高灵敏度黄曲霉毒素m1检测试纸条的制作方法
【专利摘要】一种高灵敏度黄曲霉毒素M1检测试纸条，由微孔试剂(8)和试纸条(9)组成，其特征在于：所述的微孔试剂(8)包括背板(1)，所述的背板(1)上从左至右分别贴有带标记的保护膜贴纸(5-1)、样品垫(2)、纤维素膜(3)、吸水垫(4)和保护膜贴纸(5-2)，所述的纤维素膜(3)上分别设有控制线C线(7)和检测线T线(6)，所述的C线(7)标记的是羊抗鼠或者兔抗鼠的二抗，所述的T线(6)标记的是黄曲霉毒素M1与蛋白载体的结合物，所述的微孔试剂(8)内装有黄曲霉毒素M1单克隆抗体纳米金颗粒层(8-1)。本实用新型灵敏度高，检测范围广，检测速度快，操作方便。
【专利说明】高灵敏度黄曲霉毒素M1检测试纸条
【技术领域】
[0001]本发明涉及检测试剂领域，具体为一种高灵敏度黄曲霉毒素Ml检测试纸条。
【背景技术】
[0002]黄曲霉毒素(aflatoxin)，是一种有强烈生物毒性的化合物，常由黄曲霉及另外几种霉菌在霉变的谷物中产生，如大米、豆类、花生等，是目前为止最强的致癌物质是迄今为止文献报道毒性最大的化学物质之一。黄曲霉毒素主要包括黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2以及另外两种代谢产物Ml和M2。畜牧业养殖实践中如果奶牛食用了被黄曲霉毒素污染的饲料后，大部分黄曲霉毒素会在奶牛体内代谢为黄曲霉毒素M1，并继续存在在牛乳汁中，继而被人食用而产生危害，尤其是对于以乳汁为主要食物的婴儿危害更大。目前世界各国均对黄曲霉毒素Ml在生鲜乳中的最大残留限量做出了规定，其中欧盟为0.05yg/L，美国和中国为 0.5μ g/L。
[0003]目前黄曲霉毒素Ml的检测主要依靠酶联免疫检测试剂盒方法、荧光测定法、液相色谱方法和液相色谱质谱联用方法等。这些方法检测能力能满足国家限量标准要求，但多数依赖于大型分析仪器如高效液相色谱、液质联用仪和荧光光度计、酶标仪等，主要用于实验室内部检测。而目前我国奶业行业养殖规模化程度不高，多数企业需要从散户或者小规模生产者收集牛奶，因此有必要开发一种适用于现场收集时应用的检测方法及其产品，满足基层奶站和企业的实际检测需求。
【发明内容】
[0004]本申请的目的在于提供一种高灵敏度黄曲霉毒素Ml检测试纸条，以解决目前基层实际应用中快速准确检测生鲜乳中黄曲霉毒素Ml的问题。
[0005]为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案:
[0006]一种高灵敏度黄曲霉毒素Ml检测试纸条，由微孔试剂(8)和试纸条(9)组成，其特征在于:所述的微孔试剂(8)包括背板(I)，所述的背板(I)上从左至右分别贴有带标记的保护膜贴纸(5-1)、样品垫(2)、纤维素膜(3)、吸水垫(4)和保护膜贴纸(5-2)，所述的纤维素膜(3)上分别设有控制线C线(7)和检测线T线(6)，所述的C线(7)标记的是羊抗鼠或者兔抗鼠的二抗，所述的T线(6)标记的是黄曲霉毒素Ml与蛋白载体的偶联物，所述的微孔试剂(8)内装有黄曲霉毒素Ml单克隆抗体纳米金颗粒层(8-1)。
[0007]进一步，所述的微孔试剂(8)还包括塑料微孔(8-2)，以及盖在塑料微孔(8-2)上的塑料盖(8-3)。
[0008]进一步，所述的塑料微孔(8-2)上设有作为加样体积的加样刻度线(8-4)。
[0009]进一步，所述的微孔试剂⑶每排8个，相互之间通过固定胶粘贴在一起。
[0010]进一步，所述的试纸条(9)的宽度为0.8cm，偏差范围为0.78、.82cm。
[0011]进一步，所述的微孔试剂⑶和试纸条(9)的个数按照1:1的比例密封于包装袋或者包装瓶中，保存在4-8°C温度下。[0012]本发明的有益效果为:
