一种缺血修饰白蛋白检测试剂及检测方法
【专利摘要】本发明涉及缺血修饰白蛋白检测【技术领域】，特别涉及一种缺血修饰白蛋白检测试剂，试剂R1中含有缓冲液，氯化钴，十二烷基二甲基甜菜碱，防腐剂；试剂R2中含有缓冲液，噻二唑偶氮二甲氨基苯酚，十二烷基二甲基甜菜碱，防腐剂。采用新显色剂噻二唑偶氮二甲氨基苯酚，有效避免了Pd、Ni、Zn和Cu等金属离子的干扰，更加稳定、低毒、易于保存，大大增强了试剂的稳定性；采用新型两性表面活性剂十二烷基二甲基甜菜碱，不仅显著改善测定的性能，而且对维护体系的稳定，防止出现脂浊，效果明显，并且显著改善了试剂的稳定性和抗干扰能力。
【专利说明】一种缺血修饰白蛋白检测试剂及检测方法
[0001]【技术领域】
本发明涉及缺血修饰白蛋白检测【技术领域】，特别涉及一种缺血修饰白蛋白检测试剂，还涉及使用此检测试剂的检测方法。
[0002]【背景技术】
缺血修饰白蛋白(IMA)是由于血清白蛋白的氨基酸序列在缺血时受到自由基等破坏，从而致使与过渡金属的结合能力改变的白蛋白。缺血修饰白蛋白主要用于急性心肌缺血的辅助诊断、对于排除急性心肌梗塞、不稳定心绞痛等急性冠状动脉综合症(ACS)具有重要意义，是一种理想的对心肌缺血敏感的新型标记物。与传统的心肌损伤标志物相比,缺血修饰白蛋白(IMA)在缺血发作的短时间内血液中浓度就会升高，但此时心肌细胞的不可逆性损伤还未发生，因此IMA更具早期诊断价值，能够辅助临床医生尽早明确心肌缺血的诊断，从而进行早期干预和治疗。
[0003]目前，IMA的测定方法多数采用ACB比色分析法。采用白蛋白钴结合试验的原理，依据IMA较正常白蛋白结合金属钴离子能力降低，在反应系统中加入一定量的钴离子，并通过测定游离钴离子的浓度，推算出IMA的含量。最早美国Bar-Or等创立了终点法白蛋白钴结合试验，因受实验反应系统背景干扰的原因，动力学曲线不佳，线性范围狭窄，IMA阴阳性数值重叠，影响了实验的重现性和特异性。
[0004]
【发明内容】
为了解决以上现有技术中缺血修饰白蛋白检测方面存在的重现性和特异性不好、受干扰严重的问题，本发明提供了一种灵敏度高，抗干扰性能好，稳定的缺血修饰白蛋白检测试剂。
[0005]本发明还提供了所述使用上述缺血修饰白蛋白检测试剂对缺血修饰白蛋白进行检测的检测方法。
[0006]本发明是通过以下步骤得到的:
一种缺血修饰白蛋白检测试剂，包括试剂Rl和试剂R2，所述试剂Rl和试剂R2的组成如下:
试剂Rl中含有
缓冲液..........................................................................0.1mo
1/L，
氯化钴...........................................................................24mmo
1/L,
十二烷基二甲基甜菜碱................................................3g/
L,
防腐剂............................................................................0.5
g/L ；
2)试剂R2的组分为:
缓冲液.............................................................................0.1mo1/L
噻二唑偶氮二甲氨基苯酹............................24mmol/L
十二烷基二甲基甜菜碱...................................................3g/
L
_齐11................................................................................0.5
g/L。
[0007]所述的缺血修饰白蛋白检测试剂，试剂Rl中缓冲液为25°C，pH为7.6的哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液。
[0008]所述的缺血修饰白蛋白检测试剂，试剂R2中缓冲液为25°C，pH为5.0的MES缓冲液。
[0009]所述的缺血修饰白蛋白检测试剂，所述防腐剂为NaN3。
[0010]所述的缺血修饰白蛋白检测试剂来检测缺血修饰白蛋白的检测方法，使用全自动生化分析仪利用双试剂终点法进行测定，检测主波长为548nm。
[0011]所述的检测方法，Rl试剂和R2试剂的比例为2:1。
[0012]本发明的有益效果:
O双试剂比色法测定IMA，采用新显色剂噻二唑偶氮二甲氨基苯酚(TDAMAP)，有效避免了 Pd、N1、Zn和Cu等金属离子的干扰，而且TDAMAP比二硫苏糖醇(DTT)更加稳定、低毒、易于保存，大大增强了试剂的稳定性；
2)采用新型两性表面活性剂十二烷基二甲基甜菜碱，不仅显著改善测定的性能，而且对维护体系的稳定，防止出现脂浊，效果明显，相比之前所用的TRITON X-100 (曲拉通X-100)、APEO (烷基酚聚氧乙烯醚)等有更好的效果，并且显著改善了试剂的稳定性和抗干扰能力；
3)试剂的准确度和稳定性良好，价格便宜，使用方便，完全可以满足临床需要。
[0013]【专利附图】
【附图说明】
