用于苏木精-伊红染色的方法和成分的制作方法

用于苏木精-伊红染色的方法和成分的制作方法
【专利摘要】本发明提供当用于染色方案(protocol)、诸如苏木精-伊红染色方案的某些点时有益于染色方案的特定成分的溶液。这些特定溶液的配方(fromulation)使得该溶液的带出不产生不利影响，或优选地稳定或有利地改性与该溶液进行接触的染色试剂溶液。在本发明的某些实施例中，溶液进行缓冲，以保持特定pH，使得当诸如带入到苏木精中的带出将不显著影响下一染色试剂的pH。
【专利说明】用于苏木精-伊红染色的方法和成分 相关夺叉申请
[0001] 本发明主张2012年1月26日申请的美国临时专利申请No. 61/591，181的优先权， 其全文通过引用而包含于此。

【背景技术】
[0002] 苏木精-伊红（"H&E"）染色技术是组织样本病理学可视化的最常用的组织学技 术。一般的H&E染色系统由包括错基苏木精（aluminum based hematoxylin)、伊红、分化液 以及上蓝剂的溶液构成。苏木精是天然染料，当与铝离子络合时生成正电荷分子，该正电荷 分结合到脱氧核糖核酸上，以引起细胞核紫色着色。分化液通常是弱酸性溶液，其通过从组 织和载玻片中去除过量的背景染色来锐化染色载玻片的对比度。上蓝剂是一种PH呈碱性 的溶液，该溶液被施加到染色样本时修饰结合的苏木精的结构，以引起鲜艳的蓝色/紫色 着色。伊红是负电荷染料，其结合到细胞质和结缔组织中的正电荷蛋白质，以引起与细胞核 的蓝色/或紫色着色截然不同的粉红色/橙色着色。
[0003] H&E染色通常以"批量"方式进行，其中自动染色机通常包含一系列染色试剂容器 并使用将载玻片/搁物架（rack)从一个容器连续移动到另一个的机械臂。通常，搁物架或 保持器能够运载20-30个载玻片，但是，一些染色器械包含搁物架，每个搁物架保持更少或 更多数量的载玻片，并且在至少一个染色机情况下，多个搁物架可以同时放置在染色器皿 上。控制自动染色机的软件允许操作者对每个步骤的持续时间以及步骤的次序编程。虽然 染色的批量方式是简单、经济并且相对快速，但是该技术具有一些缺点。
[0004] 将载有载玻片的搁物架从一个容器运载到下一个容器的移动导致染色试剂或水 的带出（carry-over)。由于染色试剂或水附着到载玻片、样品、载玻片搁物架等上，发生带 出。因为带出可能以几种方式影响下游染色试剂的功能，所以不希望发生带出。带出会稀 释溶液内的染料或功能试剂的浓度。带出和稀释液能通过改变溶剂的特性并且由此影响溶 剂的诸如PH和离子强度的参数而影响染色试剂的功能。最后，带出可能将污染物引入到染 色试剂中。通过这些机器操作时，带出对染色系统的性能、功能、稳定性、可预见性以及能力 (capacity)产生不利影响。虽然一次带出可能导致这样的不利影响，但是，在多重染色试 验（multiple staining runs)过程中，带出的不利影响尤其成为问题，因为不利影响由于 重复的带出的累计影响而增强或放大。
[0005] 由于带出的不利影响，当前染色系统中的试剂的能力或使用寿命非常不可预测 的。经常在基于过去的经验而预定的使用量后改变试剂，或一旦试剂开始出现失效征兆或 到达失效点时就更换试剂。因此，当前系统的溶液经常以不同速率、即以不同时间间隔改 变。这增加了复杂性和低效率，因为染色频繁地停止，以改变一种或少于所有种类的溶液。 另一方面，如果一次改变所有溶液，则由于抛弃一些仍然还具有可用的能力来处理额外的 载玻片的溶液，因此浪费金钱。
