四环素检测试纸条的制作方法
【专利摘要】一种四环素检测试纸条，由微孔试剂(8)和试纸条(9)组成，其特征在于：所述的微孔试剂(8)包括背板(1)，所述的背板(1)上从左至右分别贴有带标记的保护膜贴纸(5-1)、样品垫(2)、纤维素膜(3)、吸水垫(4)和保护膜贴纸(5-2)，所述的纤维素膜(3)上分别设有控制线C线(7)和检测线T线(6)，所述的C线(7)标记的是羊抗鼠或者兔抗鼠的二抗，所述的T线(6)标记的是牛血清白蛋白标记的四环素结合物，所述的微孔试剂(8)内设有四环素类单克隆抗体层(8-1)。本实用新型灵敏度高，检测范围广，检测速度快，操作方便。
【专利说明】四环素检测试纸条
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物【技术领域】，具体为一种四环素检测试纸条。
【背景技术】
[0002]奶牛乳房炎又名奶牛乳腺炎，是奶牛养殖中一种常见病和多发病。其发病原因复杂，病原主要是由多种非特定的病原微生物引起，有细菌、霉形体、真菌、病毒等。对于奶牛的乳房炎治疗，其原则是消除炎症以及杀灭侵入的病原菌，因此常用青霉素类、链霉素、四环素、氯霉素、卡那霉素和磺胺类等抗生素治疗。由于常规用药方法是将药物稀释成一定浓度，通过乳头管直接注入乳池，因此抗生素残留在所难免，所以用药后常有一定时间的休药期，期间生产的牛乳也不能作为原料乳进行加工销售。
[0003]四环素类抗生素(tetracycline antibiotics)作为治疗奶牛乳房炎的常用药物，是由放线菌产生的一类广谱抗生素，包括金霉素(chlotetracycline)、土霉素(oxytetracycline)、四环素(tetracycline)等,对多种细菌及立克次氏体、衣原体、支原体等所致之感染均有疗效。由于四环素类药物有诸如肝毒性、过敏反应和损害牙釉质等多种潜在危害，各国均规定了生鲜乳中的四环素类药物的残留限量。其中以俄罗斯、波兰等国家要求最为严格，俄罗斯联邦法律规定四环素类药物为10μ g/L。
[0004]目前四环素类抗生素的检测主要依靠酶联免疫检测试剂盒方法液相色谱方法和液相色谱质谱联用方法等。这些方法检测能力能满足国际国内限量标准要求，但多数依赖于大型分析仪器如高效液相色谱、液质联用仪和酶标仪等，主要用于实验室内部检测。而由于多数企业需要从散户或者小规模生产者收集牛奶，因此有必要开发一种适用于现场收集时应用的检测方法及其产品，满足基层奶站和企业的实际检测需求。
【发明内容】
[0005]本申请的目的在于提供一种四环素检测试纸条，以解决现有试纸条产品检测检测四环素类抗生素灵敏度较低的问题。
[0006]为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案:
[0007]一种四环素检测试纸条，由微孔试剂(8)和试纸条(9)组成，其特征在于:所述的微孔试剂(8)包括背板(I)，所述的背板(I)上从左至右分别贴有带标记的保护膜贴纸(5-1)、样品垫(2)、纤维素膜(3)、吸水垫(4)和保护膜贴纸(5-2)，所述的纤维素膜(3)上分别设有控制线C线(7)和检测线T线(6)，所述的C线(7)标记的是羊抗鼠或者兔抗鼠的二抗，所述的T线(6)标记的是牛血清白蛋白标记的四环素结合物，所述的微孔试剂⑶内设有四环素类单克隆抗体层(8-1)。
[0008]进一步，所述的微孔试剂(8)还包括塑料微孔(8-2)，以及盖在塑料微孔(8-2)上的塑料盖(8-3)，所述的塑料微孔(8-2)上设有作为加样体积的加样刻度线(8-4)，所述的四环素类单克隆抗体层(8-1)位于塑料微孔(8-2)底部。
[0009]进一步，所述的微孔试剂(8) 8个组排列在一起组成一排。[0010]进一步，所述的试纸条(9)的宽度为0.8cm，偏差范围为0.78、.82cm。