[0013]1.灵敏度高，检测范围广。试纸条(9)以黄曲霉毒素Ml高灵敏度单克隆抗体为基础材料研制而成，可以用于检测生鲜乳中的黄曲霉毒素M1，检测限最低可以达到0.05 μ g/L，满足欧盟、美国和中国的黄曲霉毒素Ml限量要求。
[0014]2.检测速度快，操作方便。试纸条(9)实验反应时间仅为3分钟，操作简便，无需特殊培训。
[0015]3.检测结果判定直观，无需特殊仪器。
[0016]4.降低成本，节省费用。由于试纸条(9)应用了高灵敏度的单克隆抗体，单个试纸条(9)研制和生产的成本大为降低，与国外同类型产品相比价格仅为三分之一。
【专利附图】
【附图说明】
[0017]图1本实用新型的试纸条(9)结构平面俯视图
[0018]图2本实用新型的试纸条(9)结构剖面示意图
[0019]图3本实用新型的微孔试剂⑶示意图
[0020]图4是微孔试剂⑶成排的示意图
[0021]图5本实用新型的检测结果判定示意图
[0022]背板I ;样品垫2 ;纤维素膜3 ;吸水垫4 ;带标记的保护膜贴纸5-1 ;T线6 ;C线7 ;保护膜贴纸5-2 ;黄曲霉毒素Ml单克隆抗体纳米金颗粒层8-1 ;塑料微孔8-2 ;塑料盖8_3 ；加样刻度线8-4 ;微孔试剂8 ;试纸条9
【具体实施方式】
[0023]为了使本实用新型的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本实用新型进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本实用新型，并不用于限定本实用新型。
[0024]高灵敏度黄曲霉毒素Ml检测试纸条的组装
[0025]1.粘贴:将样品垫⑵、纤维素膜(3)、吸水垫⑷、带标记的保护膜贴纸(5-1)和保护膜贴纸(5-2)参照图2的顺序逐一贴在支持背板(I)上。样品垫(2)与纤维素膜(3)相接，纤维素膜(3)与吸水垫(4)相接，同时在样品垫(2)和吸水垫(4)上分别贴有带标记的保护膜贴纸(5-1)和保护膜贴纸(5-2)，其中样品垫(2)的带标记的保护膜贴纸(5-1)印有“MAX”标记，方便检测使用。纤维素膜(3)上分别标记了控制线C线(7)和检测线T线
(6)。C线(7)标记的是羊抗鼠或者兔抗鼠的二抗，而T线(6)标记的是牛血清白蛋白标记的黄曲霉毒素Ml结合物。
[0026]2.切条:将粘贴好的试纸条(9)大板用切条机进行切割，每个试纸条(9)的宽度为0.8cm，偏差范围为0.78、.82cm，切割好的试纸条(9)储藏在室温下备用。
[0027]3.微孔试剂(8)的组装:采用自动化加样装置定量的将黄曲霉毒素Ml单克隆抗体纳米金颗粒层(8-1)加到塑料微孔(8-2)中，置于冻干机冷冻干燥。冷冻干燥的微孔试剂(8)用塑料盖(8-3)盖好，储藏于4-8°C备用，在塑料微孔(8-2)上设有作为加样体积的加样刻度线(8-4)，一般为了方便使用8个微孔试剂(8)组成一排，供检测使用。
[0028]4.试纸条(9)和微孔试剂(8)的组装:将制备好的试纸条(9)和微孔试剂(8)按照1:1的比例密封于包装袋或者包装瓶中，密封好后存放于4-8°C备用。
[0029]高灵敏度黄曲霉毒素Ml检测试纸条的使用
[0030]1.样品的准备:
[0031]将待检测的生鲜乳取样后恢复至室温，样品应无沉淀和杂质，不能太粘稠。现场采集的样本最佳。
[0032]2.试纸条(9)的准备:
[0033]根据样品数量将需要使用的试纸条(9)从冷藏环境中突出后，静置30分钟使之恢复到室温，然后从密封包装中取出相应数量的试纸条(9)和微孔试剂(8)。所有实验操作应在水平的实验台或者相应环境上操作，环境温度无特殊限制。
