一种用于筛选抗肿瘤药物的spr传感芯片的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，以市售的传感片L1为基板，在所述基板表面偶联含MDR1的微囊泡。本案利用MDR1特异性识别候选药物分子，根据MDR1与药物之间的亲和力，判断药物可被肿瘤细胞耐受的可能性，实现药物筛选，同时该芯片检测的蛋白-药物亲和动力学也可被用于多药耐药机理的研究。本案制备的SPR传感芯片结合了表面等离子共振技术的非标记及高灵敏性的优点，可开发作为有效的高通量药物筛选和药理学研究工具。
【专利说明】—种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及SPR传感检测领域，特别涉及一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法。
【背景技术】
[0002]肿瘤治疗是目前的研究热点，化疗是时下治疗恶性肿瘤的主要方法，然而肿瘤细胞对化疗药物的多药耐药是实现治疗的主要障碍之一，也是多数肿瘤患者治疗后效果不佳的重要因素。多药耐药蛋白(MDRl)属于ATP能量依赖型跨膜转运蛋白，对于外源药物具有选择性与特异性外排的功能。目前的大量研究均表明，MDRl的过表达是多药耐药的重要原因之一。因此，抗肿瘤药物筛选中均将MDRl对药物的识别能力作为重要依据，同时，多药耐药现象的研究中也将MDRl作为主要内容之一。
[0003]表面等离子共振传感技术(SPR)发源于上世纪80年代，因其免标记、快速灵敏以及实时监测特性，被广泛应用于生物大分子相互作用、大分子与小分子相互作用、药物筛选以及肿瘤研究中。基于该技术开发的芯片与仪器已经高度商业化，目前国外主要有Biacore, IBIS等系列，国内也有中科院电子所研制的各型号仪器与芯片出售，然而这些芯片中还未有研究多药耐药现象及机理的报道。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，以填补国内市场上研究抗肿瘤药物及多药耐药机理所用SPR传感芯片的空白。
[0005]本发明提供一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，以市售的传感片LI为基板，在所述基板表面偶联含MDRl的微囊泡。
[0006]优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，以市售的传感片LI为基板，将所述基板放入BIACore3000仪器中，注入磷酸缓冲液使其以15?25微升/分钟的流速持续流经基板表面，随后又向该仪器中以15?25微升/分钟的流速注入15?25mM的3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液，注入持续时间为2?4min ;用磷酸缓冲液冲洗所述基板，最后向该仪器中注入含MDRl的微囊泡悬浮液，当所述BIACore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时，停止注入含MDRl的微囊泡悬浮液，待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后，得到表面偶联有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl 芯片。
[0007]优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，所述的含MDRl的微囊泡悬浮液采用如下方法制得:将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养，待MDCK-MDR1细胞生长至90%融合后，对其进行胰酶-EDTA消化，离心，并重新悬浮于磷酸缓冲液中；将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中，经超声破碎与蔗糖密度梯度离心后，取离心液的中间层，将所述中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mM Tris缓冲液中，从而获得含MDRl的微囊泡悬浮液。[0008]优选地,所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,在超声破碎时，超声频率为250Hz，超声时间为3min。
[0009]优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，在蔗糖密度梯度离心时，蔗糖浓度为38wt%，离心速度为lOOOOg，离心时间为lOOmin，温度控制在4±0.I。。。
[0010]优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，在获得所述的含MDRl的微囊泡悬浮液后，将其注入BIAcore3000仪器前，还包括对所获含MDRl的微囊泡悬浮液进行鉴定:采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性；采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDRl的蛋白活性；采用BCA法检测含MDRl的微囊泡悬浮液中的蛋白总量；将以上测定参数进行比对，得出所获含MDRl的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及活度；采用动态光散射仪测定微囊泡的直径分布，直径在150?300nm之间的才能注入BIAcore3000 仪器中。
[0011]优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，在制得Ll-MDRl芯片之后，还包括对其进行表面覆盖率检测:将所述Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000仪器中，注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸缓冲液，当RU值的改变量小于50时，表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖，最后取出并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。
[0012]优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统，光源波长为633nm,动态光散射仪工作温度为25 ±0.1°C。
[0013]优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，磷酸缓冲液配制方法为:将0.27g磷酸二氢钾、1.42g磷酸氢二钠、Sg氯化钠及0.2g氯化钾溶解于IL双蒸水中，并通过滴加IM的盐酸水溶液或氢氧化钠水溶液来调整pH至7.4。
[0014]优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，Tris缓冲液的pH 为 7.4。
[0015]本发明的有益效果是:利用MDRl特异性识别候选药物分子，根据MDRl与药物之间的亲和力，判断药物可被肿瘤细胞耐受的可能性，实现药物筛选，同时该芯片检测的蛋白-药物亲和动力学也可被用于多药耐药机理的研究。本芯片结合了表面等离子共振技术的非标记及高灵敏性的优点，可开发作为有效的高通量药物筛选和药理学研究工具。
【专利附图】
【附图说明】