[0011]进一步，所述的微孔试剂⑶和试纸条(9)的个数按照1:1的比例密封于包装袋或者包装瓶中，保存在4-8°C温度下。
[0012]本发明的有益效果为:
[0013]1.灵敏度高，检测范围广。试纸条以四环素类抗生素高灵敏度单克隆抗体为基础材料研制而成，可以用于检测生鲜乳中的四环素类抗生素，检测限最低可以达到lOyg/L，可满足欧盟、美国和中国的四环素类抗生素限量要求。
[0014]2.检测速度快，操作方便。试纸条实验反应时间仅为3分钟，操作简便，无需特殊培训。一般奶站工人经过简单培训后即可掌握。
[0015]3.检测结果判定直观，无需特殊仪器。试纸条检测结果以C线和T线的颜色作为判定标准，肉眼直接观察，无需任何特殊仪器设备，非常适合于基层奶站和企业在实际收奶时现场检测使用。
[0016]4.降低成本，节省费用。由于试纸条应用了高灵敏度的单克隆抗体，单个试纸条研制和生产的成本大为降低，与国外同类型产品相比价格仅为三分之一，可以有效地节省开支，为乳业安全保驾护航，亦可出口创汇。
【专利附图】
【附图说明】
[0017]图1本实用新型的试纸条(9)结构平面俯视图
[0018]图2本实用新型的试纸条(9)结构剖面示意图
[0019]图3本实用新型的微孔试剂⑶示意图
[0020]图4是微孔试剂⑶成排的示意图
[0021]图5本实用新型的检测结果判定示意图
[0022]背板I ;样品垫2 ;纤维素膜3 ;吸水垫4 ;带标记的保护膜贴纸5-1 ;T线6 ;C线7 ;保护膜贴纸5-2 ;四环素类单克隆抗体层8-1 ;塑料微孔8-2 ;塑料盖8-3 ;加样刻度线8_4 ；微孔试剂8 ;试纸条9
【具体实施方式】
[0023]为了使本实用新型的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本实用新型进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本实用新型，并不用于限定本实用新型。
[0024]四环素检测试纸条的组装
[0025]1.粘贴:将样品垫⑵、纤维素膜(3)、吸水垫⑷、带标记的保护膜贴纸(5-1)和保护膜贴纸(5-2)参照图2的顺序逐一贴在支持背板(I)上。样品垫(2)与纤维素膜(3)相接，纤维素膜(3)与吸水垫(4)相接，同时在样品垫(2)和吸水垫(4)上分别贴有带标记的保护膜贴纸(5-1)和保护膜贴纸(5-2)，其中样品垫(2)的带标记的保护膜贴纸(5-1)印有“MAX”标记，方便检测使用。纤维素膜(3)上分别标记了控制线C线(7)和检测线T线
(6)。C线(7)标记的是羊抗鼠或者兔抗鼠的二抗，而T线(6)标记的是牛血清白蛋白标记的四环素结合物。
[0026]2.切条:将粘贴好的试纸条(9)大板用切条机进行切割，每个试纸条(9)的宽度为0.8cm，偏差范围为0.78、.82cm，切割好的试纸条(9)储藏在室温下备用。
[0027]3.微孔试剂⑶的组装:采用自动化加样装置定量的将纳米金颗粒标记的高灵敏度四环素类单克隆抗体加到塑料微孔(8-2)中形成四环素类单克隆抗体层(8-1)，置于冻干机冷冻干燥。冷冻干燥的微孔试剂(8)用塑料盖(8-3)盖好，储藏于4-8°C备用，在塑料微孔(8-2)上设有作为加样体积的加样刻度线(8-4)，一般为了方便使用8个微孔试剂(8)组成一排，供检测使用。
[0028]4.试纸条(9)和微孔试剂(8)的组装:将制备好的试纸条(9)和微孔试剂(8)按照1:1的比例密封于包装袋或者包装瓶中，密封好后存放于4-8°C备用。
[0029]四环素检测试纸条的使用
[0030]1.样品的准备:
[0031]将待检测的生鲜乳取样后恢复至室温，样品应无沉淀和杂质，不能太粘稠。现场采集的样本最佳。
[0032]2.试纸条(9)的准备:
