半定量检测4-氯苯氧乙酸的试纸条的制作方法
【专利摘要】本实用新型是一种半定量检测4-氯苯氧乙酸（4-D）的试纸条，包括有样品垫，胶体金垫，PVC板，硝酸纤维素膜和吸水垫，其中，PVC板上粘贴有硝酸纤维素膜，所述的硝酸纤维素膜上有检测区和对照区，检测区为检测线（T线），对照区为质控线（C线），硝酸纤维素膜的两端侧层叠粘贴有吸水垫和胶体金垫，胶体金垫上还层叠粘贴有样品垫。本实用新型的有益效果在于：操作简单、反应快速、敏感性高、特异性强和适合现场检测，而且还具有生产周期短、产量高、成本低等优点，在免疫检测【技术领域】具有良好的应用前景。本试纸条，操作简单、反应快速、敏感性高、特异性强和适合现场检测，而且还具有生产周期短、产量高、成本低等优点。
【专利说明】半定量检测4-氯苯氧乙酸的试纸条
【技术领域】
[0001]本实用新型属于免疫化学检测技术，具体来讲，是一种半定量检测4-氯苯氧乙酸(4-D)的试纸条，借助胶体金显色的免疫层析反应，以达到快速检测农产品、水、土壤中的4-氯苯氧乙酸农药残留的目的。
【背景技术】
[0002]4-氯苯氧乙酸是在生产上广泛使用的除草剂和植物生长调节剂，其在农产品、水和土壤中的残留危害不容忽视，如其在土壤、水中残留超标，易引起棉花、某些蔬菜，对人类的健康造成较大危害，据报道，4-氯苯氧乙酸具潜在的致癌性、致突变性，是一种内分泌干扰物质，对免疫系统和生育系统具不良影响，人体摄入吸收后对眼睛、皮肤也有刺激作用，反复接触后对肝、心脏有损坏作用，能引起惊厥等。鉴于此，有些国家和世界组织都在环境标准中对4-氯苯氧乙酸做出了严格的规定，世界卫生组织2003年8月颁布《饮用水水质指南》，规定饮用水中4-氯苯氧乙酸最大检出浓度30ug/l。我国2001年颁布的《饮用水水质卫生规范》的非常检出项目中，将4-氯苯氧乙酸的限制规定为0.03mg/l，对其检出量的常规检测分析只能是利用气象色谱(GC)和高效液相色谱(HPLC)等仪器在实验室操作，方法繁琐，分析速度慢，成本高，要求仪器化程度高。随着待检样品、特别是要求现场快速检测样品量和速递增加，传统的农药残留手段难以适应要求，因此，迫切需要开封和应用高效率农药残留分析技术。
[0003]通过大量资料检索，注意到:4_ 二氯苯氧乙酸完全抗原和抗体的制备，并将该人工免疫抗原免疫家兔制备多克隆抗体，在此基础上建立了间接酶联免疫吸附测定检测4-氯苯氧乙酸农药残留的技术。该技术较GC、HPLC有较大革新，使检测时间较短、成本大大较低，灵敏度提高，有利于在食品、土壤、水利环境中，4-氯苯氧乙酸农药残留的快速检测并推广应用，但其方法还存在操作还操作相对繁琐、需要重复多次洗涤，需借助酶标仪读数等，不能实现真正意义上的一步法快速测定。还有生物遗传器是一种以生物活性单位为敏感元件，结合化学，物理转换元件，对被分析物具有高度选择性的仪器，农药残留分析时灵敏度高，该法在即时检验领域可发挥很大作用，但因为该法仍需要一定的仪器设备条件，不易进一步降低检测成本。
[0004]胶体金免疫层析技术是近些年来发展起来的一种简单，快速免疫学检测方法，具灵敏、简单、快熟、无需设备和仪器、经济适用、具高度特异性和敏感性、结果直观可靠、试剂和样品用量极少、不需专业人员操作，易于推广使用，正可以满足这种需求。
【发明内容】
[0005]本实用新型的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种半定量检测4-氯苯氧乙酸(4-D)的试纸条，改变4-氯苯氧乙酸农药残留多步骤繁琐的问题，实现廉价、一步快速检测4-氯苯氧乙酸农药残留。
