专利名称：一种便于使用的抗草甘膦转基因大豆pcr-elisa检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种试剂盒，具体涉及一种用于抗草甘膦转基因大豆PCR-ELISA检测的试剂盒。
背景技术：
目前在对转基因大豆进行转基因定性检测的过程中，需要对试剂进行提前的配制，费时、费力。且进行转基因定性检测所使用的试剂大部分都需要低温保存，因此在使用时需要取冰盒，将试剂放置在冰上，以防止试剂失效。但每次使用都要另取冰盒，较为繁琐。
实用新型内容本实用新型是要解决进行抗草甘膦转基因大豆PCR-ELISA检测过程复杂、繁琐的问题，提供一种便于使用的抗草甘膦转基因大豆PCR-ELISA检测试剂盒。本实用新型便于使用的抗草甘膦转基因大豆PCR-ELISA检测试剂盒包括PCR预混液试剂瓶、上游引物试剂瓶、下游引物试剂瓶、阳性对照试剂瓶、阴性对照试剂瓶、链霉亲和素试剂瓶、牛血清白蛋白试剂瓶、探针试剂瓶、超纯水试剂瓶、变性溶液试剂瓶、PBST缓冲液试剂瓶、杂交液试剂瓶、碳酸盐缓冲液试剂瓶、TBTS缓冲液试剂瓶、发色底物试剂瓶、终止液试剂瓶、外盒体和内盒体，所述内盒体为中空结构，内盒体的上表面设有十六个凹槽，十六个凹槽呈矩形设置，PCR预混液试剂瓶、上游引物试剂瓶、下游引物试剂瓶、阳性对照试剂瓶、阴性对照试剂瓶、链霉亲和素试剂瓶、牛血清白蛋白试剂瓶、探针试剂瓶、超纯水试剂瓶、变性溶液试剂瓶、PBST缓冲液试剂瓶、杂交液试剂瓶、碳酸盐缓冲液试剂瓶、TBTS缓冲液试剂瓶、发色底物试剂瓶和终止液试剂瓶的底部分别各对应插装在凹槽内。本实用新型与现有技术相比具有以下效果:本实用新型的内盒体的空腔内可装入水、碎冰或冰袋，若装入水，冷冻后内盒体的空腔内即为冰，这样试剂瓶放入试剂盒中即可保持低温，将本实用新型的试剂盒于室温下使用则无需另取冰盒，省时、省事；使用本实用新型进行抗草甘膦转基因大豆PCR-ELISA检测实验，操作简便快捷、实验效率高、结果稳定；本实用新型结构简单、成本低，适于实验室中使用。
图1为本实用新型的整体结构示意图；图2为内盒体上表面的俯视图；图3为图2中A-A方向的剖面图。
具体实施方式
具体实施方式
一:结合图1、图2和图3说明本实施方式，本实施方式便于使用的抗草甘膦转基因大豆PCR-ELISA检测试剂盒包括PCR预混液试剂瓶1、上游引物试剂瓶2、下游引物试剂瓶3、阳性对照试剂瓶4、阴性对照试剂瓶5、链霉亲和素试剂瓶6、牛血清白蛋白试剂瓶7、探针试剂瓶8、超纯水试剂瓶9、变性溶液试剂瓶10、PBST缓冲液试剂瓶11、杂交液试剂瓶12、碳酸盐缓冲液试剂瓶13、TBTS缓冲液试剂瓶14、发色底物试剂瓶15、终止液试剂瓶16、外盒体17和内盒体18，所述内盒体18为中空结构，内盒体18的上表面设有十六个凹槽18-1，十六个凹槽18-1呈矩形设置，PCR预混液试剂瓶1、上游引物试剂瓶2、下游引物试剂瓶3、阳性对照试剂瓶4、阴性对照试剂瓶5、链霉亲和素试剂瓶6、牛血清白蛋白试剂瓶7、探针试剂瓶8、超纯水试剂瓶9、变性溶液试剂瓶10、PBST缓冲液试剂瓶11、杂交液试剂瓶12、碳酸盐缓冲液试剂瓶13、TBTS缓冲液试剂瓶14、发色底物试剂瓶15和终止液试剂瓶16的底部分别各对应插装在凹槽18-1内。
具体实施方式
二:本实施方式所述内盒体的上表面凹槽18-1的深度小于试剂瓶的高度。其它组成和连接关系与具体实施方式
一相同。