[0006] 一般尝试解决带出的不利结果已经涉及到频繁地定期或乃至于为每个试样使用 新的溶液更换染色试剂。例如，如美国专利申请No. 7, 468, 161和8, 048, 373中所述。另 夕卜，已经对个别化学试剂（苏木精、伊红、分化剂（differentiator)和上蓝缓冲剂（bluing buffer))进行了改进，这可以延迟一些带出的影响。在至少一个例子中，已经尝试消除由于 仪器（Dako CoverStainer)的机械设计而引起的带出影响。但是，由于带出导致的染色效 果的不可预测性和减小仍然是主要的有待解决的问题。


【发明内容】

[0007] 本发明的某些实施例提供当用于染色方案（protocol)的某些点时有益于染色方 案的特定成分的溶液。这些溶液的配方（fromulation)使得溶液的带出不再产生不利影响 或优选地稳定或有利地改性与这里特定溶液进行接触的染色试剂溶液。在本发明的某些实 施例中，缓冲溶液保持特定PH，使得当诸如带入到苏木精中的带出将不显著影响下一染色 试剂的pH。
[0008] 本发明的某些实施例涉及在H&E染色系统中降低溶液带出的不期望影响。在某些 实施例中，在染色方案的不同步骤中、诸如在某一染色试剂步骤之前使用特定溶液，以降低 带出的不期望影响。
[0009] 具体而言，本发明的某些实施例涉及包含有机酸和多羟基醇的PH缓冲溶液。在某 些实施例中，pH缓冲溶液具有包括约pH 2. 0-约pH 5. 0的pH缓冲范围。在某些实施例中， pH缓冲溶液具有约pH 1.0-约pH 7.0、或约pH 1.0-约pH 6.0、或约pH 1.0-约pH 5.0、或 约pH 2. 0-约pH 7. 0、或约pH 2. 0-约pH 6. 0的pH缓冲范围。优选地，这样的pH缓冲溶液 具有约pH 2. 0-约pH 5. 0的pH缓冲范围。pH缓冲溶液可以包括约5% -约30% (v/v)的 选自由乙二醇、丙二醇、丙三醇和聚乙二醇构成的组的多羟基醇，并还可以包括从IOmM-约 IOOmM的有机酸，该有机酸选自由苹果酸、柠檬酸、马来酸、醋酸以及酒石酸构成的组。在某 些实施例中，pH缓冲溶液也可以包括抗微生物剂，其至少在约pH 2. 0-约pH5. 0之间的pH 范围中有效。
[0010] 本发明的某些实施例还涉及一种pH约pH 2.0-约pH 5.0的溶液，其包括铝盐以 及约5%-约30% (v/v)的多羟基醇，所述多羟基醇选自由乙二醇、丙二醇、丙三醇以及聚 乙二醇构成的组。
[0011] 本发明的某些实施例还涉及一种使用苏木精染色组织试样的方法，该方法包括如 下步骤：（i)将试样与本发明限定的溶液接触；以及（ii)将试样转移到苏木精染色溶液。另 夕卜，该方法包括水洗试样以及然后将试样与缓冲溶液接触的步骤。
[0012] 本发明的某些实施例涉及一种用于进行苏木精-伊红染色的试剂盒，该试剂盒包 括本发明的特定溶液以及选自由苏木精溶液、伊红溶液、分化液以及上蓝剂溶液构成的组 的至少一种苏木精-伊红染色试剂。

【专利附图】

【附图说明】
[0013] 图1示出苏木精-伊红染色方案的一般步骤。
[0014] 图2示出在连续染色2500个样本载玻片的过程中苏木精溶液的pH变化。多个载 玻片染色导致苏木精溶液的PH的升高（实线）。将特定成分的缓冲溶液放置在苏木精之前 防止苏木精的pH的升高（虚线）。
[0015] 图3示出在连续染色2500个载玻片之后样本的苏木精染色质量的变化。与第一 个载玻片相比，第2500个载玻片呈现细胞质背景染色增强以及细节缺失。
[0016] 图4示出在第一个和第2500个连续染色的样本中所观察到的一致的苏木精染色。 在自来水清洗和苏木精溶液之间使用本发明的特定成分的缓冲溶液的方案染色载玻片。

