一种用于筛选抗肿瘤药物的spr传感芯片的制备方法

文档序号:6190207
一种用于筛选抗肿瘤药物的spr传感芯片的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,以市售的传感片L1为基板,在所述基板表面偶联含MDR1的微囊泡。本案利用MDR1特异性识别候选药物分子,根据MDR1与药物之间的亲和力,判断药物可被肿瘤细胞耐受的可能性,实现药物筛选,同时该芯片检测的蛋白-药物亲和动力学也可被用于多药耐药机理的研究。本案制备的SPR传感芯片结合了表面等离子共振技术的非标记及高灵敏性的优点,可开发作为有效的高通量药物筛选和药理学研究工具。
【专利说明】—种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及SPR传感检测领域,特别涉及一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法。
【背景技术】
[0002]肿瘤治疗是目前的研究热点,化疗是时下治疗恶性肿瘤的主要方法,然而肿瘤细胞对化疗药物的多药耐药是实现治疗的主要障碍之一,也是多数肿瘤患者治疗后效果不佳的重要因素。多药耐药蛋白(MDRl)属于ATP能量依赖型跨膜转运蛋白,对于外源药物具有选择性与特异性外排的功能。目前的大量研究均表明,MDRl的过表达是多药耐药的重要原因之一。因此,抗肿瘤药物筛选中均将MDRl对药物的识别能力作为重要依据,同时,多药耐药现象的研究中也将MDRl作为主要内容之一。
[0003]表面等离子共振传感技术(SPR)发源于上世纪80年代,因其免标记、快速灵敏以及实时监测特性,被广泛应用于生物大分子相互作用、大分子与小分子相互作用、药物筛选以及肿瘤研究中。基于该技术开发的芯片与仪器已经高度商业化,目前国外主要有Biacore, IBIS等系列,国内也有中科院电子所研制的各型号仪器与芯片出售,然而这些芯片中还未有研究多药耐药现象及机理的报道。

【发明内容】

[0004]本发明的目的在于提供一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,以填补国内市场上研究抗肿瘤药物及多药耐药机理所用SPR传感芯片的空白。
[0005]本发明提供一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,以市售的传感片LI为基板,在所述基板表面偶联含MDRl的微囊泡。
[0006]优选地,所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,以市售的传感片LI为基板,将所述基板放入BIACore3000仪器中,注入磷酸缓冲液使其以15?25微升/分钟的流速持续流经基板表面,随后又向该仪器中以15?25微升/分钟的流速注入15?25mM的3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液,注入持续时间为2?4min ;用磷酸缓冲液冲洗所述基板,最后向该仪器中注入含MDRl的微囊泡悬浮液,当所述BIACore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时,停止注入含MDRl的微囊泡悬浮液,待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后,得到表面偶联有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl 芯片。
[0007]优选地,所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,所述的含MDRl的微囊泡悬浮液采用如下方法制得:将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养,待MDCK-MDR1细胞生长至90%融合后,对其进行胰酶-EDTA消化,离心,并重新悬浮于磷酸缓冲液中;将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中,经超声破碎与蔗糖密度梯度离心后,取离心液的中间层,将所述中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mM Tris缓冲液中,从而获得含MDRl的微囊泡悬浮液。[0008]优选地,所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,在超声破碎时,超声频率为250Hz,超声时间为3min。
[0009]优选地,所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,在蔗糖密度梯度离心时,蔗糖浓度为38wt%,离心速度为lOOOOg,离心时间为lOOmin,温度控制在4±0.I。。。
[0010]优选地,所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,在获得所述的含MDRl的微囊泡悬浮液后,将其注入BIAcore3000仪器前,还包括对所获含MDRl的微囊泡悬浮液进行鉴定:采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性;采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDRl的蛋白活性;采用BCA法检测含MDRl的微囊泡悬浮液中的蛋白总量;将以上测定参数进行比对,得出所获含MDRl的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及活度;采用动态光散射仪测定微囊泡的直径分布,直径在150?300nm之间的才能注入BIAcore3000 仪器中。
[0011]优选地,所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,在制得Ll-MDRl芯片之后,还包括对其进行表面覆盖率检测:将所述Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000仪器中,注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸缓冲液,当RU值的改变量小于50时,表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖,最后取出并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。
