前列腺癌基因标记物在标记前列腺癌复发和转移中的用途及方法
【专利摘要】本发明公开了一种前列腺癌基因标记物在标记前列腺癌的复发和转移中的应用，其在待检测组织样本中的表达情况是标记前列腺癌复发和转移的指标。本发明进一步公开了检测样本中前列腺癌基因标记物表达情况的试剂在标记前列腺癌复发和转移中的应用，用以检测其在待检测组织样本中的表达情况，从而标记前列腺癌的复发和转移。本发明进一步公开了一种采用前列腺癌基因标记物来标记前列腺癌的复发和转移的方法，其通过检测待检组织样本的前列腺癌基因标记物表达情况，来标记前列腺癌的复发和转移。
【专利说明】前列腺癌基因标记物在标记前列腺癌复发和转移中的用途及方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及用于癌症诊断、研究和治疗的组合物和方法，包括但不限于癌症标记。更具体地，本发明涉及用作前列腺癌复发和转移标记的基因标记物。
发明背景
[0002]前列腺癌是欧美男性发病率最高的恶性肿瘤，在美国位于男性肿瘤死亡率的第二位，次于肺癌。据统计，美国2012年有24，1740个新诊断的前列腺癌患者，占全部新发肿瘤患者的29% ;有2，8170人死于前列腺癌，占全部死于肿瘤的9%。近年来我国前列腺癌发病率也不断升高。 [0003]临床用于前列腺癌诊断及治疗后复发监测的唯一标志物是血清学标志物前列腺特异性抗原(PSA)，但经PSA为基础的筛查发现的患者中有约1/3为进展缓慢、侵袭性低、无临床症状的隐匿性前列腺癌，导致部分病例过度诊治，增加了不必要的痛苦和损伤，且筛查对前列腺癌整体致死率并无实质性改善，提示许多隐匿性亚临床肿瘤的被诊断和治疗。这使得研究重点由以往患病风险基因易感性研究转为早期诊断侵袭性前列腺癌和发现致死性前列腺癌分子标签研究。
[0004]肿瘤标志物的发现和合理应用是肿瘤早期发现、早期诊断的前提。迄今为止，全球预测早期复发以及预后不佳的前列腺癌的标志物尚不成熟，对于新诊断前列腺癌患者，了解疾病进展风险和指引治疗过程的工具也很有限。因此，检出侵袭性前列腺癌标志物的研究己经成为前列腺癌这种具有高度的分子和临床异质性的肿瘤防治急需解决的的重大科学问题。几项研究试图鉴别出前列腺癌进展高风险标志物，但多数未达到预期目的。
[0005]目前，前列腺癌复发和转移高风险组织学标志物多为血清学标志物和组织学标志物。
[0006]1.血清学标志物
[0007]PSA衍生参数如PSA速率，倍增时间和密度可改善侵袭性前列腺癌检出敏感性。欧洲前列腺癌研究国际的一项关于主动随访的实验结果显示PSA动态变化和密度是最适宜的评估危险和个体化治疗的预测工具(Bui et al.,2013);在缺乏二次活检和Gleason分级升高等其他提示进展指标的情况下，单纯PSA不足以启动积极的治疗(Adamy etal.，2011)。
[0008]目前只有PSA密度进入2012年NCCN指南推荐用于预测低风险前列腺癌的参数，但大多数医生仍只检测总PSA。诊断骨转移主要靠骨成像技术，早期不敏感且为侵袭性、费用昂贵。血浆中来源于骨代谢的因子与前列腺癌骨转移高风险相关，反映了肿瘤和骨微环境之间相互作用的骨重塑过程的失衡，包括骨形成标志物和骨吸收标志物两类，可用于诊断骨转移但不能提前预知转移高风险。
[0009]2.组织学标志物
[0010]由于前列腺腺体是一系列致癌多基因事件发生的中心，因而组织学标志物对于进展高风险的预测价值不能忽略。几项试图鉴别出前列腺癌进展高风险标志物的研究多数未达到预期目的，尚无与进展高风险的组织学标志物应用于临床。
