一种检测啤酒样品中l-酪氨酸含量的方法
【专利摘要】本发明公开了一种检测啤酒样品中L-酪氨酸含量的方法。采用三电极体系,在室温下，分别以4,5-二氯邻苯二胺镍配合物-氧化石墨烯修饰玻碳电极为工作电极,饱和甘汞电极为参比电极,铂金电极为辅助电极，在含有不同浓度的L-酪氨酸的PBS缓冲溶液中(pH=7.0)进行循环伏安扫描，记录不同浓度L-酪氨酸氧化峰电流值，结果表明L-酪氨酸浓度在1.0×10-6～1.0×10-3mol/L范围内，其浓度与氧化峰电流值具有良好的线性关系，绘制工作曲线，回归方程为Ip（A）=0.319C（mmol/L）+0.179，相关系数为0.995（n=5），检出限为2.3×10-7mol/L（S/N=3)；据此利用循环伏安方法，可以测定L-酪氨酸含量。本发明检测灵敏、快速。
【专利说明】—种检测啤酒样品中L-酪氨酸含量的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及ー种利用化学修饰电极快速检测L-酪氨酸含量的方法，特别是检测啤酒样品中L-酪氨酸含量的方法。
【背景技术】
[0002]L-酪氨酸属于非必需氨基酸，是人体体内合成蛋白质所需的重要氨基酸之一，在自然界酪氨酸以L-酪氨酸存在。L-酪氨酸对于促进人体的新陈代谢有非常重要的作用，也能产生出神经传导素。据研究表明，L-酪氨酸具有防止人体衰老，预防痴呆症的作用，精密准确的測定人体组织及体液中酪氨酸的含量在临床医学、营养学上都具有重大意义。据文献报道目前对酪氨酸的測定方法主要有酶催化分光光度法、色谱法、化学发光法、荧光分析法、电化学分析法等方法，其中电化学分析法具有成本相对较低、分析过程较简单、准确度高、快速等优点。电化学分析方法的灵敏度、精密度和准确度与新型的修饰电极的开发研究密切相关，席夫碱过渡金属配合物是ー种广泛应用的电子媒介体，具有促进电子传递的作用，电子媒介体的应用提高了电化学法检测的灵敏度、精密度和准确度，促进了电分析化学的迅速发展。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种检测啤酒样品中L-酪氨酸含量的方法。
[0004]检测L-酪氨酸含量的研究方法:采用三电极体系，在室温下，分别以玻碳电极为工作电极，饱和甘汞电极为參比电极，钼金电极为辅助电极，所有測量均在含有不同浓度的L-酪氨酸的PBS缓冲溶液中(pH =7.0)进行，采用循环伏安法扫描，扫描速度0.lV/s，扫描范围为+0.2V?+1.4V。
[0005]干扰实验结果表明，在測定相对误差不超过±5%吋，10倍精氨酸、DL-丙氨酸、L-谷氨酸、L-丝氨酸、甘氨酸；100倍硝酸镁、硝酸铝、硝酸铜、硝酸钡；50倍硝酸铁不干扰L-酪氨酸浓度的测试。
[0006]具体步骤为:
1.取10 mg纳米氧化石墨烯与0.05mmol (37.78mg) 4，5-ニ氯邻苯ニ胺缩3，5-ニ溴水杨醛席夫碱镍配合物溶于ニ甲基甲酰胺(DMF)溶液中，超声分散2小时得到均一的席夫碱镍配合物-纳米氧化石墨烯悬浮液。
[0007]2.将玻碳电极依次在放有Al2O3粉末的麂皮上抛光，二次水淋洗后，依次在无水こ醇、二次水中分别超声清洗3分钟，红外烘干；在玻碳电极上滴加3，5- ニ溴水杨醛席夫碱镍配合物-纳米氧化石墨烯悬浮液，红外灯供干，获得4，5- ニ氯邻苯ニ胺镍配合物-氧化石墨烯修饰玻碳电极，置于4°C冰箱中保存待用。
[0008]3.采用三电极体系，在室温下，分别以步骤(2)所得4，5_ ニ氯邻苯ニ胺镍配合物-氧化石墨烯修饰玻碳电极为工作电极，饱和甘汞电极为參比电极，钼金电极为辅助电极，在含有不同浓度的L-酪氨酸的PBS缓冲溶液中(pH =7.0)进行循环伏安扫描，记录不同浓度L-酪氨酸氧化峰电流值，结果表明L-酪氨酸浓度在1.0X10_6?1.0X10_3mol/L范围内，其浓度与氧化峰电流值具有良好的线性关系，绘制工作曲线，线性回归方程为Jp=0.319C+0.179，Jp的单位为A即安培，C的单位为mmol/L，相关系数为0.995 (n=5)，检出限为2.3X 10_7mol/L (S/N=3)，其中n为样品平行测定次数，S为相对标准偏差，N为线性方程的斜率。
[0009]4.分别准确量取啤酒5.0OmL，用pH=7.0 PBS缓冲溶液定容至50mL，用步骤(2)所得4，5- ニ氯邻苯ニ胺镍配合物-氧化石墨烯修饰玻碳电极测定50mL溶液的氧化峰电流值，代入线性回归方程/P=0.319C+ 0.179，Jp的单位为A即安培，C的单位为mmol/L，计算L-酪氨酸的浓度和啤酒样品中L-酪氨酸的含量。
