一种磁微粒介导的层析检测技术装置及其用途
【专利摘要】本实用新型公开了一种层析检测技术装置及其用途，所述的层析检测技术装置是以固定在固相支撑物平面上的磁微粒作为捕获相的检测技术，由磁微粒、固相支撑物、分散膜、显色相和含有待检物的液体待检相组成，其中所述的磁微粒表面含有能够与待检物形成特异性结合的磁微粒标记物并固定在固相支撑物上，可用于血型等多种分析检测技术产品的开发，具有良好的适用价值和市场前景。
【专利说明】一种磁微粒介导的层析检测技术装置及其用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种磁微粒介导的层析检测技术装置及其用途。
【背景技术】
[0002]免疫学检测技术是应用免疫学原理设计的测定抗原、抗体、免疫细胞及化学成分等的实验手段，广泛用于来源于人体和动物体可进行疾病诊断和健康检测的样品以及用于环境、药物分析、食品和工业分析的样品。常用的有免疫浊度技术、固相酶免疫测定技术、化学发光检测技术、免疫荧光标记技术、流式细胞术、胶体金技术等。
[0003]免疫浊度技术，也称免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，产生一定大小的复合物，形成光的折射或吸收，测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位，用于定量检测，但检测灵敏度低，不适合于微量检测。固相酶免疫测定技术基于抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体保持其免疫学活性，抗原或抗体的酶结合物既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，具有灵敏度高、线性响应范围宽和易于实现自动化等显著优点。但检测反应时间长限制了其使用。免疫化学发光检测技术是一种高灵敏的微量及痕量分析技术，具有操作方便、灵敏度高、线性响应范围宽和易于实现自动化等显著优点，广泛地应用于环境、临床、药物分析、食品和工业分析中，也是基于抗原或抗体的固相分离手段及抗原或抗体的发光试剂标记技术。但检测反应时间长及对检测设备的要求高也影响其使用。免疫荧光标记技术、流式细胞术、胶体金技术也是常用的检测技术被广泛使用，但均有其相应的不足。
[0004]高灵敏度、快速、便捷是目前临床免疫检测技术产品的发展方向之一，但现有的检测技术都无法以含有被捡物的材料作为检测指示剂直接进行检测。因此，开发一种能够实现既具有高灵敏度、快速等特点，同时又能够直接以含有被捡物的材料作为检测指示的检测技术，不仅使用方便、减少浪费，同时也可显著提高工作效率，在检测和分析、分离的诸多领域具有重要的实用意义。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种具有灵敏度高、检测速度快的免疫检测技术装置，特别是以磁微粒作为捕获相的免疫层析检测技术装置。
[0006]为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案。
[0007]—种以磁微粒介导的层析检测技术装置，所述的检测技术装置是以固定在固相支撑物平面上的磁微粒作为捕获相的检测技术，由磁微粒、固相支撑物、分散膜、显色相和含有待检物的液体待检相组成，其中所述的磁微粒表面含有能够与待检物形成特异性结合的磁微粒标记物并固定在固相支撑物上。所述的的磁微粒标记物以能够与待检物形成特异性结合的抗体或抗原最为常用。
