术方案：它的制备方法 为：
[0011] 1、生产设备准备：混合容器：容积大于试剂生产体积的高密度聚己帰桶4只；揽拌 器：揽拌涂四氣己帰的慢速电动揽拌器；称量设备；精度±0. OOOl克的天平1台；聚己帰容 器：预称原料用，有密封盖，2只；原料称量用勺、伊；PH计，定标缓冲液，具有温度补偿功能 的PH计和相应的定标液；仪器，日立7060全自动生化分析仪；过滤设备，孔径5 y m专用； 标签；用于原材料称量，标明原料名称、重量等；标牌；用于标示；1-混合容器；2-整批待检 产品容器。
[0012] 所述的标牌内容：产品代码、产品名称、批号、生产日期、过滤日期和操作者签名。
[0013] 2、生产；生产前准备；所有生产设备必须清洁；生产线清场；生产场地仅放置本批 量包装试剂生产用品；生产操作者穿戴防护用品：清洁工作服、戴口罩、防护眼镜、乳胶手 套或一次性手套和发罩；核对各种生产运行单；测定所用纯化水电导率，应小于2. Oy s/ cm ;原料包装的核对：名称正确、批号为指定使用者、原料物态正常；预称；所有原料都 必须预称，并由第二人核对；预称容器上有下列内容的标签；容器号、原料代码、批号、容 器和盖的皮重、原料净重、预称者签名/日期、核对者签名/日期；按规定的计算量称取 Trisl2. 114g，甘胆酸抗体乳胶颗粒息浊液2. 5ml并密封容器盖；核对称取的原料量；总重 量（原料+容器）=原料净重+皮重；将原料容器上的资料记录到原料记录单上。
[0014] 3、产品配制；混合容器和揽棒的准备；混合容器和揽棒用自来水冲洗5次；混合容 器和揽棒再用去离子水冲洗3次；干燥箱烧干密封装袋备用；将电动揽拌机装配到混合容 器上；在混合容器上标签，标明产品代码、批号、名称、生产量、日期和操作者；在混合容器 A、B中加入生产总量90 %的纯化水；在混合容器A中加入Trisl2. 1 Hg,揽拌至完全溶解； 补纯化水至生产总量比，然后用Imol/L的化OH溶液调PH值至7. 2(2(TC );用专用滤器将 上述混合溶液过滤入另一混合容器C中；在混合容器B中加入甘胆酸抗体乳胶颗粒息浊液 2. 5ml，揽拌至完全混合，然后补纯化水至生产总量250ml ;用专用滤器将上述混合溶液过 滤入另一混合容器D中；从混合容器C中取出1份80ml样品，从容器D中取出1份20ml样 品，作下列过程试剂：
[00巧]a)空白吸光度（37°C，600nm) :< 1. 2A ;
[0016] b)从混合容器中抽样进行半成品抽样全检；
[0017] 如不符合规格，报告给生产车间技术人员；如符合规格，将测定数据记录在半成品 检验报告单中，并将大包装产品密封后送入2-8C冷库。
[0018] 4、分装；生产环境；分装过程在十万级净化区内进行，温度IOC -26 C，湿度 45% -65% ;分装前清场，领取经检测合格的半成品试剂，核对领取的试剂批号是否与计划 单一致，检查试剂外观是否正常，如试剂出现混浊、沉淀或颜色变化应停止分装；领取物料： 根据生产计划领取要求型号的试剂瓶、配套瓶盖、标签，准备分装工具、设备；分装过程：
[0019] 4.1根据分装机型分装：
[0020] 4. 1. 1称瓶重：按计划数量准备瓶，称量每十个试剂瓶的重量，要求用于分装同一 批号试剂的瓶子重量相差不超过0. 5g，摆瓶；
[0021] 4. 1. 2分装；使用蠕动粟进行分装，过程中注意防止交叉污染，且装量不低于标示 装量；
[0022] 4. I. 3逐瓶进行检查盖子效果，如有漏液，不得进入下一工序；分装后贴标签：将 检查并经过核实的标签贴在试剂瓶上；检查；检查分装瓶数、试剂装量、漏液情况、贴签情 况、记录填写情况；清场；对生产现场进行清场，并填写记录。
[0023] 5、组装；领料；根据生产计划领取组装膜岛素双试剂所需的说明书、纸盒、封签、 合格证等物料，纸盒在组装前应先折好成型；半成品检查；将半成品逐瓶检查；组装；将装 好的试剂盒合上盖子，贴上封签、合格证，贴的位置要贴正，左右、上下等分距离；组装完成 后，QA进行成品取样，每个批号成品试剂取1盒，先进行包装质量的检查、再由QC进行内在 质量的检查；清场，并填写生产记录；做好半成品、成品的入、出库手续；如半成品不能及时 组装出库，应按半成品胆存要求胆存。