[0010]本发明以4，5- ニ氯邻苯ニ胺席夫碱镍配合物-纳米氧化石墨烯为电极修饰剂，制备修饰玻碳电极，研究了 L-酪氨酸在修饰电极上的电化学特性和測定方法，并应用于检测啤酒样品中的L-酪氨酸的含量，检测灵敏、快速。
【专利附图】
【附图说明】
[0011]图1为本发明的实施例的工作曲线图。
【具体实施方式】
[0012]实施例:
1.取10 mg纳米氧化石墨烯与0.05mmol (37.78mg)4, 5-ニ氯邻苯ニ胺缩3，5-ニ溴水杨醛席夫碱镍配合物溶于ニ甲基甲酰胺(DMF)溶液中，超声分散2小时得到均一的3，5-ニ溴水杨醛席夫碱镍配合物-纳米氧化石墨烯悬浮液。
[0013]2.将玻碳电极依次在放有Al2O3粉末的麂皮上抛光，二次水淋洗后，依次在无水こ醇、二次水中分别超声清洗3分钟，红外烘干；在玻碳电极上滴加步骤(I)所得的3，5-ニ溴水杨醛席夫碱镍配合物-纳米氧化石墨烯悬浮液，红外灯供干，获得4，5- ニ氯邻苯ニ胺镍配合物-氧化石墨烯修饰玻碳电扱，置于4°C冰箱中保存待用。
[0014]3.采用三电极体系，在室温下，分别以步骤(2)所得的4，5-ニ氯邻苯ニ胺镍配合物-氧化石墨烯修饰玻碳电极为工作电极，饱和甘汞电极为參比电极，钼金电极为辅助电极，在含有不同浓度的L-酪氨酸的PBS缓冲溶液中(pH =7.0)进行循环伏安扫描，记录不同浓度L-酪氨酸氧化峰电流值，结果表明L-酪氨酸浓度在1.0X 10_6?1.0X 10_3mol/L范围内，其浓度与氧化峰电流值具有良好的线性关系，绘制工作曲线(见图1)，回归方程为Ip=0.319C+ 0.179，Jp的单位为A即安培，C的单位为mmol/L，相关系数为0.995 (n=5)，检出限为2.3X10_7mol/L (S/N=3)，n为样品平行測定次数，S为相对标准偏差，N为线性方程的斜率。
[0015]4.选用三种啤酒进行样品分析。分别准确量取啤酒5.00mL，用pH=7.0 PBS缓冲溶液定容至50mL，用步骤(2)所得的4，5- ニ氯邻苯ニ胺镍配合物-氧化石墨烯修饰玻碳电极测定50mL溶液的氧化峰电流值，代入线性回归方程/p=0.319C+ 0.179，Jp的单位为A即安培，C的单位为mmol/L，计算L-酪氨酸的浓度和啤酒样品中L-酪氨酸的含量。向50mL样品溶液中加入标准L-酪氨酸溶液，进行加标回收实验，结果见表I。相对标准偏差RSD在1.26%-4.02%，加标回收率在96.00%?102.50%之间，表明本方法的精密度和准确度较好。
[0016]表1啤酒中L-酪氨酸含量的测试结果
【权利要求】
1.一种检测啤酒样品中L-酪氨酸含量的方法，其特征在于具体步骤为: (1)取10mg纳米氧化石墨烯与0.05mmol即37.78mg4, 5- ニ氯邻苯ニ胺缩3, 5- ニ溴水杨醛席夫碱镍配合物溶于ニ甲基甲酰胺溶液中，超声分散2小时得到均一的席夫碱镍配合物-纳米氧化石墨烯悬浮液； (2)将玻碳电极依次在放有Al2O3粉末的麂皮上抛光，二次水淋洗后，依次在无水こ醇、二次水中分别超声清洗3分钟，红外烘干；再在玻碳电极上滴加3，5-ニ溴水杨醛席夫碱镍配合物-纳米氧化石墨烯悬浮液，红外灯供干，获得4，5- ニ氯邻苯ニ胺镍配合物-氧化石墨烯修饰玻碳电极，置于4°C冰箱中保存待用； (3)采用三电极体系，在室温下，分别以步骤(2)所得4，5-ニ氯邻苯ニ胺镍配合物-氧化石墨烯修饰玻碳电极为工作电极，饱和甘汞电极为參比电极，钼金电极为辅助电极，在含有不同浓度的pH =7.0的L-酪氨酸的PBS缓冲溶液中进行循环伏安扫描，记录不同浓度L-酪氨酸氧化峰电流值，结果表明L-酪氨酸浓度在1.0X10_6?1.0X10_3mol/L范围内，其浓度与氧化峰电流值具有良好的线性关系，绘制工作曲线，线性回归方程为Jp=0.319C+0.179，Jp的单位为A即安培，C的单位为mmol/L，相关系数为0.995，n=5，检出限为2.3X 10_7mol/L，S/N=3，其中n为样品平行測定次数，S为相对标准偏差，N为线性方程的斜率； (4)分别准确量取啤酒5.00mL，_pH=7.0PBS缓冲溶液定容至50mL，用步骤(2)所得.4，5-ニ氯邻苯ニ胺镍配合物-氧化石墨烯修饰玻碳电极测定50mL溶液的氧化峰电流值,代入线性回归方程/P=0.319C+ 0.179，Jp的单位为A即安培，C的单位为mmol/L，计算L-酪氨酸的浓度和啤酒样品中L-酪氨酸的含量。
【文档编号】G01N27/48GK103575795SQ201310533339
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2013年11月3日 优先权日:2013年11月3日
【发明者】刘峥, 赖丽燕, 李巍 申请人:桂林理工大学