【具体实施方式】
[0017] 这里提供的标题仅仅便于阅读，并不能解释为限制性。 I. 定义
[0018] 提供下面的定义，以更好地解释本发明并引导本领域中的一般技术人员实施本发 明。除非另外注明，相关领域的一般技术人员根据常规使用理解术语。
[0019] 当术语为单数时，也包括以复数的术语描述的本发明的情形，除非另外注明。 本文所用的"染色试剂"是指用于苏木精染色方案中的任何试剂。当必须通过明确提 及"是染色剂的试剂"以及"染色处理过程中不是染色剂的试剂"来理解本发明时，明确地 作出这样的区别。
[0020] 本文所用的"工作浓度（working strength) "或"备用"溶液是其中的组分处于本 发明方法中所用的期望浓度的溶液。"备用"也可以暗示该溶液不需要最终用户方面进行任 何额外的处理，诸如过滤、撇取浮沫以及/或者混合。
[0021] 本文中，广泛应用的"二甲苯替代物"包括两个种类：萜烯和脂肪族溶剂。萜烯的 代表性示例包括柠檬烯和松节油。
[0022] 通常，在高能力H&E染色方案中将自来水用于清洗步骤最为经济。因此，本文所用 的术语"水"是指自来水，但也涵盖蒸馏水或去离子水或者用于在H&E染色系统中处理和清 洗样本的水溶液。 II. 概述
[0023] 已经发现，H&E染色方案中的溶液带出的不期望影响可以通过在方案中的某些步 骤中间使用某些特定溶液来改善。发明人认为采用这些溶液和方法能够提高染色样品（诸 如安装在载玻片上的样品或保持在搁物架中的载玻片等）的能力，这可以转化为最终用户 的成本降低。其他期望的有益效果包括由于增强使用的容易度而提高用户经验、试剂性能 的更大的可预测性以及降低耗费的精力和劳力。另外，确信，这里公开的溶液和方法将节省 时间并提高效率，因为降低了改变试剂所需要的停机时间。结果的一致性（质量）也得到 提高，因为通过带出和试剂稀释所引入的变量会最小化，并且也可以提高试剂性能的可预 测性。 III. 苏木精-伊红（"H&E"）染色
[0024] H&E染色是组织学广泛使用的染色方法。本领域一般技术人员将意识到，已经研发 了用于H&E染色的许多变化形式和方案，并且在本发明可以应用的情况下，本发明不限于 任何具体变量、方案、系统等。一般的H&E系统可以限定为包括四个核心染色试剂：苏木精、 分化剂、上蓝试剂和伊红，以及用于脱蜡、再水化、脱水和透明（clearing)所需的清洗剂和 溶剂。
[0025] 一般代表性的H&E染色方案包括如下步骤：（i)(使用二甲苯或二甲苯替代物）脱 蜡；（ii)(使用醇类）再水化；（iii)水洗；（iv)苏木精；(V)水洗；(Vi)分化剂；(Vii)水 洗；（Viii)上蓝；（ix)水洗；（X)醇；（Xi)伊红；(Xii)(使用醇类）脱水；以及（Xiii)(使用 二甲苯或二甲苯替代物）透明化（Sheenan，D.C. and Hrapchak，B.B. :Theory and Practice of Histotechnology 2nd ed. Columbus, OH, Battelle Press, 1980)(图 1)。在本发明的某 些实施例中，在即将实施H&E方案中的步骤之前进行使用特定溶液的步骤。该溶液的成分 受制于染色试剂，所述溶液被设计用于保护所述染色试剂免于带出的影响。在某些优选实 施例中，在即将实施核心染色试剂步骤之前进行使用本发明的特定溶液的步骤。