[0024] 通过H批产品的试生产，W上工艺能够满足产品生产需求。
[0025] 本发明的原理为；采用的技术原理是利用抗原抗体反应原理测定甘胆酸的含量。 标本中的甘胆酸与试剂中相应的甘胆酸抗体胶乳颗粒特异性反应，结合成抗原抗体复合 物，形成一定的浊度，浊度的高低在足量抗体存在时与标本中的甘胆酸含量成正比，测定该 浊度，与甘胆酸标准曲线比较，即能得出标本中甘胆酸含量。免疫比浊测定中抗原浓度与吸 光度之间的线性主要取决于抗体活性、反应体系和抗体抗原的比例H个方面，所W反应体 系的研究包括样本及试剂的上样量、稀释倍数，反应时间，测定波长等等反应条件的摸索。
[0026] 本发明适用于批量包装甘胆酸液体双试剂生产全过程，采用亲水性纳米胶乳颗 粒，试剂更稳定；采用高纯度特异性单克隆甘胆酸抗体，准确性高，可W区分胆酸和其它结 合胆汁酸，测定血清中真正的甘胆酸水平，适合临床孕妇产前健康普查，标本量很大，经济 和社会效益明显。
【具体实施方式】：
[0027] 本【具体实施方式】采用W下技术方案；它的制备方法为：
[0028] 1、生产设备准备：混合容器；容积大于试剂生产体积的高密度聚己帰桶4只；揽拌 器：揽拌涂四氣己帰的慢速电动揽拌器；称量设备：精度±0. OOOl克的天平1台；聚己帰容 器：预称原料用，有密封盖，2只；原料称量用勺、伊；PH计，定标缓冲液，具有温度补偿功能 的PH计和相应的定标液；仪器，日立7060全自动生化分析仪；过滤设备，孔径5 U m专用； 标签；用于原材料称量，标明原料名称、重量等；标牌；用于标示；1-混合容器；2-整批待检 产品容器。
[0029] 所述的标牌内容：产品代码、产品名称、批号、生产日期、过滤日期和操作者签名。
[0030] 2、生产；生产前准备；所有生产设备必须清洁；生产线清场；生产场地仅放置本批 量包装试剂生产用品；生产操作者穿戴防护用品：清洁工作服、戴口罩、防护眼镜、乳胶手 套或一次性手套和发罩；核对各种生产运行单；测定所用纯化水电导率，应小于2. Oy s/ cm ;原料包装的核对：名称正确、批号为指定使用者、原料物态正常；预称；所有原料都 必须预称，并由第二人核对；预称容器上有下列内容的标签：容器号、原料代码、批号、容 器和盖的皮重、原料净重、预称者签名/日期、核对者签名/日期；按规定的计算量称取 Trisl2. 114g，甘胆酸抗体乳胶颗粒息浊液2. 5ml并密封容器盖；核对称取的原料量；总重 量（原料+容器）=原料净重+皮重；将原料容器上的资料记录到原料记录单上。
[0031] 3、产品配制；混合容器和揽棒的准备；混合容器和揽棒用自来水冲洗5次；混合容 器和揽棒再用去离子水冲洗3次；干燥箱烧干密封装袋备用；将电动揽拌机装配到混合容 器上；在混合容器上标签，标明产品代码、批号、名称、生产量、日期和操作者；在混合容器 A、B中加入生产总量90 %的纯化水；在混合容器A中加入Trisl2. 114g，揽拌至完全溶解； 补纯化水至生产总量比，然后用Imol/L的化OH溶液调PH值至7. 2 (2(TC );用专用滤器将 上述混合溶液过滤入另一混合容器C中；在混合容器B中加入甘胆酸抗体乳胶颗粒息浊液 2. 5ml，揽拌至完全混合，然后补纯化水至生产总量250ml ;用专用滤器将上述混合溶液过 滤入另一混合容器D中；从混合容器C中取出1份80ml样品，从容器D中取出1份20ml样 品，作下列过程试剂：
[0032] a)空白吸光度（37°C，600nm) :< 1. 2A ;
[0033] b)从混合容器中抽样进行半成品抽样全检；
[0034] 如不符合规格，报告给生产车间技术人员；如符合规格，将测定数据记录在半成品 检验报告单中，并将大包装产品密封后送入2-8C冷库。