[0008]所述的固相支撑物具有如下特征:1)所述的固相支撑物为固相支撑板状结构时，其材料为含有能够吸附磁微粒的磁性材料；2)所述的固相支撑物为膜状结构时，其材料为能够与磁微粒结合并固定的膜性材料。磁性材料在固相支撑板状结构上的分布可以为均匀分布状态，也可以是按照具体要求的局部特征性分布，如线条状或斑点状。膜性材料常用的有硝酸纤维膜。
[0009]所述的分散膜包括玻璃纤维膜、聚酯纤维膜、硝酸纤维膜、木质纤维类膜结构。木质纤维类膜结构包括各种类型的滤纸和纸质滤膜。
[0010]所述的显色相的显色指示剂包括胶体金、荧光物质、血细胞、体细胞和培养细胞。
[0011]所述的含有待检物的液相包括来源于人体和动物血液、体液和排泄物以及用于环境、药物分析、食品和工业分析的样品。
[0012]所述的检测技术包括以下一种或多种特征:
[0013]I)本技术装置还包含有用于标记显色指示剂的能够与待检物形成特异性结合的检测物，所述的检测物以能够与待检物形成特异性结合的抗体或抗原最为常用；2)用磁微粒标记物标记磁微粒，常用的磁微粒标记物为抗体或抗原；3)用检测物标记显色指示剂；
4)以局部装有磁性材料板状结构作为固相支撑物，通过磁性吸附固定所述的标记磁微粒到固相支撑物上的所述的局部磁性材料位置，有线条状、斑点状；5)以均匀分布磁性材料板状结构作为固相支撑物，将标记的磁微粒包被到固相支撑物的特定位置上，多采用划线或喷涂等方式；6)通过生物素-亲和素连接系统将标记的磁微粒连接固定到所述的固相支撑模性材料上，通常采用将亲和素或链亲和素包被到硝酸纤维膜上，将磁微粒标记物或磁微粒用生物素标记，然后与亲和素连接固定；7)本技术装置还包含有支撑底片，通常是在支撑底片粘贴有固相支撑物和分散膜；8)从下而上依次粘贴吸附固定有标记磁微粒的固相支撑物、分散膜；9)从下而上依次粘贴支撑底片、吸附固定有标记磁微粒的固相支撑物、分散膜；
10)从下而上依次粘贴支撑底片、连接固定有标记磁微粒的固相支撑膜、分散膜；11)制备待检物与显色指示剂为一体并能够通过磁微粒标记物直接特异性结合磁微粒的液体显色相，然后将液体显色相置于分散膜上，通过层析扩散流经标记磁微粒，直接特异性地通过磁微粒标记物与磁微粒结合并显色，这种情况通常用于检测细胞表面抗原且同时以细胞作为显色指示剂的检测方法；12)用检测物标记显色指示剂，将含有待检物的液体与标记的显色指示剂混合，通过层析扩散流经标记磁微粒，标记显色指示剂通过待检物间接特异性地与磁微粒标记物结合，进而使磁微粒显色；13)所述的磁微粒为通用的磁微粒及其衍生磁性微粒结构；14)在固相支撑物的前端还粘贴有分散膜，将所述的待检测液相滴加到前端分散膜上。
[0014]间接检测通常以作为检测物的能够通过待检物与磁微粒标记物形成特异性结合的抗体或抗原，检测对应的抗原或抗体。
[0015]磁性微粒，即磁微粒，是指磁性纳米粒子与无机或有机分子结合形成的可均匀分散于一定基液中具有高度稳定性的胶态复合材料，是一种具有磁性和特殊结构的一种新型高分子聚合材料。具有超顺磁性、较高的比表面积、可修饰功能基团等特性。磁微粒的核心组成是纳米磁性粒子(包括铁的氧化物、金属铁、钴、镍及正铁酸盐等)，也称磁流体。将磁流体与其它性质材料的基质相互作用，便形成磁性复合微粒(简称磁性微粒、磁性微球、磁珠等)。磁微粒分类方法很多，按其结构不同，可分为简单结构、核壳结构、夹心结构；磁性微粒的核心组成一磁流体为纳米无机材料，按照与其复合的材料组成不同，可分为无机/有机磁性微粒和无机/无机磁性微粒。其无机/有机磁性微粒是通过生物或合成高分子物质及其它有机试剂对磁流体进行包覆或修饰而得到，如葡聚糖磁性微粒磁性脂质体微粒等；而无机/无机磁性微粒则是通过磁流体与金、二氧化硅、量子点等无机物复合制得，如磁性二氧化硅微粒、金磁微粒、载有量子点的磁性微粒等。