[0012]优选地,所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统,光源波长为633nm,动态光散射仪工作温度为25 ±0.1°C。
[0013]优选地,所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,磷酸缓冲液配制方法为:将0.27g磷酸二氢钾、1.42g磷酸氢二钠、Sg氯化钠及0.2g氯化钾溶解于IL双蒸水中,并通过滴加IM的盐酸水溶液或氢氧化钠水溶液来调整pH至7.4。
[0014]优选地,所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,Tris缓冲液的pH 为 7.4。
[0015]本发明的有益效果是:利用MDRl特异性识别候选药物分子,根据MDRl与药物之间的亲和力,判断药物可被肿瘤细胞耐受的可能性,实现药物筛选,同时该芯片检测的蛋白-药物亲和动力学也可被用于多药耐药机理的研究。本芯片结合了表面等离子共振技术的非标记及高灵敏性的优点,可开发作为有效的高通量药物筛选和药理学研究工具。
【专利附图】

【附图说明】
[0016]图1是Ll-MDRl芯片结构示意图,其中I为玻璃片基,2为镀金膜层,3为羧基化葡聚糖膜层,4为亲脂残基,5为微囊泡。
[0017]图2是Ll-MDRl芯片检测下不同底物的响应曲线。其中A为红霉素,B为甲氨蝶呤,C为罗丹明123,D为利福平,E为肌酐。
【具体实施方式】
[0018]下面结合附图对本发明做进一步的详细说明,以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0019]本发明提供了一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,包括以下步骤:[0020]步骤I)制备含MDRl的微囊泡悬浮液
[0021]将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养,待MDCK-MDR1细胞生长至90%融合后,对其进行胰酶-EDTA消化,离心,并重新悬浮于磷酸缓冲液中;将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中,经超声破碎、蔗糖密度梯度离心后,取离心液的中间层,该中间层是高倍浓缩的含MDRl的微囊泡蔗糖溶液,其中磷酸缓冲液和蔗糖溶液的含量极少;随后将中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mM Tris缓冲液中,从而获得含MDRl的微囊泡悬浮液。
[0022]在超声破碎时,超声频率为250Hz,超声时间为3min。在进行蔗糖密度梯度离心时,蔗糖浓度为38wt%,离心速度为10000g(g代表重力加速度),离心时间为lOOmin,温度控制在4±0.1°C。Tris缓冲液的pH为7.4。
[0023]步骤2)对微囊泡悬浮液的鉴定
[0024]采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性;采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDRl的蛋白活性;采用BCA法检测含MDRl的微囊泡悬浮液中的蛋白总量;将以上测定参数进行比对,得出碱性磷酸酶的活性与总蛋白量比值、蛋白活性与蛋白总量比值,从而获知含MDRl的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及蛋白活度;
[0025]采用动态光散射仪测定微囊泡的直径分布,直径在150?300nm之间的才能注入BIAcore3000仪器中,直径不在此区间范围的不适用于后续的试验,应舍弃。动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统,光源波长为633nm,动态光散射仪工作温度为25 ±0.1°C。
[0026]步骤3)制作Ll-MDRl芯片
[0027]以市售的传感片LI为基板,将基板放入BIACore3000仪器中,注入磷酸缓冲液使其以15?25微升/分钟的流速持续流经基板表面,随后又向该仪器中以15?25微升/分钟的流速注入15?25mM的3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液,注入持续时间为2?4min ;用磷酸缓冲液冲洗基板,最后向该仪器中注入含MDRl的微囊泡悬浮液,当BIACore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时,停止注入含MDRl的微囊泡悬浮液,待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后,得到表面偶联有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl芯片。
[0028]3-[(3_胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸是一种两性表面活性剂,可以增溶蛋白。
[0029]步骤4) Ll-MDRl芯片表面覆盖率验证
[0030]将Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000仪器中,注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸缓冲液,当RU值的改变量小于50时,表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖,最后取出芯片并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。Ll-MDRl芯片的干燥可采用氮气吹干、空气吹干、烘干或者自然晾干。