[0016]图1是Ll-MDRl芯片结构示意图，其中I为玻璃片基，2为镀金膜层，3为羧基化葡聚糖膜层，4为亲脂残基，5为微囊泡。
[0017]图2是Ll-MDRl芯片检测下不同底物的响应曲线。其中A为红霉素，B为甲氨蝶呤，C为罗丹明123，D为利福平，E为肌酐。
【具体实施方式】
[0018]下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0019]本发明提供了一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，包括以下步骤:[0020]步骤I)制备含MDRl的微囊泡悬浮液
[0021]将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养，待MDCK-MDR1细胞生长至90%融合后，对其进行胰酶-EDTA消化，离心，并重新悬浮于磷酸缓冲液中；将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中，经超声破碎、蔗糖密度梯度离心后，取离心液的中间层，该中间层是高倍浓缩的含MDRl的微囊泡蔗糖溶液，其中磷酸缓冲液和蔗糖溶液的含量极少；随后将中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mM Tris缓冲液中，从而获得含MDRl的微囊泡悬浮液。
[0022]在超声破碎时，超声频率为250Hz，超声时间为3min。在进行蔗糖密度梯度离心时，蔗糖浓度为38wt%，离心速度为10000g(g代表重力加速度)，离心时间为lOOmin，温度控制在4±0.1°C。Tris缓冲液的pH为7.4。
[0023]步骤2)对微囊泡悬浮液的鉴定
[0024]采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性；采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDRl的蛋白活性；采用BCA法检测含MDRl的微囊泡悬浮液中的蛋白总量；将以上测定参数进行比对，得出碱性磷酸酶的活性与总蛋白量比值、蛋白活性与蛋白总量比值，从而获知含MDRl的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及蛋白活度；
[0025]采用动态光散射仪测定微囊泡的直径分布，直径在150?300nm之间的才能注入BIAcore3000仪器中，直径不在此区间范围的不适用于后续的试验，应舍弃。动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统，光源波长为633nm,动态光散射仪工作温度为25 ±0.1°C。
[0026]步骤3)制作Ll-MDRl芯片
[0027]以市售的传感片LI为基板，将基板放入BIACore3000仪器中，注入磷酸缓冲液使其以15?25微升/分钟的流速持续流经基板表面，随后又向该仪器中以15?25微升/分钟的流速注入15?25mM的3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液，注入持续时间为2?4min ;用磷酸缓冲液冲洗基板，最后向该仪器中注入含MDRl的微囊泡悬浮液，当BIACore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时，停止注入含MDRl的微囊泡悬浮液，待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后，得到表面偶联有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl芯片。
[0028]3-[(3_胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸是一种两性表面活性剂，可以增溶蛋白。
[0029]步骤4) Ll-MDRl芯片表面覆盖率验证
[0030]将Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000仪器中，注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸缓冲液，当RU值的改变量小于50时，表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖，最后取出芯片并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。Ll-MDRl芯片的干燥可采用氮气吹干、空气吹干、烘干或者自然晾干。
[0031]值得注意的是，以上所用磷酸缓冲液均采用以下方法制得:将0.27g磷酸二氢钾、
1.42g磷酸氢二钠、8g氯化钠及0.2g氯化钾溶解于IL双蒸水中，并通过滴加IM的盐酸水溶液或氢氧化钠水溶液来调整pH至7.4。
[0032]实施例1:
[0033]步骤I)制备含MDRl的微囊泡悬浮液
[0034]将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养，待MDCK-MDR1细胞生长至90 %融合后，对其进行胰酶-EDTA消化，离心，并重新悬浮于磷酸缓冲液中；将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中，经超声破碎、蔗糖密度梯度离心后，取离心液的中间层，该中间层是高倍浓缩的含MDRl的微囊泡蔗糖溶液，其中磷酸缓冲液和蔗糖溶液的含量极少；随后将中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mM Tris缓冲液中，从而获得含MDRl的微囊泡悬浮液。
[0035]在超声破碎时，超声频率为250Hz，超声时间为3min。在进行蔗糖密度梯度离心时，蔗糖浓度为38wt%，离心速度为10000g(g代表重力加速度)，离心时间为lOOmin，温度控制在4±0.1°C。Tris缓冲液的pH为7.4。
[0036]步骤2)对微囊泡悬浮液的鉴定
[0037]采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性；采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDRl的蛋白活性；采用BCA法检测含MDRl的微囊泡悬浮液中的蛋白总量；将以上测定参数进行比对，得出碱性磷酸酶的活性与总蛋白量比值、蛋白活性与蛋白总量比值，从而获知含MDRl的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及蛋白活度；
[0038]采用动态光散射仪测定微囊泡的直径分布，直径在150?300nm之间的才能注入BIAcore3000仪器中，直径不在此区间范围的不适用于后续的试验，应舍弃。动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统，光源波长为633nm,动态光散射仪工作温度为25 ±0.1°C。
[0039]步骤3)制作Ll-MDRl芯片