[0016]所述的检测技术装置在多种检测技术产品开发中的应用。可用于目前常用的纸层析检测产品的开发和大颗粒的如细胞类直接检测产品的开发。
[0017]人群中最常见的血型有ABO血型系统和Rh血型系统。都是根据红细胞表面有无特异性抗原(凝集原)来划分的血液类型系统。ABO血型系统是根据凝集原A、B的分布把血液分为Α、Β、ΑΒ、0四型。红细胞上只有凝集原A的为A型血，其血清中有抗B凝集素；红细胞上只有凝集原B的为B型血，其血清中有抗A的凝集素；红细胞上A、B两种凝集原都有的为AB型血，其血清中无抗A、抗B凝集素；红细胞上A、B两种凝集原皆无者为O型，其血清中抗A、抗B凝集素皆有。Rh血型系统是人体血液红细胞上有RhD抗原(即Rh抗原的D亚型，又称Rh抗原)的称为Rh阳性，没有RhD抗原的称为Rh阴性。Rh阳性血型在我国汉族及大多数民族人中约占99.7%，欧美白种人中，Rh阴性血型人约占15%。
[0018]目前临床血型检测技术有I)血凝试验即抗体和红细胞在液体介质中发生肉眼可见的凝集反应，有玻片法、试管法、全自动微板法；微柱凝胶试验采用凝胶技术提高试验的灵敏度及特异性；流式细胞技术是用荧光素标记人源抗2A、抗2B以及相应的亚型抗体，进行细胞分离分类；还有酶联免疫吸附试验等。但这些技术都需要专业检验机构进行，无法进入家庭使用，因此，开发可进入家庭使用的检测技术不仅易于普及同时方便使用，具有重要的使用价值。
[0019]利用所述的检测技术制备的血型检测技术装置，其特征在于:1)所述的磁微粒标记物为抗红细胞A凝集原抗体、抗红细胞B凝集原抗体、抗红细胞RhD凝集原抗体；2)所述的固相支撑物为含有能够吸附标记磁微粒的磁性材料；3)所述的分散膜采用玻璃纤维膜、聚酯纤维膜或木质纤维类膜结构；4)所述的显色指示剂为红细胞，显色相和含待检物的待检相为含有红细胞的血液。
[0020]ABO血型系统的血型抗原是红细胞膜上的糖鞘脂，其免疫活性特异性的分子基础是由糖链的糖基组成。在ABO抗原的生物合成中三个等位基因ABO及H控制着A、B抗原的形成。ABO抗原的前体是H抗原汸基因编码一种叫N-乙酰半乳糖转移酶的蛋白质(A酶)，能把H抗原转化成A抗原；B基因编码一种叫半乳糖转移酶的蛋白质(B酶)，能把H抗原转化成B抗原；0基因不能编码有活性的酶，而只有H抗原。其形成的抗体有抗1A、1B抗体和抗2A、2B抗体等。
[0021]所述的血型检测技术装置，其特征在于:所述的检测技术包括以下一种或多种特征:1)用所述的磁微粒标记物标记磁微粒；2)制备含有能够吸附标记磁微粒的磁性结构的固相支撑物；3)将标记的磁微粒包被到固相支撑物的特定位置上；4)从下而上依次粘贴吸附固定有标记磁微粒的固相支撑物、分散膜；5)从下而上依次粘贴支撑底片、有吸附固定标记磁微粒的固相支撑物、分散膜；6)在固相支撑物的前端还粘贴有分散膜，将所述的血液滴加到前端分散膜上；7)滴加缓冲液使所述的血液通过侧流扩散流经标记磁微粒，特异性结合并显色。
[0022]所述的血型检测技术装置在ABO血型和Rh血型检测产品开发中的应用。可以开发试剂条式的检测试剂或斑点式的检测试剂及其试剂盒等，可同时满足医疗机构和家庭使用。
[0023]有益效果
[0024]I)本发明创造性地设计了一种以磁微粒作为捕获相的层析检测技术装置，可以以细胞类的含有待检物的检测相直接作为显色相和显色指示剂用于临床检测，提高了检测个性化的可控程度，提高了检测效率，可以直接进入家庭使用。