[0031]值得注意的是,以上所用磷酸缓冲液均采用以下方法制得:将0.27g磷酸二氢钾、
1.42g磷酸氢二钠、8g氯化钠及0.2g氯化钾溶解于IL双蒸水中,并通过滴加IM的盐酸水溶液或氢氧化钠水溶液来调整pH至7.4。
[0032]实施例1:
[0033]步骤I)制备含MDRl的微囊泡悬浮液
[0034]将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养,待MDCK-MDR1细胞生长至90 %融合后,对其进行胰酶-EDTA消化,离心,并重新悬浮于磷酸缓冲液中;将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中,经超声破碎、蔗糖密度梯度离心后,取离心液的中间层,该中间层是高倍浓缩的含MDRl的微囊泡蔗糖溶液,其中磷酸缓冲液和蔗糖溶液的含量极少;随后将中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mM Tris缓冲液中,从而获得含MDRl的微囊泡悬浮液。
[0035]在超声破碎时,超声频率为250Hz,超声时间为3min。在进行蔗糖密度梯度离心时,蔗糖浓度为38wt%,离心速度为10000g(g代表重力加速度),离心时间为lOOmin,温度控制在4±0.1°C。Tris缓冲液的pH为7.4。
[0036]步骤2)对微囊泡悬浮液的鉴定
[0037]采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性;采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDRl的蛋白活性;采用BCA法检测含MDRl的微囊泡悬浮液中的蛋白总量;将以上测定参数进行比对,得出碱性磷酸酶的活性与总蛋白量比值、蛋白活性与蛋白总量比值,从而获知含MDRl的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及蛋白活度;
[0038]采用动态光散射仪测定微囊泡的直径分布,直径在150?300nm之间的才能注入BIAcore3000仪器中,直径不在此区间范围的不适用于后续的试验,应舍弃。动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统,光源波长为633nm,动态光散射仪工作温度为25 ±0.1°C。
[0039]步骤3)制作Ll-MDRl芯片
[0040]以市售的传感片LI为基板,将基板放入BIACore3000仪器中,注入磷酸缓冲液使其以15微升/分钟的流速持续流经基板表面,随后又向该仪器中以15微升/分钟的流速注入15mM的3-[(3_胆固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液,注入持续时间为2min ;用磷酸缓冲液冲洗基板,最后向该仪器中注入含MDRl的微囊泡悬浮液,当BIACore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时,停止注入含MDRl的微囊泡悬浮液,待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后,得到表面偶联有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl芯片。
[0041 ] 步骤4) Ll-MDRl芯片表面覆盖率验证
[0042]将Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000仪器中,注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸缓冲液,当RU值的改变量小于50时,表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖,最后取出芯片并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。
[0043]实施例2:
[0044]步骤I)制备含MDRl的微囊泡悬浮液
[0045]将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养,待MDCK-MDR1细胞生长至90 %融合后,对其进行胰酶-EDTA消化,离心,并重新悬浮于磷酸缓冲液中;将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中,经超声破碎、蔗糖密度梯度离心后,取离心液的中间层,该中间层是高倍浓缩的含MDRl的微囊泡蔗糖溶液,其中磷酸缓冲液和蔗糖溶液的含量极少;随后将中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mM Tris缓冲液中,从而获得含MDRl的微囊泡悬浮液。
[0046]在超声破碎时,超声频率为250Hz,超声时间为3min。在进行蔗糖密度梯度离心时,蔗糖浓度为38wt%,离心速度为10000g(g代表重力加速度),离心时间为lOOmin,温度控制在4±0.1°C。Tris缓冲液的pH为7.4。
[0047]步骤2)对微囊泡悬浮液的鉴定
[0048]采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性;采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDRl的蛋白活性;采用BCA法检测含MDRl的微囊泡悬浮液中的蛋白总量;将以上测定参数进行比对,得出碱性磷酸酶的活性与总蛋白量比值、蛋白活性与蛋白总量比值,从而获知含MDRl的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及蛋白活度;
[0049]采用动态光散射仪测定微囊泡的直径分布,直径在150?300nm之间的才能注入BIAcore3000仪器中,直径不在此区间范围的不适用于后续的试验,应舍弃。动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统,光源波长为633nm,动态光散射仪工作温度为25 ±0.1°C。