[0026] 在本发明的某些实施例中，在即将实施苏木精步骤之前进行使用特定溶液的步 骤。在本发明的某些实施例中，在即将实施分化剂步骤之前进行使用特定溶液的步骤。在 本发明的某些实施例中，在即将实施上蓝试剂步骤之前进行使用特定溶液的步骤。在本发 明的某些实施例中，在即将实施伊红步骤之前进行使用特定溶液的步骤。
[0027] 在本发明的某些实施例中，具有特定成分的溶液放置在水洗步骤和苏木精溶液之 间。在某些实施例中，清洗水是自来水。在此位置，特定溶液减轻水对苏木精溶液的几个负 面影响。通过降低从清洗步骤带入到苏木精的水的实际体积，降低了水中（特别是诸如自 来水中）的可能影响苏木精的染色质量或染色能力的组分（例如，离子、氯等）的体积。将 缓冲剂添加到溶液中会降低水提高苏木精的PH的能力（图2)。这是有利的，因为提高苏木 精的PH导致组织的背景染色和染色细节的缺失（图3和4)。
[0028] 除了减轻带出的不利影响，特定溶液可以构成为提高暴露于带出的溶液中的苏木 精的稳定性。将多羟基醇添加到被带入到苏木精的溶液中，可以降低苏木精沉淀的可能性， 并且可以为用户提供价值，因为不再需要苏木精的过滤。
[0029] 应当理解"使用"溶液的步骤是指将例如安装在载玻片上的组织试样的样品暴露 到溶液。样品例如可以通过将其浸入或沉沉浸到溶液中而暴露到溶液。样品例如可以通过 将溶液经过样品、诸如通过将溶液经过保持样品的载玻片来暴露到溶液。样品例如可以通 过将溶液滴到或喷到样品上来暴露到溶液。本领域一般技术人员会意识到，在染色处理过 程中，将样品暴露到溶液可以存在替代方法，并且本发明的方法和溶液不局限于将样品暴 露到溶液的任何特别方法。IV.减轻带出影响的特定溶液
[0030] 本发明的一方面提供用于减轻苏木精染色方案中水或染色试剂带出的影响的特 定成分的溶液。
[0031] 在某些实施例中，特定溶液是包括酸的缓冲溶液，该缓冲溶液能够在约pH2. 0-约 pH 5.0之间缓冲。在某些实施例中，酸具有约2.0-约5.0之间的pKa。在某些实施例中，溶 液中酸的浓度为约IOmM-约lOOmM。在某些实施例中，溶液中酸的浓度为约20mM-约lOOmM。 在某些实施例中，溶液中酸的浓度为约IOmM-约50mM或约20mM-约50mM。在某些实施例 中，酸是有机酸。有用的有机酸的代表性示例包括但不局限于苹果酸、柠檬酸、富马酸、酒石 酸、马来酸以及醋酸。在某些实施例中，缓冲溶液包括溶度为约5%-约30% (v/v)的多羟 基醇。多羟基醇的代表性示例包括但不局限于乙二醇、聚乙二醇、丙二醇以及丙三醇。在某 些实施例中，溶液包括如这里限定量的酸和多羟基醇。在某一具体实施例中，缓冲液是包 括20mM的酒石酸和15% (v/v)的乙二醇的溶液，并且溶液pH被调节到pH 3. 3。本领域一 般技术人员应当理解，存在许多可以用于调节PH的试剂。例如，这些试剂包括：氢氧化钠 (NaOH)、氢氧化钾（KOH)或其他氢氧基化合物以及酒石酸和其共轭碱。在一个实施例中，使 用氢氧化钠（NaOH)调节pH。
[0032] 在某些实施例中，特定溶液是包括铝盐并具有约pH2. 0到约pH5. 0的pH的非缓冲 溶液。铝盐的代表性示例包括但不限于硫酸铝铵（AlNH4 (SO4) 2)、硫酸铝（Al2 (SO4) 3)、以及硫 酸铝钾（AlK(SO4)2)。在某些实施例中，非缓冲铝盐溶液也包括溶度为约15%-约30% (v/ v)的这里所述的多羟基醇。
[0033] 在某些实施例中，特定溶液是用作分化剂的染色试剂的稍微改性或非改性配方。 在某些实施例中，用作分化剂的染色试剂的稍微改性的或非改性配方是用任意酸缓冲的溶 液，其中酸的PKa为约2. 5-约4. 0并且能够在约pH 1. 5-约pH5. 0的pH之间进行缓冲。在 某些实施例中，酸是有机酸。有用的有机酸的代表性示例包括但不局限于苹果酸、柠檬酸、 富马酸、马来酸、醋酸以及酒石酸。
