气相色谱法检测稻谷中毒死蜱农药残留量的制作方法
【专利摘要】本发明建立一种检测稻谷中毒死蜱农药残留量的气相色谱方法，其特征在于以乙酸乙酯为提取剂，提取液经氮吹仪浓缩，用丙酮定容后，直接在气相色谱仪上痕量分析。本发明的优点在于：一是毒死蜱含量与峰面积具有良好的线性关系(0.05-5.0mg/kg范围内)，准确度、精密度高；二是前处理简便快速，检测成本低；三是乙酸乙酯毒性小(基本没有毒性)，在检测过程中，实验人员避免了有毒气体的吸入。
【专利说明】气相色谱法检测稻谷中毒死蜱农药残留量
【技术领域】
[0001]本发明建立一种检测稻谷中毒死蜱农药残留量的气相色谱方法，属于农药残留检测【技术领域】。
【背景技术】
[0002]中国是世界上稻谷生产与消费大国，水稻的种植面积约占全球23%，产量占30%以上，居世界第一。由于水稻生育期长，病虫害频发，因此农用化学品被大面积、高浓度、高频次地使用，这在减轻病虫害损失上，起到了至关重要的作用，但是由此带来了稻谷的食用安全问题。
[0003]毒死蜱是1965年由美国陶氏益农化学公司开发的硫代磷酸酯类杀虫剂，40多年来已成为一种久盛不衰的最大吨位的有机磷农药。现在，已被认为是防治水稻害虫中取代甲胺磷、对硫磷、甲基对硫磷、磷胺、水胺硫磷等高毒有机磷农药的最好选择，成为防治稻纵卷叶螟、二化螟及稻飞虱的当家药剂之一，在水稻生产上大量使用。毒死蜱内吸性好、渗透性强，在水稻中后期施药后，各易在谷粒内残留。
[0004]稻谷不仅给我们提供大米，由稻壳产生的米糠，也是畜牧生产的饲料，也会进入人们的食物链中。在《食品中农药最大残留限量》(GB2763-2012)中，对毒死蜱的规定是，稻谷最大残留限量0.5mg/kg。而目前，对稻谷中毒死蜱残留量的检测，大多采用的是国家标准GB/T5009.145-2003方法(植物性食品中有机磷和氨基甲酸酯类农药多种残留量的测定)，该方法提取净化过程比较复杂、耗时较长，效率较低。
[0005]本发明旨在建立一种廉价、快速、准确、灵敏的方法来检测稻谷中毒死蜱的残留量。
【发明内容】
[0006]本发明有如下二方面内容:
[0007]1、稻谷样品前处理
[0008]2、气相色谱仪检测
[0009]本发明所采用的技术，包括以下内容:
[0010](I)稻谷样品的制备
[0011]将稻谷样品晒干，用植物粉碎机粉碎，过筛(Imm)，制成待检样。
[0012](2)仪器与试剂
[0013]①仪器Agilent6890气相色谱仪、配有火焰光度检测器(FPD)，DB-608(30mX0.32mmX0.5ym)、HP_5(30mX0.32mmX0.25 μ m)毛细管色谱柱，电子天平，水浴恒温振荡机，美国N-EVAP24水浴氮吹仪。
[0014]②试剂乙酸乙酯:分析纯；丙酮:色谱纯；无水硫酸钠:分析纯，650°C马福炉中烘6h。
[0015]③农药标准样品毒死蜱标准溶液购自农业部环境保护科研监测所，质量浓度为100 μ g/mlο
[0016](3)样品前处理[0017]①提取用电子天平准确称取25.0g样品于250ml具塞三角烧瓶中，加IOml蒸馏水湿润样品，加75.0ml乙酸乙酯、加15g无水硫酸钠(1.0g无水硫酸钠能吸收1.0g-1.2g水分)，在水浴(25±1) °C振荡器上以200r/min振荡30min，接着用滤纸过滤，收集滤液静置IOmin ；
[0018]②浓缩吸取10.0ml上清液于IOml刻度试管中，将试管放入水浴锅中加热，水浴温度控制在65°C _70°C，试管内缓缓通入氮气或空气流，待样品溶剂挥发、浓缩至近干(余留4-5滴)时,用丙酮定容,定容至5.0ml,再加1.0g无水硫酸钠脱水,充分摇匀,静置5min,取上清液，供气相色谱仪检测。
[0019](4)气相色谱仪检测
[0020]①色谱参数设定色谱柱:DB_608毛细管色谱柱作为分离柱；载气:高纯氮气(纯度99.999%);检测器的燃气与助燃气1121501111/1^11、空气110ml/min ;进样模式:恒流，流量为1.8ml/min ;进样口温度:235°C ;检测器温度:270°C ;柱升温程序:初始温度90°C，保持lmin,以 35°C /min 上升至 210°C，以 20°C /min 上升至 250°C，以 25°C /min 上升至 270°C，保持6min ;进样方式:不分流；进样量I μ I。
[0021]②定性和定量方法以毒死蜱标准溶液的保留时间来定性，对于阳性样品采用ΗΡ-5毛细管色谱柱确认；以样品峰面积与标准溶液峰面积比较来定量。
[0022](5)方法验证
[0023]①线性和范围分别配制浓度为0.05,0.1,0.2,0.5,1.0,2.0,5.0mg/kg的毒死蜱系列标准溶液，按上述色谱条件下依次进样，以色谱峰面积I对相应的标准溶液浓度X (mg/kg)绘制标准曲线，相关系数达到0.999以上。
[0024]②准确度与精密度以添加回收率来衡量方法的准确度，以变异系数(CV)来表示方法的精密度。在本底不含毒死蜱的稻谷样品中添加毒死蜱标准溶液，添加浓度为0.05、0.1U.0,5.0mg/kg,同时设置6个重复，再按前述的样品处理方法及色谱条件进行添加回收率试验,在4个添加水平上，毒死蜱的平均回收率为80.6% -100.4%，变异系数在8.7%以下。