[0011]近来的证据提示前列腺隐匿癌腺泡中并无关键的(癌基因)激活事件发生或其受抑制故得以终生保持在亚临床状态。隐匿癌和临床癌之间的差异提示这些事件在前列腺癌启动/进展早期可导致细胞衰老的发生，后者作为机体抑制肿瘤的机制起作用，尤其是肿瘤抑制基因NKX3.1下调是早期持续的事件并与前列腺上皮细胞增殖增加和不良预后相关(Lin et al.，2009)。目前认为由NKX3.1丢失引起的TMPRSS2 - ERG转位代表着前列腺原位癌早期事件的发生，随后PTEN、p27 (Kip)、RB、E-cadherin和TP53的丢失和下调被认为是侵袭早期和后期转移的原因(Netto and Epstein, 2010) 0
[0012]利用免疫组化和转基因技术的系列研究证实了 PTEN上游分子SMAD_4(—个TGFP/成骨蛋白信号轴成员)的下调以及cyclin Dl和细胞黏附分子osteopontin的上调与前列腺癌生化复发和转移相关(Ding et al.，2011)。与外来物质以及致癌物的清除相关的谷胱甘肽-S-转移酶启动子区的甲基化被认为是前列腺癌进展的早期事件，在一些病例中与TMPRSS2转位和早期侵袭相关(Ahmed, 2010)。组蛋白甲基化酶EZH2，可使DNA甲基化和组蛋白修饰下调肿瘤抑制基因RAS GTP酶，从而激活DAB2IP蛋白上调RAS和NF- κ B表达促进肿瘤增殖和转移，与前列腺癌更为恶化的疾病状态包括转移至关重要(Min etal.，2010)。[0013]前列腺癌发病、进展和转移很多与AR突变相关，目前的治疗也是围绕阻断这条途径进行。但由于AR是一个下游转录靶基因，前列腺癌的诊断和去势治疗效果并不完全依赖于AR的表达，部分前列腺癌组织和细胞不表达AR ;另外由雄激素敏感性前列腺癌(HSPC)转变为去势抵抗性前列腺癌(CRPC)涉及AR途径和部分非AR途径激活等多种复杂过程，有多种基因、信号分子及表型改变参与，这些因素限制了 AR在前列腺癌进展预测中的价值(Saraon etal.，2011)o
[0014]前列腺特异性膜抗原(PSMA)是由前列腺上皮细胞分泌的一种II型完整的跨膜糖蛋白，被认为是一种前列腺上皮标志。有报道PSMA在高分级、分期前列腺癌以及激素难治性前列腺癌患者的水平明显升高，与不良的临床预后有关。但由于在前列腺良性上皮中过高的表达率，使得PSMA在前列腺癌进展预测中的价值大大降低。
[0015]然而，与其他肿瘤不同，前列腺癌往往多种病理组织形态并存甚至混杂着正常腺体这一独特性使得前列腺癌进展和复发预测的组织标志物研究困难重重，尽管投入巨大但鲜有进展。通过生物信息学的分析手段入手，从疾病进展模型出发，从基因整体水平研究前列腺癌的发病机制将有可能寻找出更合适的前列腺癌进展的分子标志物，这将为前列腺癌的诊断预防和治疗提供关键依据。
【发明内容】
[0016]本发明的目的之一在于提供一种前列腺癌特异性表达的基因，用以标记前列腺癌的发展情况，为制定前列腺癌的治疗决策提供依据。
[0017]本发明的目的之二在于提供一种前列腺原发癌特异性表达的基因，用以标记前列腺癌的复发，从而可以用来识别和判断前列腺癌的复发，为制定前列腺癌的治疗决策提供依据。[0018]本发明的目的之三在于提供一种前列腺转移癌特异性表达的基因，用以标记前列腺癌的转移，从而可以用来识别和判断前列腺癌的转移，为制定前列腺癌的治疗决策提供依据。
[0019]本发明的目的之四在于提供一种标记前列腺癌的复发和转移的方法，其通过一种前列腺癌特异性表达的基因来特异性标记前列腺癌的发展情况，为制定前列腺癌的治疗决策提供依据。[0020]本发明的目的之五在于提供一种标记前列腺癌的复发和转移的方法，其通过一种前列腺原发癌特异性表达的基因来特异性标记前列腺癌的复发，从而可以用来识别和判断前列腺癌的复发，为制定前列腺癌的治疗决策提供依据。
[0021]本发明的目的之六在于提供一种标记前列腺癌的复发和转移的方法，其通过一种前列腺转移癌特异性表达的基因来特异性标记前列腺癌的转移，从而可以用来识别和判断前列腺癌的转移，为制定前列腺癌的治疗决策提供依据。