[0034] 在包含任何本发明溶液、或用于实行本发明方法的溶液的实施例中，可以 添加抗微生物剂来抑制微生物的生长。在某些实施例中，抗微生物剂是至少在约PH 2.0-约pH 5.0之间的pH范围中有效的试剂。微生物剂的代表性示例包括叠氮化钠、 PROCUN 3()() "、PR(X:TJN 15(>:11、PROCTJN 2(KV\ 如，在一个实施例中，溶液包含约0.03%到约0.04% (v/v)的PROCUN 3(X):'1 (Sigma Aldrich, St. Louis, MO)，以抑制微生物生长。应当理解，本领域一般技术人员公知的示例性 产品或商品名称仅仅以解释性目的提供，并且不意味着限定所述试剂的更广的种类。
[0035] 应当预期，本发明的诸如缓冲溶液的特定溶液被提供用作H&E染色方案的工作浓 度或备用的溶液。但是，还应当预期，可以制备两种或更多种组分的浓缩溶液，其中，用户可 以向特定溶液添加水和/或其他组分（诸如抗微生物剂），以制备具有这里描述的配方的工 作浓度或备用的溶液。因此，本发明还涉及可以用于制备本发明特定溶液的浓缩溶液。如 果提供特定溶液中的组分量，则本领域一般技术人员可以确定提供工作浓度或备用溶液所 必须的浓缩溶液中的组分量。例如，如果浓缩溶液使用水进行1:1稀释，则酸、多羟基醇等 的浓度也是最终期望浓度的二倍。 V.减轻带出影响的方法
[0036] 本发明的一方面提供用于减轻苏木精染色方案中水或染色试剂带出的影响的方 法。一般而言，这样的方法利用特定溶液作为染色处理中位于两个染色试剂步骤或水洗步 骤和染色试剂步骤之间的步骤。
[0037] 在通过将样品沉浸到染色试剂中使样品与染色试剂接触的染色方案中，样品也可 以沉浸到特定溶液中。在通过不同于沉浸的方式使样品与染色试剂接触的染色方案中，样 品可以通过同样方式与特定溶液接触。但是应当理解，样品与染色试剂接触的方式并不限 制样品在相同染色方案内可以与特定溶液接触的方式。
[0038] 在H&E染色系统中，带出的不利影响对苏木精和分化剂溶液是最大的，但是可以 影响染色系统中的所有染色剂/试剂。苏木精和分化剂在一般的H&E染色方案中跟随水洗 之后。这两种溶液的性能高度取决于pH，并且将水引入到这些溶液中导致pH的增大。增 大PH的一个效果是苏木精的背景染色增强。在某些实施例中，样品在即将与苏木精染色 溶液接触之前与特定溶液接触。在某些实施例中，样品在刚刚水洗之后并且在即将与苏木 精染色溶液接触之前与特定溶液接触。在某些实施例中，在暴露到从之前将试样沉浸到缓 冲溶液中而带出的缓冲溶液时，苏木精溶液的pH增大小于0. 30pH单位。在某些实施例中， 在暴露到从之前将试样沉浸到缓冲溶液中而带出的缓冲溶液时，苏木精溶液的pH增大小 于0. 20pH单位。应当理解，不仅仅在将本发明方法的步骤执行一次时苏木精溶液的pH在 暴露到从之前将试样沉浸到缓冲溶液中而带出的缓冲溶液时增大小于0. 30pH单位或小于 0. 2pH单位，而且本发明的具体优点是苏木精溶液的pH在重复暴露到带出的缓冲溶液后也 不增大。
[0039] 在某些实施例中，样品在即将与分化剂溶液接触之前与特定溶液接触。在某些实 施例中，样品在刚刚水洗之后并且在即将与分化剂溶液接触之前与特定溶液接触。