[0050]步骤3)制作Ll-MDRl芯片
[0051]以市售的传感片LI为基板,将基板放入BIACore3000仪器中,注入磷酸缓冲液使其以20微升/分钟的流速持续流经基板表面,随后又向该仪器中以20微升/分钟的流速注入20mM的3-[(3_胆固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液,注入持续时间为3min ;用磷酸缓冲液冲洗基板,最后向该仪器中注入含MDRl的微囊泡悬浮液,当BIACore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时,停止注入含MDRl的微囊泡悬浮液,待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后,得到表面偶联有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl芯片。
[0052]步骤4) Ll-MDRl芯片表面覆盖率验证
[0053]将Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000仪器中,注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸缓冲液,当RU值的改变量小于50时,表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖,最后取出芯片并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。
[0054]实施例3:
[0055]步骤I)制备含MDRl的微囊泡悬浮液
[0056]将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养,待MDCK-MDR1细胞生长至90%融合后,对其进行胰酶-EDTA消化,离心,并重新悬浮于磷酸缓冲液中;将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中,经超声破碎、蔗糖密度梯度离心后,取离心液的中间层,该中间层是高倍浓缩的含MDRl的微囊泡蔗糖溶液,其中磷酸缓冲液和蔗糖溶液的含量极少;随后将中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mM Tris缓冲液中,从而获得含MDRl的微囊泡悬浮液。
[0057]在超声破碎时,超声频率为250Hz,超声时间为3min。在进行蔗糖密度梯度离心时,蔗糖浓度为38wt%,离心速度为10000g(g代表重力加速度),离心时间为lOOmin,温度控制在4±0.1°C。Tris缓冲液的pH为7.4。
[0058]步骤2)对微囊泡悬浮液的鉴定
[0059]采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性;采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDRl的蛋白活性;采用BCA法检测含MDRl的微囊泡悬浮液中的蛋白总量;将以上测定参数进行比对,得出碱性磷酸酶的活性与总蛋白量比值、蛋白活性与蛋白总量比值,从而获知含MDRl的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及蛋白活度;
[0060]采用动态光散射仪测定微囊泡的直径分布,直径在150?300nm之间的才能注入BIAcore3000仪器中,直径不在此区间范围的不适用于后续的试验,应舍弃。动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统,光源波长为633nm,动态光散射仪工作温度为25 ±0.1°C。
[0061]步骤3)制作Ll-MDRl芯片
[0062]以市售的传感片LI为基板,将基板放入BIACore3000仪器中,注入磷酸缓冲液使其以25微升/分钟的流速持续流经基板表面,随后又向该仪器中以25微升/分钟的流速注入25mM的3-[(3_胆固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液,注入持续时间为4min ;用磷酸缓冲液冲洗基板,最后向该仪器中注入含MDRl的微囊泡悬浮液,当BIACore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时,停止注入含MDRl的微囊泡悬浮液,待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后,得到表面偶联有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl芯片。
[0063]步骤4) Ll-MDRl芯片表面覆盖率验证
[0064]将Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000仪器中,注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸缓冲液,当RU值的改变量小于50时,表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖,最后取出芯片并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。
[0065]实施例4:使用上述方法获得的Ll-MDRl芯片进行SPR检测
[0066]步骤I)将Ll-MDRl芯片放入BIAcore3000仪器中,首先通入磷酸盐缓冲液(含有5mM ATP),直至得到平稳基线。
[0067]步骤2) 5种对于MDRl具有不同亲和力的底物红霉素、甲氨蝶呤、罗丹明123、利福平以及肌酐溶解于磷酸缓冲液中,并通过Ll-MDRl芯片表面,获得相应的响应曲线(见图2,其中A为红霉素,B为甲氨蝶呤,C为罗丹明123,D为利福平,E为肌酐)。
[0068]步骤3)对比文献中各底物与转运蛋白的亲和力,排序与响应曲线结果一致,验证本方法在多药耐药现象研究以及药物筛选中应用的可行性。