图1为两种试剂的相关性曲线图，
图2为不同表面活性剂对试剂稳定性影响曲线图，
图3为不同显色剂对试剂稳定性影响曲线图。
【具体实施方式】
[0014]下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明:
实施例1
缺血修饰白蛋白的检测试剂，包试剂Rl和试剂R2:
I)其Rl的组成为:
PIPES (哌嗪-1，4- 二乙磺酸)缓冲液(ρΗ=7.6，25°C )..........................0.1mol
/L
CoCl2 (氯化钴).......................................................................................24mmo1
/L
十二烷基二甲基甜菜碱...........................................................................3
g/L_齐11 NaN3............................................................................................0.5
g/L
2)试剂R2的组分为:
MES 缓冲液(pH=5.0,25°C ).................................................................0.1mol
/L
噻二唑偶氮二甲氨基苯酚(TDAMAP).................................................24mmo
1/L
十二烷基二甲基甜菜碱...........................................................................3
g/L
_齐11 NaN3.............................................................................................0.5
g/L。
[0015]3)本实施例试剂的使用方法:
本实施例描述的缺血修饰白蛋白检测试剂，在使用时采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪，如东芝40全自动分析仪等，利用双试剂终点法进行测定。将Rl和R2按照2:1的比例放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如表1:
表1实施例1试剂检测方法
【权利要求】
1.一种缺血修饰白蛋白检测试剂，其特征在于包括试剂Rl和试剂R2， 所述试剂Rl和试剂R2的组成如下: 试剂Rl中含有缓冲液..........................................................................0.1mo1/L，氯化钴...........................................................................24mmo1/L，十二烷基二甲基甜菜碱................................................3g/L,防腐剂............................................................................0.5g/L ； 2)试剂R2的组分为:缓冲液.............................................................................0.1mo1/L， 噻二唑偶氮二甲氨基苯酹............................24mmol/L,十二烷基二甲基甜菜碱...................................................3g/L,_齐11................................................................................0.5g/L。
2.根据权利要求1所述的缺血修饰白蛋白检测试剂，其特征在于试剂Rl中缓冲液为25°C, pH为7.6的哌嗪-1，4- 二乙磺酸缓冲液。
3.根据权利要求1所述的缺血修饰白蛋白检测试剂，其特征在于试剂R2中缓冲液为25°C，pH为5.0的MES缓冲液。
4.根据权利要求1所述的缺血修饰白蛋白检测试剂，其特征在于所述防腐剂为NaN3。
5.一种使用权利要求1-4中任一项所述的缺血修饰白蛋白检测试剂来检测缺血修饰白蛋白的检测方法，其特征在于使用全自动生化分析仪利用双试剂终点法进行测定，检测主波长为548nm。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于Rl试剂和R2试剂的比例为2:1。
【文档编号】G01N21/31GK103558397SQ201310537922
【公开日】2014年2月5日 申请日期:2013年11月4日 优先权日:2013年11月4日
【发明者】谭柏清, 李志明, 甘宜梧 申请人:山东博科生物产业有限公司