[0040]以市售的传感片LI为基板，将基板放入BIACore3000仪器中，注入磷酸缓冲液使其以15微升/分钟的流速持续流经基板表面，随后又向该仪器中以15微升/分钟的流速注入15mM的3-[(3_胆固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液，注入持续时间为2min ;用磷酸缓冲液冲洗基板，最后向该仪器中注入含MDRl的微囊泡悬浮液，当BIACore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时，停止注入含MDRl的微囊泡悬浮液，待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后，得到表面偶联有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl芯片。
[0041 ] 步骤4) Ll-MDRl芯片表面覆盖率验证
[0042]将Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000仪器中，注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸缓冲液，当RU值的改变量小于50时，表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖，最后取出芯片并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。
[0043]实施例2:
[0044]步骤I)制备含MDRl的微囊泡悬浮液
[0045]将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养，待MDCK-MDR1细胞生长至90 %融合后，对其进行胰酶-EDTA消化，离心，并重新悬浮于磷酸缓冲液中；将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中，经超声破碎、蔗糖密度梯度离心后，取离心液的中间层，该中间层是高倍浓缩的含MDRl的微囊泡蔗糖溶液，其中磷酸缓冲液和蔗糖溶液的含量极少；随后将中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mM Tris缓冲液中，从而获得含MDRl的微囊泡悬浮液。
[0046]在超声破碎时，超声频率为250Hz，超声时间为3min。在进行蔗糖密度梯度离心时，蔗糖浓度为38wt%，离心速度为10000g(g代表重力加速度)，离心时间为lOOmin，温度控制在4±0.1°C。Tris缓冲液的pH为7.4。
[0047]步骤2)对微囊泡悬浮液的鉴定
[0048]采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性；采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDRl的蛋白活性；采用BCA法检测含MDRl的微囊泡悬浮液中的蛋白总量；将以上测定参数进行比对，得出碱性磷酸酶的活性与总蛋白量比值、蛋白活性与蛋白总量比值，从而获知含MDRl的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及蛋白活度；
[0049]采用动态光散射仪测定微囊泡的直径分布，直径在150?300nm之间的才能注入BIAcore3000仪器中，直径不在此区间范围的不适用于后续的试验，应舍弃。动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统，光源波长为633nm,动态光散射仪工作温度为25 ±0.1°C。
[0050]步骤3)制作Ll-MDRl芯片
[0051]以市售的传感片LI为基板，将基板放入BIACore3000仪器中，注入磷酸缓冲液使其以20微升/分钟的流速持续流经基板表面，随后又向该仪器中以20微升/分钟的流速注入20mM的3-[(3_胆固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液，注入持续时间为3min ;用磷酸缓冲液冲洗基板，最后向该仪器中注入含MDRl的微囊泡悬浮液，当BIACore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时，停止注入含MDRl的微囊泡悬浮液，待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后，得到表面偶联有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl芯片。
[0052]步骤4) Ll-MDRl芯片表面覆盖率验证
[0053]将Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000仪器中，注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸缓冲液，当RU值的改变量小于50时，表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖，最后取出芯片并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。
[0054]实施例3:
[0055]步骤I)制备含MDRl的微囊泡悬浮液
[0056]将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养，待MDCK-MDR1细胞生长至90%融合后，对其进行胰酶-EDTA消化，离心，并重新悬浮于磷酸缓冲液中；将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中，经超声破碎、蔗糖密度梯度离心后，取离心液的中间层，该中间层是高倍浓缩的含MDRl的微囊泡蔗糖溶液，其中磷酸缓冲液和蔗糖溶液的含量极少；随后将中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mM Tris缓冲液中，从而获得含MDRl的微囊泡悬浮液。
[0057]在超声破碎时，超声频率为250Hz，超声时间为3min。在进行蔗糖密度梯度离心时，蔗糖浓度为38wt%，离心速度为10000g(g代表重力加速度)，离心时间为lOOmin，温度控制在4±0.1°C。Tris缓冲液的pH为7.4。
[0058]步骤2)对微囊泡悬浮液的鉴定
[0059]采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性；采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDRl的蛋白活性；采用BCA法检测含MDRl的微囊泡悬浮液中的蛋白总量；将以上测定参数进行比对，得出碱性磷酸酶的活性与总蛋白量比值、蛋白活性与蛋白总量比值，从而获知含MDRl的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及蛋白活度；
[0060]采用动态光散射仪测定微囊泡的直径分布，直径在150?300nm之间的才能注入BIAcore3000仪器中，直径不在此区间范围的不适用于后续的试验，应舍弃。动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统，光源波长为633nm,动态光散射仪工作温度为25 ±0.1°C。
[0061]步骤3)制作Ll-MDRl芯片