[0022]本发明的目的之七在于提供一种检测样本中前列腺癌特异性表达情况的试剂在标记前列腺癌复发和转移中的应用，用以标记前列腺癌的发展情况，为制定前列腺癌的治疗决策提供依据。
[0023]本发明的目的之八在于提供一种检测样本中前列腺癌特异性表达情况的试剂在标记前列腺癌复发和转移中的应用，用以标记前列腺癌的复发，从而可以用来识别和判断前列腺癌的复发，为制定前列腺癌的治疗决策提供依据。
[0024]本发明的目的之九在于提供一种检测样本中前列腺癌特异性表达情况的试剂在标记前列腺癌复发和转移中的应用，用以标记前列腺癌的转移，从而可以用来识别和判断前列腺癌的转移，为制定前列腺癌的治疗决策提供依据。
[0025]为了实现上述目的，本发明公开了 MS4A8B基因在标记前列腺癌的复发和转移中的应用。
[0026]其中，所述MS4A8B基因在待检测组织样本中的表达情况是标记前列腺癌的指标。
[0027]其中，所述MS4A8B基因在待检测组织样本中的表达情况越高，前列腺癌复发和转移的概率越高。
[0028]其中，对所得MS4A8B基因表达情况进行评分，给予MS4A8B基因表达评分，根据所得MS4A8B基因表达评分，判断前列腺癌的复发和转移。
[0029]基于本发明公开的MS4A8B基因在标记前列腺癌的复发和转移中的应用，本发明进一步公开了一种MS4A8B基因标记前列腺癌的复发和转移的方法，其中所述MS4A8B基因在待检测组织样本中的表达情况是标记前列腺癌的指标。
[0030]优选的，所述MS4A8B基因标记前列腺癌的复发和转移的方法包含以下步骤:
[0031 ] 检测待检组织样本的MS4A8B基因表达情况；
[0032]所述MS4A8B基因在待检测组织样本中的表达情况越高，前列腺癌复发和转移的概率越高。
[0033]优选的，所述MS4A8B基因标记前列腺癌的复发和转移的方法包含以下步骤:
[0034]检测待检组织样本的MS4A8B基因表达情况；
[0035]对所得MS4A8B基因表达情况进行评分，给予MS4A8B基因表达评分；
[0036]根据所得MS4A8B基因表达评分，判断前列腺癌的复发和转移。[0037]其中，待检组织样本的MS4A8B基因表达可以通过，包括但不限于，使用DNA探针或荧光探针直接检测前列腺癌组织DNA基因组中的MS4A8B基因，设计MS4A8B的PCR引物使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MS4A8B的mRNA，使用免疫组化、免疫荧光、流式细胞等方法检测转录MS4A8B基因的蛋白并对蛋白进行染色标记。
[0038]其中，对所得MS4A8B基因表达情况，采用以下标准给予MS4A8B基因表达评分:
[0039]基于待检测组织样本的MS4A8B基因表达的阳性细胞的百分比:
[0040]阳性细胞数〈5%为O分，5%~25%为I分，26%~50%为2分，51%~75% 3分，76%~100%为4分； [0041]基于待检测组织样本的MS4A8B基因表达的阳性强度系数:
[0042]阴性㈠为0，弱阳性⑴为0.25，阳性(++)为0.5，强阳性(+++)为I ; [0043]阳性细胞的百分比的计分与阳性强度系数的计分相乘即为MS4A8B基因表达评分。
[0044]其中，MS4A8B基因表达评分可换算为MS4A8B基因表达阳性等级:计分相乘〈I分为阴性㈠，计分相乘≥I分为弱阳性⑴，计分相乘≥2分为阳性(++)，计分相乘≥3分为强阳性(+++)。
[0045]其中，当采用免疫组化、免疫荧光、流式细胞等方法检测转录MS4A8B基因的蛋白并对蛋白进行染色标记时，如采用免疫组化染色时，相应的，阳性细胞的百分比换算为着色细胞数的百分比，而阳性强度系数换算为阳性着色强度系数:无色为0，淡黄色为0.25，棕黄色为0.5，棕褐色为I。