[0034]3.检测操作:
[0035](I)加样:将准备好的样品用一次性塑料吸管或者微量移液器吸取200μ 1，加入到已经去掉盖的微孔试剂⑶中。注意:一个微孔试剂⑶对应一个试纸条(9)，只能检测一个样品，不能重复使用。
[0036](2)混合:用微量移液器或者一次性塑料吸管上下吸打微孔试剂(8)中的液体使之充分混匀，混匀后的微孔应呈现粉红色或者浅粉色等。
[0037](3)插条:取出试纸条(9)并将带标记的保护膜贴纸(5-1)的一端插入微孔试剂
(8)中。请不要用手指或者其他物体触碰试纸条(9)的中段，即含有检测线T线(6)和控制线C线(7)的纤维素膜(3)段。
[0038](4)计时:插条后开始计时3分钟,观察C线(7)是否出现,如果3min内C线(7)已经出现，即可判读结果；如果C线(7)没有出现，请延长2分钟使液体爬升至C线(7)出现后判读结果。
[0039]4.结果判定:图5
[0040]阴性:如图5第I个所示，C线(7)显色，而T线(6)也显色，且T线(6)颜色较C线(7)深；
[0041]阳性:C线(7)显色，T线(6)颜色与C线(7)颜色相比较:
[0042](I)如果T线(6)颜色较C线(7)浅:如图5第2个所示，则表明样品中黄曲霉毒素Ml的浓度处于0.05 ygL和0.5 ygL之间。按照欧盟标准判断属于阳性，而按照中国和美国标准判断属于阳性。
[0043](2)如果T线(6)不显色，如图5第3个所示，则表明样品中黄曲霉毒素Ml的浓度大于0.5μ gL。按照欧盟、中国和美国标准判断均属于阳性。
[0044]无效:第4和5个所示，C线(7)不显示则如图5中。
[0045]以上所述仅为本实用新型的较佳实施例而已，并不用以限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种高灵敏度黄曲霉毒素Ml检测试纸条，由微孔试剂(8)和试纸条(9)组成，其特征在于:所述的微孔试剂(8)包括背板(I)，所述的背板(I)上从左至右分别贴有带标记的保护膜贴纸(5-1)、样品垫(2)、纤维素膜(3)、吸水垫(4)和保护膜贴纸(5-2)，所述的纤维素膜(3)上分别设有控制线C线(7)和检测线T线(6)，所述的C线(7)标记的是羊抗鼠或者兔抗鼠的二抗，所述的T线(6)标记的是黄曲霉毒素Ml与蛋白载体的结合物，所述的微孔试剂(8)内装有黄曲霉毒素Ml单克隆抗体纳米金颗粒层(8-1)。
2.根据权利要求1所述的一种高灵敏度黄曲霉毒素Ml检测试纸条，其特征在于:所述的微孔试剂(8)还包括塑料微孔(8-2)，以及盖在塑料微孔(8-2)上的塑料盖(8-3)。
3.根据权利要求2所述的一种高灵敏度黄曲霉毒素Ml检测试纸条，其特征在于:所述的塑料微孔(8-2)上设有作为加样体积的加样刻度线(8-4)。
4.根据权利要求3所述的一种高灵敏度黄曲霉毒素Ml检测试纸条，其特征在于:所述的微孔试剂(8每排8个。
5.根据权利要求1-4所述的一种高灵敏度黄曲霉毒素Ml检测试纸条，其特征在于:所述的试纸条(9)的宽度为0.8cm，偏差范围为0.78?0.82cm。
6.根据权利要求5所述的一种高灵敏度黄曲霉毒素Ml检测试纸条，其特征在于:所述的微孔试剂(8)和试纸条(9)的个数按照1:1的比例密封于包装袋或者包装瓶中，保存在4-8 °C温度下。
【文档编号】G01N33/577GK203376327SQ201320541329
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2013年9月2日 优先权日:2013年9月2日
【发明者】杨春江, 张晓燕, 李妍, 袁永欣, 马孝斌 申请人:北京纳百景弈生物科技有限公司