[0025]③检出限体现了方法的灵敏度。用毒死蜱标准溶液逐级稀释添加，按上述方法检测，以3倍噪声强度的信号计算，测得最低检出浓度为0.01mg/kgo
[0026]本发明利用相似相溶原理，以乙酸乙酯为提取剂，提取液经氮吹仪浓缩，用丙酮定容后，直接在气相色谱仪上痕量分析。该方法的优点在于:一是毒死蜱含量与峰面积具有良好的线性关系(0.05-5.0mg/kg范围内)，准确度、精密度高；二是前处理简便快速，检测成本低；三是乙酸乙酯毒性小(基本没有毒性)，在检测过程中，实验人员避免了有毒气体的吸入。
【具体实施方式】
[0027]方式1:籼谷中毒死蜱残留量的检测
[0028](I)样品前处理
[0029]①提取用电子天平准确称取25.0g样品于250ml具塞三角烧瓶中，加IOml蒸馏水湿润样品，加75.0ml乙酸乙酯、加15g无水硫酸钠(1.0g无水硫酸钠能吸收1.0g-1.2g水分)，在水浴(25 ± I) °C振荡器上以200r/min振荡30min，接着用滤纸过滤，收集滤液静置IOmin ；
[0030]②浓缩吸取10.0ml乙酸乙酯上清液，放入IOml刻度试管中，将试管放入水浴锅中加热，水浴温度控制在65°C，试管内缓缓通入氮气或空气流，待样品溶剂挥发、浓缩至近干(余留4-5滴)时，用丙酮定容，定容至5.0ml，再加1.0g无水硫酸钠脱水，充分摇匀，静置5min,取上清液，供气相色谱仪检测。
[0031](2)气相色谱仪检测
[0032]①色谱参数设定色谱柱:DB_608弹性石英毛细管柱作为分离柱；载气:高纯氮气(纯度99.999% );检测器的燃气与助燃气H2150ml/min、空气110ml/min ;进样模式:恒流，流量为1.8ml/min ;进样口温度:235°C;检测器温度:270°C;柱升温程序:初始温度90°C，保持 lmin，以 35°C /min 上升至 210°C，以 20°C /min 上升至 250°C，以 25°C /min 上升至 270°C，保持6min ;进样方式:不分流；进样量I μ I。
[0033]②定性和定量方法以毒死蜱标准溶液的保留时间来定性，对于阳性样品采用ΗΡ-5毛细管色谱柱确认；以样品峰面积与标准溶液峰面积比较来定量。
[0034](3)方法的准确度和精密度
[0035]在本底不含毒死蜱的籼谷样品中进行毒死蜱添加回收率实验，添加浓度为0.05mg/kg、0.lmg/kg、l.0mg/kg、5.0mg/kg4个水平,各处理重复6次。结果:毒死蝶的平均回收率为80.6 % -99.4 % (见表1)，变异系数为3.4 % -8.7 %，完全符合农产品中农药残留检测的要求。
[0036]表1籼谷中毒死蜱不同浓度的添加回收率
【权利要求】
1.一种检测稻谷中毒死蜱农药残留量的气相色谱方法，其特征在于包括下述步骤: ①提取用电子天平准确称取25.0g样品于250ml具塞三角烧瓶中，加IOml蒸馏水湿润样品，加75.0ml乙酸乙酯、加15g无水硫酸钠(1.0g无水硫酸钠能吸收1.0g-1.2g水分)，在水浴(25±1)°C振荡器上以200r/min振荡30min，接着用滤纸过滤，收集滤液静置IOmin ； ②浓缩吸取10.0ml上清液于IOml刻度试管中，将试管放入水浴锅中加热，水浴温度控制在65°C -70°C，试管内缓缓通入氮气或空气流，待样品溶剂挥发、浓缩至近干(余留4-5滴)时，用丙酮定容，定容至5.0ml,再加1.0g无水硫酸钠脱水,充分摇匀,静置5min,取上清液，供气相色谱仪检测； ③色谱参数设定色谱柱:DB-608毛细管色谱柱作为分离柱；载气:高纯氮气(纯度99.999% );检测器的燃气与助燃气1121501111/1^11、空气110ml/min ;进样模式:恒流，流量为1.8ml/min ;进样口温度:235°C ;检测器温度:270°C ;柱升温程序:初始温度90°C，保持lmin，以 35°C /min 上升至 210°C，以 20°C /min 上升至 250°C，以 25°C /min 上升至 270°C，保持6min ;进样方式:不分流；进样量I μ I ; ④定性和定量方法以毒死蜱标准溶液的保留时间来定性，对于阳性样品采用ΗΡ-5毛细管色谱柱确认；以样品峰面积与标准溶液峰面积比较来定量。
2.根据权利要求1所述的一种检测稻谷中毒死蜱农药残留量的气相色谱方法，其特征在于稻谷中的毒死蜱用乙酸乙酯提取，提取液经氮吹仪浓缩，用丙酮定容后，直接在气相色谱仪上痕量分析。
3.根据权利要求1所述的一种检测稻谷中毒死蜱农药残留量的气相色谱方法，其特征在于检测设备为Agilent6890气相色谱仪，配有火焰光度检测器(FPD)。
4.根据权利要求1所述的一种检测稻谷中毒死蜱农药残留量的气相色谱方法，其特征在于用双柱确认定性，用外标法定量。
【文档编号】G01N30/06GK103472172SQ201310420066
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月1日 优先权日:2013年9月1日
【发明者】邬金飞 申请人:邬金飞