[0062]以市售的传感片LI为基板，将基板放入BIACore3000仪器中，注入磷酸缓冲液使其以25微升/分钟的流速持续流经基板表面，随后又向该仪器中以25微升/分钟的流速注入25mM的3-[(3_胆固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液，注入持续时间为4min ；用磷酸缓冲液冲洗基板，最后向该仪器中注入含MDRl的微囊泡悬浮液，当BIACore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时，停止注入含MDRl的微囊泡悬浮液，待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后，得到表面偶联有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl芯片。
[0063]步骤4) Ll-MDRl芯片表面覆盖率验证
[0064]将Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000仪器中，注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸缓冲液，当RU值的改变量小于50时，表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖，最后取出芯片并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。
[0065]实施例4:使用上述方法获得的Ll-MDRl芯片进行SPR检测
[0066]步骤I)将Ll-MDRl芯片放入BIAcore3000仪器中，首先通入磷酸盐缓冲液(含有5mM ATP)，直至得到平稳基线。
[0067]步骤2) 5种对于MDRl具有不同亲和力的底物红霉素、甲氨蝶呤、罗丹明123、利福平以及肌酐溶解于磷酸缓冲液中，并通过Ll-MDRl芯片表面，获得相应的响应曲线(见图2，其中A为红霉素，B为甲氨蝶呤，C为罗丹明123，D为利福平，E为肌酐)。
[0068]步骤3)对比文献中各底物与转运蛋白的亲和力，排序与响应曲线结果一致，验证本方法在多药耐药现象研究以及药物筛选中应用的可行性。
[0069]尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。
【权利要求】
1.一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，以市售的传感片LI为基板，在所述基板表面偶联含MDRl的微囊泡。
2.根据权利要求1所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，以市售的传感片LI为基板，将所述基板放入BIAcOre3000仪器中，注入磷酸缓冲液使其以15~25微升/分钟的流速持续流经基板表面，随后又向该仪器中以15~25微升/分钟的流速注入15~25mM的3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液，注入持续时间为2~4min ;用磷酸缓冲液冲洗所述基板，最后向该仪器中注入含MDRl的微囊泡悬浮液，当所述BIACore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时，停止注入含MDRl的微囊泡悬浮液，待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后，得到表面偶联有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl芯片。
3.根据权利要求2所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，所述的含MDRl的微囊泡悬浮液采用如下方法制得:将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养，待MDCK-MDR1细胞生长至90 %融合后，对其进行胰酶-EDTA消化，离心，并重新悬浮于磷酸缓冲液中；将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中，经超声破碎、蔗糖密度梯度离心后，取离心液的中间层，将所述中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mM Tris缓冲液中，从而获得含MDRl的微囊泡悬浮液。
4.根据权利要求3所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，在超声破碎时，超声频率为250Hz，超声时间为3min。
5.根据权利要求3所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，在蔗糖密度梯度离心时，蔗糖浓度为38wt%，离心速度为10000g，离心时间为lOOmin，温度控制在4 ± 0.1°C。
6.根据权利要求3所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，在获得所述的含MDRl的微囊泡悬浮液后，将其注入BIACore3000仪器前，还包括对所获含MDRl的微囊泡悬浮液进行鉴定:采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性；采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDRl的蛋白活性；采用BCA法检测含MDRl的微囊泡悬浮液中的蛋白总量；将以上测定参数进行比对，得出所获含MDRl的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及活度；采用动态光散射仪检测并确定微囊泡的直径分布，直径在150~300nm之间的才能注入BIAcore3000仪器中。
7.根据权利要求2所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，在制得Ll-MDRl芯片之后，还包括对其进行表面覆盖率检测:将所述Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000仪器中，注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸缓冲液，当RU值的改变量小于50时，表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖，最后取出并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。
8.根据权利要求6所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统，光源波长为633nm,动态光散射仪工作温度为 25±0.10Co
9.根据权利要求2所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，磷酸缓冲液配制方法为:将0.27g磷酸二氢钾、1.42g磷酸氢二钠、Sg氯化钠及0.2g氯化钾溶解于IL双蒸水中，并通过滴加IM的盐酸水溶液或氢氧化钠水溶液来调整pH至7.4。
10.根据权利要求3所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于， Tris缓冲液的pH为7.4。
【文档编号】G01N21/55GK103712954SQ201310730985
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2013年12月27日 优先权日:2013年12月27日
【发明者】殷建, 陈名利, 林颖, 胡军 申请人:中国科学院苏州生物医学工程技术研究所