[00巧]4、分装；生产环境；分装过程在十万级净化区内进行，温度IOC -26 C，湿度 45% -65% ;分装前清场，领取经检测合格的半成品试剂，核对领取的试剂批号是否与计划 单一致，检查试剂外观是否正常，如试剂出现混浊、沉淀或颜色变化应停止分装；领取物料： 根据生产计划领取要求型号的试剂瓶、配套瓶盖、标签，准备分装工具、设备；分装过程：
[0036] 4. 1根据分装机型分装：
[0037] 4. 1. 1称瓶重：按计划数量准备瓶，称量每十个试剂瓶的重量，要求用于分装同一 批号试剂的瓶子重量相差不超过0. 5g，摆瓶；
[0038] 4. 1. 2分装；使用蠕动粟进行分装，过程中注意防止交叉污染，且装量不低于标示 装量；
[0039] 4. 1. 3逐瓶进行检查盖子效果，如有漏液，不得进入下一工序；分装后贴标签：将 检查并经过核实的标签贴在试剂瓶上；检查；检查分装瓶数、试剂装量、漏液情况、贴签情 况、记录填写情况；清场；对生产现场进行清场，并填写记录。
[0040] 5、组装；领料；根据生产计划领取组装膜岛素双试剂所需的说明书、纸盒、封签、 合格证等物料，纸盒在组装前应先折好成型；半成品检查；将半成品逐瓶检查；组装；将装 好的试剂盒合上盖子，贴上封签、合格证，贴的位置要贴正，左右、上下等分距离；组装完成 后，QA进行成品取样，每个批号成品试剂取1盒，先进行包装质量的检查、再由QC进行内在 质量的检查；清场，并填写生产记录；做好半成品、成品的入、出库手续；如半成品不能及时 组装出库，应按半成品胆存要求胆存。
[0041] 通过H批产品的试生产，W上工艺能够满足产品生产需求。
[0042] 本【具体实施方式】的原理为；采用的技术原理是利用抗原抗体反应原理测定甘胆酸 的含量。标本中的甘胆酸与试剂中相应的甘胆酸抗体胶乳颗粒特异性反应，结合成抗原抗 体复合物，形成一定的浊度，浊度的高低在足量抗体存在时与标本中的甘胆酸含量成正比， 测定该浊度，与甘胆酸标准曲线比较，即能得出标本中甘胆酸含量。免疫比浊测定中抗原浓 度与吸光度之间的线性主要取决于抗体活性、反应体系和抗体抗原的比例H个方面，所W 反应体系的研究包括样本及试剂的上样量、稀释倍数，反应时间，测定波长等等反应条件的 摸索。
[0043] 本【具体实施方式】适用于批量包装甘胆酸液体双试剂生产全过程，采用亲水性纳米 胶乳颗粒，试剂更稳定；采用高纯度特异性单克隆甘胆酸抗体，准确性高，可W区分胆酸和 其它结合胆汁酸，测定血清中真正的甘胆酸水平，适合临床孕妇产前健康普查，标本量很 大，经济和社会效益明显。
[0044] 实施例：
[0045] 1、样本要求：血清采血后应及时分离，不溶血血清。样品2-8C可稳定7天，-2(TC 可稳定一个月（冷冻样品只可复溶一次，不可反复冻溶）
[0046] 2、波长；胶乳增强免疫比浊法原理是光线通过免疫浊度试剂时光线偏折而散射， 从而使透射光减弱。该就决定了主波长和吸光度呈反比，所W波长的选择决定了灵敏度的 大小。
[0047] 本【具体实施方式】的甘胆酸测定试剂盒在600nm波长下检测数据与甘胆酸试剂盒 相关性最高，全自动生化分析仪可W方便检测，故选择600nm为本产品的测试波长。
[0048] 3、样品试剂比：
[0049] 试剂量的多少决定反应体积中有效抗体的浓度，而样本试剂比会影响试剂的线性 范围。
[0050]
【权利要求】
1.胶乳增强免疫比浊法甘胆酸测定试剂盒的制备方法，其特征在于它的制备方法为： (1) 、生产设备准备：混合容器：容积大于试剂生产体积的高密度聚乙烯桶4只；搅拌 器：搅拌涂四氟乙烯的慢速电动搅拌器；称量设备：精度±0. 0001克的天平1台；聚乙烯容 器：预称原料用，有密封盖，2只；原料称量用勺、铲；PH计，定标缓冲液，具有温度补偿功能 的PH计和相应的定标液；仪器，日立7060全自动生化分析仪；过滤设备，孔径5 μ m专用； 标签：用于原材料称量，标明原料名称、重量等；标牌：用于标示； (2) 、生产：生产前准备：所有生产设备必须清洁；生产线清场：生产场地仅放置本批 量包装试剂生产用品；生产操作者穿戴防护用品：清洁工作服、戴口罩、防护眼镜、乳胶手 套或一次性手套和发罩；核对各种生产运行单；测定所用纯化水电导率，应小于2. 