[0046]其中，根据所得MS4A8B基因表达评分判断前列腺癌的复发的标准为:
[0047]MS4A8B基因表达评分越高，前列腺癌复发和转移的概率越高。
[0048]具体而言，MS4A8B基因表达评分每增加I分，前列腺癌复发的概率增加110.6%，MS4A8B基因表达评分每增加I分，发生远处转移的风险增加31.7%
[0049]优选的，根据所得MS4A8B基因表达评分判断前列腺癌的复发的标准为:
[0050]MS4A8B基因表达评分不大于I的为低度表达，其前列腺癌复发率低和转移率低；
[0051]MS4A8B基因表达评分大于I但不大于2的为中度表达,其前列腺癌复发率中和转移率中；
[0052]MS4A8B基因表达评分大于2的为高度表达，其前列腺癌复发率高和转移率中。
[0053]具体而言，MS4A8B基因表达评分不大于I分，一年无复发生存概率为97.22%，两年无复发生存概率为91.00%，三年无复发生存概率为90.99% ；MS4A8B基因表达评分大于I分但不大于2分，一年无复发生存概率为96.39%，两年无复发生存概率为87.68%，三年无复发生存概率为67.84% ；MS4A8B基因表达评分大于2分，一年无复发生存概率为94.73%，两年无复发生存概率为72.25%，三年无复发生存概率为53.552%。
[0054]具体而言，MS4A8B基因表达评分小于或等于I分，发生远处转移的概率为15.625% ；MS4A8B基因表达评分大于I分，发生远处转移的概率为23.30%。
[0055]基于本发明公开的MS4A8B基因在标记前列腺癌的复发和转移中的应用，本发明进一步公开了一种检测样本中MS4A8B基因表达情况的试剂在标记前列腺癌复发和转移中的应用，其中所述MS4A8B基因在待检测组织样本中的表达情况是标记前列腺癌的指标。
[0056]优选的，所述MS4A8B基因在待检测组织样本中的表达情况越高，前列腺癌复发和转移的概率越高。
[0057]优选的，所述判断前列腺癌复发和转移为对所得MS4A8B基因表达情况进行评分，给予MS4A8B基因表达评分，根据所得MS4A8B基因表达评分，判断前列腺癌的复发和转移。
[0058]其中，所述检测样本中MS4A8B基因表达情况的试剂，为基于检验出MS4A8B基因表达情况而设计的特异性针对MS4A8B基因，MS4A8B基因的mRNA，MS4A8B基因的转录蛋白的基因片段、基因嵌合物、RNA、特异性蛋白、多肽及含有上述物质的试剂，其包括但不限于为使用DNA探针或荧光探针直接检测前列腺癌组织DNA基因组中的MS4A8B基因而配置的试剂，为设计MS4A8B的PCR引物使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MS4A8B的mRNA而配置的试剂，为使用免疫组化、免疫荧光、流式细胞等方法检测转录MS4A8B基因的蛋白并对蛋白进行染色标记而配置的试剂。
[0059]实验结果表明，MS4A8B基因由于具有以下生物学特征，其对于前列腺癌具有特异性表达，可以作为基因标志物用于识别和诊断前列腺癌的复发和转移:
[0060]UMS4A8B基因在正常组织和癌组织中存在明显的表达差异，并且在不同癌组织中存在明显的表达差异，因此MS4A8B基因是一个前列腺癌特异性表达的基因；
[0061]2、MS4A8B基因在良性前列腺组织、癌旁组织、HPIN、前列腺癌原发灶和转移癌样本中存在明显的表达差异，前列腺癌原发灶和转移癌样本中MS4A8B基因的表达远远高于良性前列腺组织、癌旁组织、HPIN。因此MS4A8B基因是一个前列腺癌转移癌特异性表达基因；
[0062]3、MS4A8B基因在 正常前列腺组织细胞，前列腺原发癌组织细胞和前列腺癌转移灶组织细胞中存在明显的表达差异，前列腺癌转移癌样本中MS4A8B基因的表达也高于前列腺癌原发灶中MS4A8B基因的表达。因此MS4A8B基因是一个前列腺原发癌尤其是转移癌特异性表达基因；