[0025]2)本发明以磁微粒作为捕获相的层析检测技术，可补充现有的纸层析检测技术的一些不足，提闻检测效率。
[0026]3)本发明创造性地设计的血型检测技术装置，可直接以红细胞同时作为待检相和显色相，实现快速方便的血型检测，同时满足医疗机构和家庭检测的需求。
[0027]因此，本发明技术对改善现有免疫检测技术具有重要的意义和良好的应用前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0028]图1为本发明以待检物与显色指示剂为一体的直接检测技术装置的基本结构示意图。
[0029]图2为本发明以检测物与显色指示剂为一体的间接检测技术装置的基本结构示意图。
【具体实施方式】
[0030]下面结合附图和实施例对本发明进行详细的描述。
[0031]如图1所示，本发明以待检物与显色指示剂为一体的直接检测技术装置，包括磁微粒1、固相支撑物2、分散膜3、显色相4、待检物5、支撑底片6和吸水膜垫7。
[0032]磁微粒I表面含有能够与待检物形成特异性结合的作为磁微粒标记物的抗原或抗体，磁微粒I固定在固相支撑物2上，显色相4为待检物5和显色指示剂为一体的液相。支撑底片6上依次粘贴有分散膜3、固相支撑物2、吸水膜垫7，固体支撑物2用分散膜3粘贴覆盖，以保证待检液相经分散膜3流经磁微粒I进行反应，覆盖用分散膜为白色且通透性良好的玻璃纤维膜或聚酯纤维膜。检测时将含有待检物的显色相4滴加到前端分散膜3上，向前流动至用磁微粒标记物标记的磁微粒1，通过待检物5与磁微粒标记物结合，形成显色指示剂-待检物-磁微粒标记物-磁微粒复合物并被固定，随着显色指示剂结合量的不断聚集，使固定磁微粒I的部位显色。
[0033]如图2所示，本发明以检测物与显色指示剂为一体的间接检测技术装置，包括磁微粒1、固相支撑物2、分散膜3、显色相4、含有待检物的液体待检相5、支撑底片6和吸水膜垫7。
[0034]磁微粒I表面含有能够与待检物形成特异性结合的作为磁微粒标记物的抗原或抗体，磁微粒I固定在固相支撑物2上，显色相4包含有用能通过待检物与磁微粒标记物形成特异性结合的检测物标记的显色指示剂。支撑底片6上依次粘贴有分散膜3、显色相4、固相支撑物2、吸水膜垫7，固体支撑物2用分散膜3粘贴覆盖，以保证待检液相经分散膜3流经磁微粒I进行反应，覆盖用分散膜为白色且通透性良好的玻璃纤维膜或聚酯纤维膜。检测时将含有待检物的液体待检相5滴加到前端分散膜3上，液体流经显色相4，与在显色指示剂上标记的检测物结合，形成显色指示剂-检测物-待检物复合物，向前流动至用磁微粒标记物标记的磁微粒I,与磁微粒标记物结合,形成显色指示剂-检测物-待检物-磁微粒标记物-磁微粒复合物并被固定，随着显色指示剂结合量的不断聚集，使固定磁微粒I的部位显色。
[0035]实施例1、本发明直接检测技术装置的制备:
[0036]实验材料:PVC板、磁微粒、磁性板、玻璃纤维膜、吸水膜垫、胶体金溶液、羊抗鼠多克隆抗体、鼠I gG、碳酸钾、牛血清白蛋白、PBS盐溶液。
[0037]实验方法:
[0038]1、用待测物标记显色指示剂:配置1%碳酸钾溶液和10%牛血清白蛋白溶液。取胶体金溶液，分成5个组，分别用1%碳酸钾溶液调pH至8.0,分别加入鼠IgG 0.01,0.05,
0.3、1.5,5.0、10ug/ml，混匀，静置30分钟，离心分离，弃上清，沉淀用PBS盐溶液悬浮，加10%牛血清白蛋白溶液至终浓度1%，混匀，静置30分钟，离心分离，弃上清，用PBS盐溶液洗涤I次，沉淀用含有5%蔗糖的PBS盐溶液悬浮，4°C保存，备用。