0μ s/ cm ;原料包装的核对：名称正确、批号为指定使用者、原料物态正常；预称：所有原料都 必须预称，并由第二人核对；预称容器上有下列内容的标签：容器号、原料代码、批号、容 器和盖的皮重、原料净重、预称者签名/日期、核对者签名/日期；按规定的计算量称取 Trisl2. 114g，甘胆酸抗体乳胶颗粒悬浊液2. 5ml并密封容器盖；核对称取的原料量：总重 量=原料净重+皮重；将原料容器上的资料记录到原料记录单上； (3) 、产品配制：混合容器和搅棒的准备；混合容器和搅棒用自来水冲洗5次；混合容器 和搅棒再用去离子水冲洗3次；干燥箱烧干密封装袋备用；将电动搅拌机装配到混合容器 上；在混合容器上标签，标明产品代码、批号、名称、生产量、日期和操作者；在混合容器A、B 中加入生产总量90%的纯化水；在混合容器A中加入Trisl2. 114g，搅拌至完全溶解；补纯 化水至生产总量1L，然后用lmol/L的NaOH溶液调PH值至7. 2 ;用专用滤器将上述混合溶 液过滤入另一混合容器C中；在混合容器B中加入甘胆酸抗体乳胶颗粒悬浊液2. 5ml，搅拌 至完全混合，然后补纯化水至生产总量250ml ;用专用滤器将上述混合溶液过滤入另一混 合容器D中；从混合容器C中取出1份80ml样品，从容器D中取出1份20ml样品，作下列 过程试剂： (a) 空白吸光度：< 1.2A; (b) 从混合容器中抽样进行半成品抽样全检； 如不符合规格，报告给生产车间技术人员；如符合规格，将测定数据记录在半成品检验 报告单中，并将大包装产品密封后送入2-8°C冷库； (4) 、分装：生产环境：分装过程在十万级净化区内进行，温度10°C -26 °C，湿度 45% -65% ;分装前清场，领取经检测合格的半成品试剂，核对领取的试剂批号是否与计划 单一致，检查试剂外观是否正常，如试剂出现混浊、沉淀或颜色变化应停止分装；领取物料： 根据生产计划领取要求型号的试剂瓶、配套瓶盖、标签，准备分装工具、设备；分装过程： (4. 1)根据分装机型分装： (4. 1. 1)称瓶重：按计划数量准备瓶，称量每十个试剂瓶的重量，要求用于分装同一批 号试剂的瓶子重量相差不超过〇. 5g，摆瓶； (4. 1. 2)分装：使用蠕动泵进行分装，过程中注意防止交叉污染，且装量不低于标示装 量； (4. 1. 3)逐瓶进行检查盖子效果，如有漏液，不得进入下一工序；分装后贴标签：将检 查并经过核实的标签贴在试剂瓶上；检查：检查分装瓶数、试剂装量、漏液情况、贴签情况、 记录填写情况；清场：对生产现场进行清场，并填写记录； (5)、组装：领料：根据生产计划领取组装胰岛素双试剂所需的说明书、纸盒、封签、合 格证等物料，纸盒在组装前应先折好成型；半成品检查：将半成品逐瓶检查；组装；将装好 的试剂盒合上盖子，贴上封签、合格证，贴的位置要贴正，左右、上下等分距离；组装完成后， QA进行成品取样，每个批号成品试剂取1盒，先进行包装质量的检查、再由QC进行内在质量 的检查；清场，并填写生产记录；做好半成品、成品的入、出库手续；如半成品不能及时组装 出库，应按半成品贮存要求贮存。
2.根据权利要求1所述的胶乳增强免疫比浊法甘胆酸测定试剂盒的制备方法，其特征 在于它的原理为：采用的技术原理是利用抗原抗体反应原理测定甘胆酸的含量，标本中的 甘胆酸与试剂中相应的甘胆酸抗体胶乳颗粒特异性反应，结合成抗原抗体复合物，形成一 定的浊度，浊度的高低在足量抗体存在时与标本中的甘胆酸含量成正比，测定该浊度，与甘 胆酸标准曲线比较，即能得出标本中甘胆酸含量；免疫比浊测定中抗原浓度与吸光度之间 的线性主要取决于抗体活性、反应体系和抗体抗原的比例三个方面，所以反应体系的研究 包括样本及试剂的上样量、稀释倍数，反应时间，测定波长反应条件的摸索。
【文档编号】G01N33/531GK104237497SQ201310226684
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2013年6月6日 优先权日:2013年6月6日
【发明者】石丽萍 申请人:绍兴圣康生物科技有限公司