[0063]4、MS4A8B基因通过作用于Gl-S细胞周期调控点促进细胞增殖，因此在前列腺癌进展中扮演重要角色。
[0064]实验结果进一步表明，MS4A8B基因对于前列腺癌具有特异性表达，特别对于前列腺癌的原发癌和转移癌特具有异性表达，其中:
[0065]UMS4A8B基因表达评分越高，发生生化复发和转移的风险越高，其中
[0066]MS4A8B基因表达评分不大于I的为低度表达，其前列腺癌复发率低和转移率低；
[0067]MS4A8B基因表达评分大于I但不大于2的为中度表达,其前列腺癌复发率中和转移率中；
[0068]MS4A8B基因表达评分大于2的为高度表达，其前列腺癌复发率高和转移率中；
[0069]2、MS4A8B基因高度表达患者表现出易于复发的特点，而且这一特点随着时间的延长越发明显；
[0070]3、MS4A8B基因表达评分每增加I分，发生生化复发的风险增加110.6% ；
[0071]4、MS4A8B基因表达评分每增加I分，发生远处转移的风险增加31.7%。
[0072]因此，MS4A8B基因可以作为基因标志物用于识别和诊断前列腺癌术后复发和转移，从而预测前列腺癌的复发和转移并制定治疗决策。
[0073]因此，MS4A8B基因可以作为基因标志物用于识别和诊断前列腺癌术后复发和转移，从而预测前列腺癌的复发和转移并制定治疗决策。
[0074]MS4A8B基因表达为低度表达或中度表达的早期前列腺癌患者，在行前列腺癌根治术时有15.625%的概率发生转移，而同期行前列腺根治的患者，MS4A8B基因高度表达者，其发生远处转移的概率为23.3%。如果根据MS4A8B基因表达的情况给患者行前列腺癌淋巴结区域辅助放疗，NNT (number need to treat) =13.29.也就是说，根据MS4A8B基因表达,每淋巴结清扫13个病人，有一个病人获益。
【专利附图】
【附图说明】
[0075]图1为MS4A8B基因的mRNA水平在前列腺癌和多种肿瘤和相应正常组织中的表达图谱。
[0076]图2A-2B为MS4A8B基因在前列腺细胞系中的差异性表达和4个前列腺癌细胞系中MS4A8B下调后细胞周期检测结果的不意图。
[0077]图3A-3F为LNCaP细胞系中下调MS4A8B基因后的增殖能力和细胞周期的变化的示意图。
[0078]图4为LNCaP细胞系中下调MS4A8B基因后的细胞周期相关蛋白的变化的不意图。
[0079]图5为PC3细胞系中下调MS4A8B基因后的转移能力变化的示意图。
[0080]图6为PC3细胞系中下调MS4A8B基因后的EMT标志物的变化的示意图。
[0081]图7A-7E为过表达M S4A8B基因对正常前列腺上皮RWPE-1细胞周期以及细胞增殖的影响的示意图。
[0082]图8A-8F为前列腺癌组织微阵列芯片样本中MS4A8B蛋白的免疫组化分析情况的示意图。
[0083]图9为MS4A8B基因在良性前列腺组织、癌旁组织、HPIN、前列腺癌原发灶和转移癌样本中的表达图谱。
[0084]图10A-10C为MS4A8B基因表达与Gleason评分、增殖指数、凋亡指数的相关分析示意图。
[0085]图11为MS4A8B基因表达与无复发生存时间(RFS)的相关分析示意图。
【具体实施方式】
[0086]鉴于前列腺癌与其他肿瘤不同，其往往多种病理组织形态并存甚至混杂着正常腺体，使得前列腺癌进展、复发和转移预测的组织标志物研究困难重重。通过生物信息学的分析手段，从前列腺癌疾病进展模型出发，从基因整体水平研究前列腺癌的发病机制，寻找出更合适的前列腺癌进展的分子标志物，为前列腺癌的复发和转移预测提供基因标志物和判断标准。
[0087]基因标志物的筛选:MS4A8B基因