[0039]2、用磁微粒标记物标记磁微粒:将磁微粒Na2C03/NaHC03 pH9.6缓冲液稀释，加羊抗鼠多克隆抗体10ug/ml，4°C搅伴过夜，磁分离器分离磁微粒，用pH7.4 PBS盐溶液反复洗涤3次，加10%牛血清白蛋白溶液封闭，4°C搅伴过夜，磁分离器分离磁微粒，用pH7.4 PBS盐溶液洗3次，磁微粒稳定剂(0.lmg/ml硫柳汞和1.0mg/ml牛血清白蛋白的PBS盐溶液)重悬，使磁微粒浓度为5mg/ml，4°C保存，备用。
[0040]3、直接检测技术装置的制备:取PVC板，依次粘贴玻璃纤维膜、磁性板和吸水膜垫，在磁性板上线状喷涂标记磁微粒，用玻璃纤维膜粘贴覆盖，室温干燥，备用。
[0041]4、实验检测:将标记的胶体金溶液滴加到前端玻璃纤维膜上，再滴加PBS盐溶液，使胶体金不断流经线状喷涂标记磁微粒的部位，观察10分钟并记录结合情况。
[0042]实验结果:结果当将不同浓度的鼠IgG 0.01、0.05、0.3、1.5、5.0、10ug/ml的胶体金溶液滴加到检测装置上时，在线状喷涂标记磁微粒的部位可见胶体金红色结合聚集线，并且随着鼠IgG量的增加显色强度增加，5.0ug/ml后显色增加未见明显增强，表明结合已达到饱和。
[0043]实施例2、本发明间接检测技术装置的制备:
[0044]实验材料:PVC板、磁微粒、磁性板、玻璃纤维膜、聚酯纤维膜、吸水膜垫、胶体金溶液、抗人纤维蛋白原多克隆抗体、抗人纤维蛋白原单克隆抗体、碳酸钾、牛血清白蛋白、PBS盐溶液、人纤维蛋白原。
[0045]实验方法:
[0046]1、用待测物标记显色指示剂:配置1%碳酸钾溶液和10%牛血清白蛋白溶液。取胶体金溶液，用1%碳酸钾溶液调pH至8.3，加入抗人纤维蛋白原单克隆抗体10ug/ml,混勻，静置30分钟，离心分离，弃上清，沉淀用PBS盐溶液悬浮，加10%牛血清白蛋白溶液至终浓度1%，混匀，静置30分钟，离心分离，弃上清，用PBS盐溶液洗涤I次，沉淀用含有5%蔗糖的PBS盐溶液悬浮，喷涂至聚酯纤维膜，37°C干燥，备用，即为标记胶体金膜。
[0047]2、用磁微粒标记物标记磁微粒:将磁微粒Na2C03/NaHC03 pH9.6缓冲液稀释，力口羊抗人纤维蛋白原多克隆抗体10ug/ml，4°C搅伴过夜，磁分离器分离磁微粒，用pH7.4 PBS盐溶液反复洗涤3次，加10%牛血清白蛋白溶液封闭，4°C搅伴过夜，磁分离器分离磁微粒，用ρΗ7.4 PBS盐溶液洗3次，磁微粒稳定剂(0.lmg/ml硫柳汞和1.0mg/ml牛血清白蛋白的PBS盐溶液)重悬，使磁微粒浓度为5mg/ml，4°C保存，备用。
[0048]3、直接检测技术装置的制备:取PVC板，依次粘贴玻璃纤维膜、标记胶体金膜、磁性板和吸水膜垫，在磁性板上线状喷涂标记磁微粒，用玻璃纤维膜粘贴覆盖，室温干燥，备用。
[0049]4、实验检测:配置浓度为0.01,0.05,0.1,0.3,0.7ug/ml的人纤维蛋白原溶液，分
布滴加到玻璃纤维膜上，再滴加PBS盐溶液，使人纤维蛋白原溶液流经标记胶体金膜，与标记胶体金混合，并不断流经喷涂线状标记磁微粒的部位，观察10分钟并记录结合情况。
[0050]实验结果:结果当将不同浓度的人纤维蛋白原溶液0.01,0.05,0.1,0.3,0.7ug/ml滴加到检测装置上时，在线状喷涂标记磁微粒的部位可见胶体金红色结合聚集线，并且随着人纤维蛋白原浓度的增加显色强度增加。
[0051]实施例3、本发明A型血型检测技术装置的制备:
[0052]实验材料:PVC板、磁微粒、磁性板、玻璃纤维膜、吸水膜垫、胶体金溶液、抗人红细胞A凝集原单克隆抗体、人抗凝血液、牛血清白蛋白、PBS盐溶液。
[0053]实验方法:
[0054]1、用磁微粒标记物标记磁微粒:将磁微粒Na2C03/NaHC03 pH9.6缓冲液稀释，加抗人红细胞A凝集原单克隆抗体10ug/ml,4°C搅伴过夜,磁分离器分离磁微粒,用pH7.4 PBS盐溶液反复洗涤3次，加10%牛血清白蛋白溶液封闭，4°C搅伴过夜，磁分离器分离磁微粒，用pH7.4 PBS盐溶液洗3次，磁微粒稳定剂(0.lmg/ml硫柳汞和1.0mg/ml牛血清白蛋白的PBS盐溶液)重悬，使磁微粒浓度为5mg/ml，4°C保存，备用。
[0055]2、A型血型检测技术装置:取5mm宽PVC板，在中间位置粘贴Imm宽磁性板，滴加标记磁微粒混悬液并吸附固定标记磁微粒至磁性板。取PVC板，依次粘贴玻璃纤维膜、吸附固定有标记磁微粒磁性板的PVC板和吸水膜垫。将制备的检测板用玻璃纤维膜粘贴覆盖，室温干燥，备用。
[0056]3、实验检测:将人抗凝血液滴加到玻璃纤维膜上，再滴加PBS盐溶液，使血细胞不断流经吸附固定有标记磁微粒磁性板的部位，观察10分钟并记录结合情况。
[0057]实验结果:取Α、Β、0、ΑΒ四种血型的血液，结果A和AB型血液呈明显显色反应，结果B和O型血液无显色，说明是对红细胞A凝集原的特异性反应。
[0058]实施例4、本发明B型血型检测技术装置的制备:
[0059]实验材料:PVC板、磁微粒、磁性板、玻璃纤维膜、吸水膜垫、胶体金溶液、抗人红细胞B凝集原单克隆抗体、人抗凝血液、牛血清白蛋白、PBS盐溶液。
[0060]实验方法:
[0061]1、用磁微粒标记物标记磁微粒:将磁微粒Na2C03/NaHC03 pH9.6缓冲液稀释，加抗人红细胞B凝集原单克隆抗体10ug/ml,4°C搅伴过夜,磁分离器分离磁微粒,用pH7.4 PBS盐溶液反复洗涤3次，加10%牛血清白蛋白溶液封闭，4°C搅伴过夜，磁分离器分离磁微粒，用pH7.4 PBS盐溶液洗3次，磁微粒稳定剂(0.lmg/ml硫柳汞和1.0mg/ml牛血清白蛋白的PBS盐溶液)重悬，使磁微粒浓度为5mg/ml，4°C保存，备用。
[0062]2、B型血型检测技术装置的制备:取5mm宽PVC板,在中间位置粘贴Imm宽磁性板，滴加标记磁微粒混悬液并吸附固定标记磁微粒至磁性板。取PVC板，依次粘贴玻璃纤维膜、吸附固定有标记磁微粒磁性板的PVC板和吸水膜垫。将制备的检测板用玻璃纤维膜粘贴覆
盖，室温干燥，备用。
[0063]3、实验检测:将人抗凝血液滴加到玻璃纤维膜上，再滴加PBS盐溶液，使血细胞不断流经吸附固定有标记磁微粒磁性板的部位，观察10分钟并记录结合情况。
[0064]实验结果:取Α、Β、0、ΑΒ四种血型的血液,结果B和AB型血液呈明显显色反应,结果A和O型血液无显色，说明是对红细胞B凝集原的特异性反应。
[0065]实施例5、本发明Rh型血型检测技术装置的制备:
[0066]实验材料:PVC板、磁微粒、磁性板、玻璃纤维膜、吸水膜垫、胶体金溶液、抗人红细胞RhD凝集原单克隆抗体、人抗凝血液、牛血清白蛋白、PBS盐溶液。
[0067]实验方法:
[0068]1、用磁微粒标记物标记磁微粒:将磁微粒Na2C03/NaHC03 pH9.6缓冲液稀释，力口抗人红细胞RhD凝集原单克隆抗体10ug/ml,4°C搅伴过夜,磁分离器分离磁微粒,用pH7.4PBS盐溶液反复洗涤3次，加10%牛血清白蛋白溶液封闭，4°C搅伴过夜，磁分离器分离磁微粒，用pH7.4 PBS盐溶液洗3次，磁微粒稳定剂(0.lmg/ml硫柳汞和1.0mg/ml牛血清白蛋白的PBS盐溶液)重悬，使磁微粒浓度为5mg/ml，4°C保存，备用。