工作原理: 利用本实用新型进行抗草甘膦转基因大豆PCR-ELISA检测实验的操作步骤如下:步骤一、向每个反应管中加入I μ L上游引物试剂瓶2的溶液、I μ L下游引物试剂瓶3的溶液、IOyL PCR预混液试剂瓶I的溶液、1.5 μ L模板DNA和36.5 μ L超纯水试剂瓶9的溶液；向阳性对照反应管中加入I μ L上游引物试剂瓶2的溶液、I μ L下游引物试剂瓶3的溶液、10 μ L PCR预混液试剂瓶I的溶液、1.5 μ L阳性对照试剂瓶4的溶液和36.5 μ L超纯水试剂瓶9的溶液；向阴性对照反应管中加入I μ L上游引物试剂瓶2的溶液、I μ L下游引物试剂瓶3的溶液、10 μ L PCR预混液试剂瓶I的溶液、1.5 μ L阴性对照试剂瓶5的溶液和36.5 μ L超纯水试剂瓶9的溶液；步骤二、将反应管放入PCR仪中进行反应，反应条件为:预变性95°C 3min，变性95°C 30sec，退火 58°C 30sec,延伸 72°C 30sec，共 35 个循环，后延伸 72°C 3min, 4°C保温，获得PCR产物；步骤三、将链霉亲和素试剂瓶6的溶液用碳酸盐缓冲液试剂瓶13的溶液至IOmg/L,包被酶标板，100 μ L/孔，4°C过夜，第二天用TBTS缓冲液试剂瓶14的溶液洗三次，用牛血清白蛋白试剂瓶7的溶液封闭酶标板，37°C孵育2h ；步骤四、用TBTS缓冲液试剂瓶14的溶液稀释PCR产物，然后取80 μ L加入微孔板中，37°C孵育lh，再用TBTS缓冲液试剂瓶14的溶液洗涤4次，微孔板中加入80 μ L变性溶液试剂瓶10的溶液，室温变性15min，然后用PBST缓冲液试剂瓶11的溶液洗涤4次；步骤五、将50 μ L探针试剂瓶8的溶液和50 μ L杂交液试剂瓶12的溶液混合，在酶标板中探针和杂交液的混合溶液，杂交温度50°C，时间为lOmin，杂交后用TBTS缓冲液试剂瓶14的溶液洗酶标板3次；步骤六、用TBS稀释的碱性磷酸酶标记抗地高辛抗体，每孔加入100 μ L, 37V反应45min，用TBTS缓冲液试剂瓶14的溶液洗酶标板3次，加入100 μ L发色底物试剂瓶15的溶液于37°C显色，加入50 μ L终止液试剂瓶16的溶液；步骤七、用酶标仪测定OD值，观察结果。
权利要求1.一种便于使用的抗草甘膦转基因大豆PCR-ELISA检测试剂盒，其特征在于该试剂盒包括PCR预混液试剂瓶(I)、上游引物试剂瓶(2)、下游引物试剂瓶(3)、阳性对照试剂瓶(4)、阴性对照试剂瓶(5)、链霉亲和素试剂瓶￠)、牛血清白蛋白试剂瓶(7)、探针试剂瓶(8)、超纯水试剂瓶(9)、变性溶液试剂瓶(10)、PBST缓冲液试剂瓶(11)、杂交液试剂瓶(12)、碳酸盐缓冲液试剂瓶(13)、TBTS缓冲液试剂瓶(14)、发色底物试剂瓶(15)、终止液试剂瓶(16)、外盒体(17)和内盒体(18)，所述内盒体(18)为中空结构，内盒体(18)的上表面设有十六个凹槽(18-1)，十六个凹槽(18-1)呈矩形设置，PCR预混液试剂瓶(I)、上游引物试剂瓶(2)、下游引物试剂瓶(3)、阳性对照试剂瓶(4)、阴性对照试剂瓶(5)、链霉亲和素试剂瓶(6)、牛血清白蛋白试剂瓶(7)、探针试剂瓶(8)、超纯水试剂瓶(9)、变性溶液试剂瓶(10)、PBST缓冲液试剂瓶(11)、杂交液试剂瓶(12)、碳酸盐缓冲液试剂瓶(13)、TBTS缓冲液试剂瓶(14)、发色底物试剂瓶(15)和终止液试剂瓶(16)的底部分别各对应插装在凹槽(18-1)内。
2.根据权利要求1所述的一种便于使用的抗草甘膦转基因大豆PCR-ELISA检测试剂盒，其特征在于所述内盒体的上表面凹槽(18-1)的深度小于试剂瓶的高度。
专利摘要一种便于使用的抗草甘膦转基因大豆PCR-ELISA检测试剂盒，涉及一种试剂盒。要解决进行抗草甘膦转基因大豆PCR-ELISA检测过程复杂、繁琐的问题。试剂盒包括PCR预混液试剂瓶、上游引物试剂瓶、下游引物试剂瓶、阳性对照试剂瓶、阴性对照试剂瓶、链霉亲和素试剂瓶、牛血清白蛋白试剂瓶、探针试剂瓶、超纯水试剂瓶、变性溶液试剂瓶、PBST缓冲液试剂瓶、杂交液试剂瓶、碳酸盐缓冲液试剂瓶、TBTS缓冲液试剂瓶、发色底物试剂瓶、终止液试剂瓶、外盒体和内盒体。本实用新型用于抗草甘膦转基因大豆PCR-ELISA检测实验。
文档编号G01N33/53GK203021575SQ20132003907
公开日2013年6月26日 申请日期2013年1月24日 优先权日2013年1月24日
发明者仇有文, 张明辉, 袁肖寒, 高学军, 曲波, 于艳波, 甄贞, 李璐, 刘营, 敖金霞 申请人:东北农业大学