[0006]本实用新型解决上述技术问题所采用的技术方案是:半定量检测4-氯苯氧乙酸(4-D)的试纸条，其特征在于包括有样品垫，胶体金垫，PVC板，硝酸纤维素膜和吸水垫，其中，PVC板上粘贴有硝酸纤维素膜，所述的硝酸纤维素膜上有检测区和对照区，检测区为检测线(T线)，对照区为质控线(C线)，硝酸纤维素膜的两端侧层叠粘贴有吸水垫和胶体金垫，胶体金垫上还层叠粘贴有样品垫。
[0007]按上述方案，所述的检测线(T线)4有四条。
[0008]按上述方案，所述的检测线(T线)从左至右依次为Tl线、T2线、T3线、T4线，检测线(T线)中4-氯苯氧丁酸一BSA偶联物溶液浓度按照T4线、T3线、T2线、Tl线的次序依次递增，且包被有不同浓度4-氯苯氧丁酸一BSA偶联物包被原的总量刚好可与金标垫上的金标抗体完全中和，用以检测不同浓度的4-氯苯氧乙酸(4-D)农药残留，对照区包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。
[0009]本实用新型选择4-氯苯氧丁酸为4-氯苯氧乙酸抗体制备的半抗原，牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白，然后通过改良EDC法合成人工抗原4-氯苯氧丁酸一BSA。称取4-氯苯氧丁酸60mg，加入0.05MPBCPH11以上)，搅拌使其缓慢溶解，之后调节pH值至7.2左右，力口入60mg suIf-NHS,充分混合，再加入90mgEDC，搅匀，静置片刻，并将此反应液I小时内缓慢滴加到事先配好60mg9mlBSA溶液中，并4°C下搅拌反应物过夜，0.15M NaCl透析三天，5_6次左右，紫外分光光度计测紫外法测定和计算偶联物的结合比，得到适当结合比的4-氯苯氧丁酸-BSA偶联物，-20°C下冻存。
[0010]本实用新型的有益效果在于:4_氯苯氧乙酸(4-D)检测试剂条，操作简单、反应快速、敏感性高、特异性强和适合现场检测，而且还具有生产周期短、产量高、成本低等优点，在免疫检测【技术领域】具有良好的应用前景。本试纸条，操作简单、反应快速、敏感性高、特异性强和适合现场检测，而且还具有生产周期短、产量高、成本低等优点。
【专利附图】
【附图说明】
[0011]图1本实用新型的结构图；
[0012]图2本实用新型的俯视图；
[0013]图3检测4-氯苯氧乙酸(4-氯苯氧乙酸)，结果为阴性
[0014]图4检测4-氯苯氧乙酸(4-氯苯氧乙酸)，结果为低含量(20_100ng/ml)
[0015]图5检测4-氯苯氧乙酸(4-氯苯氧乙酸)，结果为中低含量(100-1000ng/ml)
[0016]图6检测4-氯苯氧乙酸(4-氯苯氧乙酸)，结果为中含量(l-10ug/ml)
[0017]图7检测4-氯苯氧乙酸(4-氯苯氧乙酸)，结果为高含量(> 10ug/ml)
[0018]图中，I为样品垫，2为胶体金垫，3为PVC板，4为测试线(T线，共4条)，5为质控线(C线)，6为硝酸纤维素膜，7为吸水垫。
【具体实施方式】
[0019]下面结合附图与实施例对本实用新型作进一步详细描述。
[0020]实施例1