[0069]2、Rh型血型检测技术装置的制备:取5mm宽PVC板,在中间位置粘贴Imm宽磁性板，滴加标记磁微粒混悬液并吸附固定标记磁微粒至磁性板。取PVC板，依次粘贴玻璃纤维膜、吸附固定有标记磁微粒磁性板的PVC板和吸水膜垫。将制备的检测板用玻璃纤维膜粘
贴覆盖，室温干燥，备用。
[0070]3、实验检测:将人抗凝血液滴加到玻璃纤维膜上，再滴加PBS盐溶液，使血细胞不断流经吸附固定有标记磁微粒磁性板的部位，观察10分钟并记录结合情况。
[0071]实验结果:取Rh阳性和Rh阴性血型的血液，结果Rh阳性型血液呈明显显色反应，结果Rh阴性型血液无显色，说明是对红细胞RhD凝集原的特异性反应。
[0072]实施例6、本发明荧光检测技术装置的制备:
[0073]实验材料:PVC板、磁微粒、磁性板、玻璃纤维膜、吸水膜垫、异硫氰酸荧光素(FITC)、羊抗鼠多克隆抗体、鼠IgG、牛血清白蛋白、PBS盐溶液、DMSO,碳酸盐缓冲液、Sephadex G25柱、突光检测仪。
[0074]实验方法:
[0075]1、用待测物标记荧光指示剂:将纯化的鼠IgG对pH 9?9.5碳酸盐缓冲液透析过夜，分成5个组，分别用碳酸盐缓冲液配置鼠IgG 0.01,0.05,0.3、1.5,5.0UOug/ml,取适量FITC，加入二甲亚砜(DMSO)，使终浓度为Img FITC/lml DMSO。将FITC-DMS0溶液逐滴加入抗体溶液中，磁力搅拌器室温下避光搅拌2小时，用Sephadex G25柱除去游离荧光素，收集PBS洗脱第一个荧光素结合蛋白峰，4°C保存，备用。
[0076]2、用磁微粒标记物标记磁微粒:将磁微粒Na2C03/NaHC03 pH9.6缓冲液稀释，加羊抗鼠多克隆抗体10ug/ml，4°C搅伴过夜，磁分离器分离磁微粒，用pH7.4 PBS盐溶液反复洗涤3次，加10%牛血清白蛋白溶液封闭，4°C搅伴过夜，磁分离器分离磁微粒，用pH7.4 PBS盐溶液洗3次，磁微粒稳定剂(0.lmg/ml硫柳汞和1.0mg/ml牛血清白蛋白的PBS盐溶液)重悬，使磁微粒浓度为5mg/ml，4°C保存，备用。
[0077]3、直接检测技术装置的制备:取PVC板，依次粘贴玻璃纤维膜、磁性板和吸水膜垫，在磁性板上线状喷涂标记磁微粒，用玻璃纤维膜粘贴覆盖，室温干燥，备用。
[0078]4、实验检测:将用待测物标记的荧光指示剂溶液滴加到前端玻璃纤维膜上，再滴加PBS盐溶液，使荧光指示剂不断流经线状喷涂标记磁微粒的部位，观察10分钟并记录结合情况。
[0079]实验结果:用荧光检测仪检测，结果当将不同浓度的鼠IgG 0.01,0.05,0.3,
1.5,5.0U0ug/ml的荧光指示剂溶液滴加到检测装置上时，在线状喷涂标记磁微粒的部位可检测到荧光信号，并且随着鼠IgG量的增加发光强度增加，未见明显的饱和状态。
【权利要求】
1.一种层析检测技术装置，其特征在于:所述的检测技术装置是以固定在固相支撑物平面上的磁微粒作为捕获相的检测技术，由磁微粒、固相支撑物、分散膜、显色相和含有待检物的液体待检相组成，其中所述的磁微粒表面含有能够与待检物形成特异性结合的磁微粒标记物并固定在固相支撑物上。
2.根据权利要求1所述的检测技术装置，其特征在于: 1)所述的固相支撑物为固相支撑板状结构时，其材料为含有能够吸附磁微粒的磁性材料； 2)所述的固相支撑物为膜状结构时，其材料为能够与磁微粒结合并固定的膜性材料。