[0033]根据样品数量将需要使用的试纸条(9)从冷藏环境中突出后，静置30分钟使之恢复到室温，然后从密封包装中取出相应数量的试纸条(9)和微孔试剂(8)。所有实验操作应在水平的实验台或者相应环境上操作，环境温度无特殊限制。
[0034]3.检测操作:
[0035](I)加样:将准备好的样品用一次性塑料吸管或者微量移液器吸取200μ 1，加入到已经去掉盖的微孔试剂⑶中。注意:一个微孔试剂⑶对应一个试纸条(9)，只能检测一个样品，不能重复使用。
[0036](2)混合:用微量移液器或者一次性塑料吸管上下吸打微孔试剂(8)中的液体使之充分混匀，混匀后的微孔应呈现粉红色或者浅粉色等。
[0037](3)插条:取出试纸条(9)并将带标记的保护膜贴纸(5-1)的一端插入微孔试剂
(8)中。请不要用手指或者其他物体触碰试纸条(9)的中段，即含有检测线T线(6)和控制线C线(7)的纤维素膜(3)段。
[0038](4)计时:插条后开始计时3分钟,观察C线(7)是否出现,如果3min内C线(7)已经出现，即可判读结果；如果C线(7)没有出现，请延长2分钟使液体爬升至C线(7)出现后判读结果。
[0039]4.结果判定:图5
[0040]阴性:如图5第I个所示，C线(7)显色，而T线(6)也显色，且T线(6)颜色较C线(7)深；
[0041]阳性:C线(7)显色，T线(6)颜色与C线(7)颜色相比较:
[0042](I)如果T线(6)颜色较C线(7)浅:如图5第2个所示，则表明样品中黄曲霉毒素Ml的浓度处于0.05 ygL和0.5 ygL之间。按照欧盟标准判断属于阳性，而按照中国和美国标准判断属于阳性。
[0043](2)如果T线(6)不显色，如图5第3个所示，则表明样品中黄曲霉毒素Ml的浓度大于0.5μ gL。按照欧盟、中国和美国标准判断均属于阳性。
[0044]无效:如图5中的第4和5个所示，C线(7)不显示。
[0045]以上所述仅为本实用新型的较佳实施例而已，并不用以限制本实用新型，本实用新型涉及的材料均为已知材料，凡在本实用新型的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种四环素检测试纸条，由微孔试剂(8)和试纸条(9)组成，其特征在于:所述的微孔试剂(8)包括背板(I)，所述的背板(I)上从左至右分别贴有带标记的保护膜贴纸(5-1)、样品垫(2)、纤维素膜(3)、吸水垫(4)和保护膜贴纸(5-2)，所述的纤维素膜(3)上分别设有控制线C线(7)和检测线T线(6)，所述的C线(7)标记的是羊抗鼠或者兔抗鼠的二抗，所述的T线(6)标记的是牛血清白蛋白标记的四环素结合物，所述的微孔试剂⑶内设有四环素类单克隆抗体层(8-1)。
2.根据权利要求1所述的一种四环素检测试纸条，其特征在于:所述的微孔试剂(8)还包括塑料微孔(8-2)，以及盖在塑料微孔(8-2)上的塑料盖(8-3)，所述的塑料微孔(8-2)上设有作为加样体积的加样刻度线(8-4)，所述的四环素类单克隆抗体层(8-1)位于塑料微孔(8-2)底部。
3.根据权利要求2所述的一种四环素检测试纸条，其特征在于:所述的微孔试剂(8)8个组排列在一起组成一排。
4.根据权利要求3所述的一种四环素检测试纸条，其特征在于:所述的试纸条(9)的宽度为0.8cm，偏差范围为0.78?0.82cm。
5.根据权利要求4所述的一种四环素检测试纸条，其特征在于:所述的微孔试剂(8)和试纸条(9)的个数按照1:1的比例密封于包装袋或者包装瓶中，保存在4-8°C温度下。
【文档编号】G01N33/577GK203376326SQ201320541328
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2013年9月2日 优先权日:2013年9月2日
【发明者】杨春江, 张晓燕, 李妍, 袁永欣, 马孝斌 申请人:北京纳百景弈生物科技有限公司