[0021]如图1所示，半定量检测4-氯苯氧乙酸(4-D)的试纸条，其特征在于包括有样品垫I，胶体金垫2，PVC板3，硝酸纤维素膜6和吸水垫7，其中，PVC板3上粘贴有硝酸纤维素膜6，所述的硝酸纤维素膜上有检测区和对照区，检测区有四条检测线(T线)4，对照区为质控线(C线)5，硝酸纤维素膜6的两端侧层叠粘贴有吸水垫7和胶体金垫2，胶体金垫2上还层置粘贴有样品塾I。
[0022]所述的检测线(T线)从左至右依次为Tl线、T2线、T3线、T4线，检测线(T线)中4-氯苯氧丁酸一BSA偶联物溶液浓度按照T4线、T3线、T2线、Tl线的次序依次递增，且包被有不同浓度4-氯苯氧丁酸一BSA偶联物包被原，T线检测线上包被原的总量刚好可与金标垫上的金标抗体完全中和，用以检测不同浓度的4-氯苯氧乙酸(4-D)农药残留，对照区包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。
[0023]根据竞争抑制免疫层析原理，在硝酸纤维素膜6上的检测区包被不同浓度4-氯苯氧丁酸一BSA偶联物，对照区包被羊抗鼠多克隆抗体。当样品中不含4-氯苯氧乙酸时，玻璃纤维素膜上的胶体金抗4-氯苯氧乙酸抗体的量刚可使硝酸纤维素膜上4条检测线显色，质控线也显色；当待测物中有被测的抗原物质(4-氯苯氧丁酸)时，该农药残留就会与标记胶体金的抗4-氯苯氧丁酸抗体形成Ag-Ab-Au复合物，该复合物中抗4-氯苯氧丁酸抗体的活性位点将因被样品溶液中的残留药物占据而无法与检测区上的检测线上的药物抗原结合。
[0024]测定样品时，将试纸条样品吸收垫插入待测样品中，停留10秒后取出平放，10分钟后观察结果。结果判断方法是通过显示与免疫层析膜上的条带数量，来判定检测样品中4-氯苯氧乙酸的含量。所以当样品中4-氯苯氧乙酸为低含量时(20-100ng/ml )，检测线
1、2、3和质控线显色，检测线4不显色；样品中4-氯苯氧乙酸为中低含量时(IOO-1OOOng/ml)，检测线1、2和质控线显色，第3、4检测线不显色；样品中4-氯苯氧乙酸为中含量时(Ι-lOug/ml)，检测线I和质控线显色，检测线2、3、4不显色；样品中4-氯苯氧乙酸为高含量时(> 10ug/ml),检测线1、2、3、4均不显色，只质控线显色，判定为阴性。该检测在10分钟内完成，操作简单、反应快速、敏感性高、特异性强和适合现场检测，而且还具有生产周期短、产量高、成本低等优点。在免疫检测【技术领域】具有良好的应用前景。
[0025]总之，以上所述仅为本实用新型的较佳实施例，凡依本实用新型申请专利范围所作的均等变化与修饰，皆应属本实用新型专利的涵盖范围。
【权利要求】
1.半定量检测4-氯苯氧乙酸的试纸条，其特征在于包括有样品垫(1)，胶体金垫(2)，PVC板(3 )，硝酸纤维素膜(6 )和吸水垫(7 )，其中，PVC板(3 )上粘贴有硝酸纤维素膜(6 )，所述的硝酸纤维素膜上有检测区和对照区，检测区为检测线(4)，对照区为质控线(5)，硝酸纤维素膜(6)的两端侧层叠粘贴有吸水垫(7)和胶体金垫(2)，胶体金垫(2)上还层叠粘贴有样品垫(I)。
2.按权利要求1所述的半定量检测4-氯苯氧乙酸的试纸条，其特征在于所述的检测线(4)有四条。
【文档编号】G01N33/558GK203519613SQ201320384056
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年6月28日 优先权日:2013年6月28日
【发明者】陈琰, 周俊, 冷毅斌 申请人:武汉伊莱瑞特生物科技有限公司