[0088]基于此,采用课题组自主研发的生物信息学分析软件DataAnalysorOnel.0,对前列腺癌进展模型的海量高通量数据进行多种类、多水平、多角度、多系列的筛选，分别计算并多次比较前列腺癌组织和良性前列腺组织之间、配对的前列腺癌和癌旁组织等各个分组之间、前列腺癌原发灶和转移灶之间的差异性蛋白，筛选到一个跨膜蛋白家族成员MS4A8B基因，其在前列腺癌组织中特异性升高并与前列腺癌进展、复发和转移相关。
[0089]后续研究中,Kaplan-Meier生存曲线分析表明前列腺癌组织高表达该蛋白的患者较低表达该蛋白的患者，其无生化复发生存时间(RFS)明显缩短(p〈0.05);进一步研究发现该蛋白与患者Gleason评分、增殖指数呈正相关(Spearman分析)(p〈0.001)。
[0090]在体外细胞模型研究中，在高表达该蛋白的前列腺癌细胞系中进行特异性敲除该基因的表达，导致前列腺癌的增殖和转移能力下降；而且，在低表达该蛋白的正常前列腺上皮细胞系中上调该基因的表达，导致前列腺上皮细胞的增殖和转移能力增强。
[0091]MS4A8B基因简介
[0092]MS4A8B, 即人跨膜蛋白，全名 membrane-spanning4-domains, subfamilyA，member8B，官方名字 MS4A8，别名 MS4A4;4SPAN4;CD20L5。NCBI Gene ID:83661。MS4A8B是含有四个跨膜结构域的疏水性蛋白MS4A(Membrane-spanning4-domains, subfamily A)
家族成员之一。
[0093]为进一步研究MS4A8B基因在人不同组织中的差异性表达，我们收集了常用的人多种癌组织和相应的癌旁组织，通过PCR检测MS4A8B基因的mRNA在该人多种正常和肿瘤组织中的表达，获取MS4A8B基因在人多种正常和肿瘤组织中的表达谱，并进行相应表达谱分析。[0094]所有统计学分析用SPSS17.0统计软件进行处理。不同组间比较用独立t检验(常变量)，两组间均数的比较用t检验，分类变量的比较用X 2检验，多组间比较用单因素方差分析。数值用均数土SD表示。P〈0.05认为有显著性差异，在统计学上有意义。
[0095]MS4A8B基因对前列腺癌的特异性表达
[0096]我们收集了 13种常见肿瘤样本，包括前列腺癌样本，该13种常见肿瘤样本为经外科切除的冰冻组织样本，均于-70°C保存于复旦大学附属肿瘤医院组织库(除非小细胞肺癌外所有肿瘤样本)和大连医科大学附属第二医院(非小细胞肺癌样本)，医学伦理委员会伦理编号050432-4-1212B，所有患者均签署知情同意书。所有样本包括配对的癌旁组织，其中前列腺癌样本行冰冻切片染色经病理医生确定癌腺体超过80%，并进行激光显微切割(LCM)获取癌及癌旁正常组织样本。
[0097]采用RT-PCR检测该人13种正常和肿瘤组织中MS4A8B的mRNA水平，并采用管家基因β -actin校正各样本中MS4A8B的mRNA表达强度，得到表1所示的人13种组织的MS4A8B表达谱分析。
[0098]表1.人13种组织的MS4A8B基因表达谱分析
【权利要求】
1.MS4A8B基因在标记前列腺癌的复发和转移中的应用。
2.如权利要求1所述的MS4A8B基因在标记前列腺癌的复发和转移中的应用，其特征在于，所述MS4A8B基因在待检测组织样本中的表达情况是标记前列腺癌复发和转移的指标。
3.如权利要求2所述的MS4A8B基因在标记前列腺癌的复发和转移中的应用，其特征在于，所述MS4A8B基因在待检测组织样本中的表达情况越高，前列腺癌复发和转移的概率越闻。
4.如权利要求3所述的MS4A8B基因在标记前列腺癌的复发和转移中的应用，其特征在于，对所得MS4A8B基因表达情况进行评分，给予MS4A8B基因表达评分，根据所得MS4A8B基因表达评分，判断前列腺癌的复发和转移。