3.根据权利要求1所述的检测技术装置，其特征在于:所述的分散膜包括玻璃纤维膜、聚酯纤维膜、硝酸纤维膜、木质纤维类膜结构。
4.根据权利要求1所述的检测技术装置，其特征在于:所述的显色相的显色指示剂包括胶体金、荧光物质、血细胞、体细胞和培养细胞。
5.根据权利要求1所述的检测技术装置，其特征在于:所述的含有待检物的液体待检相包括来源于人体和动物血液、体液和排泄物以及用于环境、药物分析、食品和工业分析的样品。
6.根据权利要求1-5任一所述的检测技术装置，其特征在于:所述的检测技术装置包括以下一种或多种特征: 1)本技术装置还包含有用于标记显色指示剂的能够与待检物形成特异性结合的检测物； 2)用磁微粒标记物标记磁微粒； 3)用检测物标记显色指示剂； 4)以局部装有磁性材料板状结构作为固相支撑物，通过磁性吸附固定所述的标记磁微粒到固相支撑物上的所述的局部磁性材料位置，有线条状、斑点状； 5)以均匀分布磁性材料板状结构作为固相支撑物，将标记的磁微粒包被到固相支撑物的特定位置上； 6)通过生物素-亲和素连接系统将标记的磁微粒连接固定到所述的固相支撑模性材料上； 7)本技术还包含有有支撑底片； 8)从下而上依次粘贴吸附固定有标记磁微粒的固相支撑物、分散膜； 9)从下而上依次粘贴支撑底片、吸附固定有标记磁微粒的固相支撑物、分散膜； 10)从下而上依次粘贴支撑底片、连接固定有标记磁微粒的固相支撑膜、分散膜； 11)制备待检物与显色指示剂为一体并能够通过磁微粒标记物直接特异性结合磁微粒的液体显色相，然后将液体显色相置于分散膜上，通过层析扩散流经标记磁微粒，直接特异性地通过磁微粒标记物 与磁微粒结合并显色； 12)用检测物标记显色指示剂，将含有待检物的液体与标记的显色指示剂混合，通过层析扩散流经标记磁微粒，标记显色指示剂通过待检物间接特异性地与磁微粒标记物结合，进而使磁微粒显色； 13)所述的磁微粒为通用的磁微粒及其衍生磁性微粒结构； 14)在固相支撑物的前端还粘贴有分散膜，将所述的待检测液相滴加到前端分散膜上。
7.权利要求1-6任一所述的检测技术装置在多种检测技术产品开发中的应用。
8.利用权利要求1-7任一所述的检测技术制备的血型检测技术装置，其特征在于: O所述的磁微粒标记物为抗红细胞A凝集原抗体、抗红细胞B凝集原抗体、抗红细胞RhD凝集原抗体； 2)所述的固相支撑物为含有能够吸附标记磁微粒的磁性材料； 3)所述的分散膜采用玻璃纤维膜、聚酯纤维膜或木质纤维类膜结构； 4)所述的显色指示剂为红细胞，显色相和含待检物的待检相为含有红细胞的血液。
9.根据权利要求8所述的血型检测技术装置，其特征在于:所述的检测技术装置包括以下一种或多种特征: 1)用所述的磁微粒标记物标记磁微粒； 2)制备含有能够吸附标记磁微粒的磁性结构的固相支撑物； 3)将标记的磁微粒包被到固相支撑物的特定位置上； 4)从下而上依次粘贴吸附固定有标记磁微粒的固相支撑物、分散膜；5)从下而上依次粘贴支撑底片、有吸附固定标记磁微粒的固相支撑物、分散膜； 6)在固相支撑物的前端还粘贴有分散膜，将所述的血液滴加到前端分散膜上； 7)滴加缓冲液使所述的血液`通过侧流扩散流经标记磁微粒，特异性结合并显色。
10.权利要求8或9所述的血型检测技术装置在ABO血型和Rh血型检测产品开发中的应用。
【文档编号】G01N33/80GK203535056SQ201320618456
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2013年10月9日 优先权日:2013年10月9日
【发明者】刘凤鸣 申请人:北京康华源科技发展有限公司