[0069]尽管本发明的实施方案已公开如上,但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用,它完全可以被适用于各种适合本发明的领域,对于熟悉本领域的人员而言,可容易地实现另外的修改,因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下,本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。
【权利要求】
1.一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,其特征在于,以市售的传感片LI为基板,在所述基板表面偶联含MDRl的微囊泡。
2.根据权利要求1所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,其特征在于,以市售的传感片LI为基板,将所述基板放入BIAcOre3000仪器中,注入磷酸缓冲液使其以15~25微升/分钟的流速持续流经基板表面,随后又向该仪器中以15~25微升/分钟的流速注入15~25mM的3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]_1_丙磺酸水溶液,注入持续时间为2~4min ;用磷酸缓冲液冲洗所述基板,最后向该仪器中注入含MDRl的微囊泡悬浮液,当所述BIACore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时,停止注入含MDRl的微囊泡悬浮液,待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后,得到表面偶联有MDRl的微囊泡的Ll-MDRl芯片。
3.根据权利要求2所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,其特征在于,所述的含MDRl的微囊泡悬浮液采用如下方法制得:将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养,待MDCK-MDR1细胞生长至90 %融合后,对其进行胰酶-EDTA消化,离心,并重新悬浮于磷酸缓冲液中;将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中,经超声破碎、蔗糖密度梯度离心后,取离心液的中间层,将所述中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mM Tris缓冲液中,从而获得含MDRl的微囊泡悬浮液。
4.根据权利要求3所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,其特征在于,在超声破碎时,超声频率为250Hz,超声时间为3min。
5.根据权利要求3所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,其特征在于,在蔗糖密度梯度离心时,蔗糖浓度为38wt%,离心速度为10000g,离心时间为lOOmin,温度控制在4 ± 0.1°C。
6.根据权利要求3所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,其特征在于,在获得所述的含MDRl的微囊泡悬浮液后,将其注入BIACore3000仪器前,还包括对所获含MDRl的微囊泡悬浮液进行鉴定:采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性;采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDRl的蛋白活性;采用BCA法检测含MDRl的微囊泡悬浮液中的蛋白总量;将以上测定参数进行比对,得出所获含MDRl的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及活度;采用动态光散射仪检测并确定微囊泡的直径分布,直径在150~300nm之间的才能注入BIAcore3000仪器中。
7.根据权利要求2所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,其特征在于,在制得Ll-MDRl芯片之后,还包括对其进行表面覆盖率检测:将所述Ll-MDRl芯片置于BIAcore3000仪器中,注入含有0.1mg / ml牛血清白蛋白的磷酸缓冲液,当RU值的改变量小于50时,表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖,最后取出并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。
8.根据权利要求6所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,其特征在于,动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统,光源波长为633nm,动态光散射仪工作温度为 25±0.10Co
9.根据权利要求2所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,其特征在于,磷酸缓冲液配制方法为:将0.27g磷酸二氢钾、1.42g磷酸氢二钠、Sg氯化钠及0.2g氯化钾溶解于IL双蒸水中,并通过滴加IM的盐酸水溶液或氢氧化钠水溶液来调整pH至7.4。
10.根据权利要求3所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法,其特征在于, Tris缓冲液的pH为7.4。
【文档编号】G01N21/55GK103712954SQ201310730985
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2013年12月27日 优先权日:2013年12月27日
【发明者】殷建, 陈名利, 林颖, 胡军 申请人:中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
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