5.一种MS4A8B基因标记前列腺癌的复发和转移的方法，其特征在于，所述MS4A8B基因在待检测组织样本中的表达情况是标记前列腺癌的指标。
6.如权利要求5所述的MS4A8B基因标记前列腺癌的复发和转移的方法，其特征在于，所述方法包含以下步骤: 检测待检组织样本的MS4A8B基因表达情况； 所述MS4A8B基因在待检测组织样本中的表达情况越高，前列腺癌复发和转移的概率越闻。
7.如权利 要求6所述的MS4A8B基因标记前列腺癌的复发和转移的方法，其特征在于，所述方法包含以下步骤: 检测待检组织样本的MS4A8B基因表达情况； 对所得MS4A8B基因表达情况进行评分，给予MS4A8B基因表达评分； 根据所得MS4A8B基因表达评分，判断前列腺癌的复发和转移。
8.如权利要求7所述的MS4A8B基因标记前列腺癌的复发和转移的方法，其特征在于，对所得MS4A8B基因表达情况，采用以下标准给予MS4A8B基因表达评分: 基于待检测组织样本的MS4A8B基因表达的阳性细胞的百分比:阳性细胞数〈5%为O分，5%~25%为I分，26%~50%为2分，51%~75% 3分，76%~100%为4分； 基于待检测组织样本的MS4A8B基因表达的阳性强度系数:阴性㈠为0，弱阳性⑴为0.25，阳性(++)为0.5，强阳性(+++)为I ; 阳性细胞的百分比的计分与阳性强度系数的计分相乘即为MS4A8B基因表达评分。
9.如权利要求8所述的MS4A8B基因标记前列腺癌的复发和转移的方法，其特征在于，根据所得MS4A8B基因表达评分判断前列腺癌的复发和转移的标准为: MS4A8B基因表达评分越高，前列腺癌复发和转移的概率越高。
10.如权利要求8所述的MS4A8B基因标记前列腺癌的复发和转移的方法，其特征在于，根据所得MS4A8B基因表达评分判断前列腺癌的复发和转移的标准为: MS4A8B基因表达评分不大于I的为低度表达，其前列腺癌复发率低和转移率低； MS4A8B基因表达评分大于I但不大于2的为中度表达,其前列腺癌复发率中和转移率中； MS4A8B基因表达评分大于2的为高度表达，其前列腺癌复发率高和转移率中。
11.如权利要求5所述的MS4A8B基因标记前列腺癌的复发和转移的方法，其特征在于，所述待检测组织样本的MS4A8B基因表达可以通过，使用DNA探针或荧光探针直接检测前列腺癌组织DNA基因组中的MS4A8B基因，设计MS4A8B的PCR引物使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MS4A8B的mRNA，使用免疫组化、免疫荧光、流式细胞术等方法检测转录MS4A8B基因的蛋白并对蛋白进行染色标记。
12.—种检测样本中MS4A8B基因表达情况的试剂在标记前列腺癌复发和转移中的应用，其特征在于，所述MS4A8B基因在待检测组织样本中的表达情况是标记前列腺癌的指标。
13.如权利要求12所述的检测样本中MS4A8B基因表达情况的试剂在标记前列腺癌复发和转移中的应用，其特征在于，所述MS4A8B基因在待检测组织样本中的表达情况越高，前列腺癌复发和转移的概率越高。
14.如权利要求13所述的检测样本中MS4A8B基因表达情况的试剂在标记前列腺癌复发和转移中的应用，其特征在于，对所得MS4A8B基因表达情况进行评分，给予MS4A8B基因表达评分，根据 所得MS4A8B基因表达评分，判断前列腺癌的复发和转移。
【文档编号】G01N33/68GK103602720SQ201310253540
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年6月24日 优先权日:2013年6月24日
【发明者】叶林, 叶定伟 申请人:复旦大学附属肿瘤医院