[0040] 使用所述方法在标准H&E染色程序下在替换新试剂之前可以处理高达2000个载 玻片。在某些实施例中，使用该方法在替换新试剂之前可以处理高达2700个载玻片。此外， 在某些实施例中，使用该方法在替换新试剂之前可以处理高达3000个载玻片。本领域一般 技术人员应当理解，处理一定数量的试样载玻片的能力是指，在没有观察到为染色载玻片 的目的所不可接受的负面影响的情况下处理这么多数量。还应当预期，使用本发明的试剂 和方法与降低但不完全消除带出的机械方法结合也显著提高可以使用给定试剂组被染色 的载玻片数量。
[0041] 本发明的方法还包括将浓缩溶液稀释（诸如用水稀释）成最终工作浓度或备用的 特定溶液的步骤。本发明的方法也可以包括添加组分、诸如抗微生物剂以制备备用特定溶 液的步骤。此步骤可以在H&E染色方案中使用特定溶液之前进行。 VI.试剂盒和使用方法
[0042] 本发明的一个方面涉及用于进行H&E染色的试剂盒。这样的试剂盒包括至少一种 减轻溶液带出的影响的特定溶液。在本申请中详细描述有用的特定溶液，该溶液包括缓冲 和非缓冲溶液。本发明代表性的试剂盒也包括用于H&E染色的一种或多种染色试剂或其他 组分。用于H&E染色的染色试剂的示例包括苏木精溶液、伊红溶液、分化液以及上蓝剂溶 液。用于H&E染色的其他组分的示例包括二甲苯、二甲苯替代物以及醇类。在某些实施例 中，试剂盒至少包括五种试剂：（1)苏木精溶液；（2)伊红溶液；（3)分化液；(4)上蓝剂溶 液；以及（5)减轻溶液带出影响的特定溶液。
[0043] 本发明的另一方面涉及使用试剂盒进行H&E染色的方法。用于进行H&E染色的程 序包括如本申请详细描述的减轻带出影响的特定溶液。使用试剂盒提供许多好处。当前的 H&E染色程序和试剂受到溶液带出的不利影响，经常需要以不同速率改变溶液。在试剂盒中 包括减轻溶液带出影响的特定溶液为所有试剂盒提供一致的可预期的使用期，使得试剂盒 需要同时更换。例如，使用试剂盒在标准H&E染色程序下在替换新试剂之前可以处理高达 2000个载玻片。或者使用试剂盒在替换新试剂之前可以处理高达2700个载玻片。或者使 用试剂盒在替换新试剂之前可以处理高达3000个载玻片。 示例
[0044] 下面公开的实施例仅仅是本发明的代表性实施例，其可以呈现不同的形式。因此， 下面示例中公开的具体结构、功能和程序细节不应解释为限制性。 示例1
[0045] 如图1和表1所述，使用标准H&E程序在LRICA * ST-5010 AUTOSTAINTR* 或LEICA* ST-5020 MULTISTAINER?上进行所有染色。耗尽研宄的目的在于评估连 续染色许多载玻片过程中产生的化学和功能（染色）变化。在一般耗尽研宄（表1)中，苏木 精、分化剂、上蓝剂以及伊红在整个耗尽研宄过程中不改变，而所有其他组分（醇类和二甲 苯）每隔300个载玻片轮换（rotated)或改变。每隔150个载玻片对多组织对照（control) 载玻片上的对照组织试样染色（功能染色）和苏木精pH进行测定。标准耗尽研宄一共包 括2700个载玻片（90个载玻片搁物架（30个载玻片/搁物架））。
[0046] 其他染色试验在自来水清洗和苏木精步骤之间包括特定成分的额外缓冲试剂 (表2)。此溶液被设计成减轻带入到苏木精中的自来水遗留的影响。在耗尽研宄过程中， 不改变以下溶液，如苏木精、分化剂、上蓝剂以及伊红。如上述研宄，每隔150个载玻片间隔 对多组织对照载玻片上的对照组织试样染色（功能染色）和苏木精pH进行测定。
[0047] 图2示出在具有载玻片的载玻片搁物架将自来水带入到苏木精中时发生的苏木 精PH的增大。与此相比，放置在自来水和苏木精之间的特定成分的缓冲试剂，在载玻片移 动到苏木精溶液中之前将自来水从载玻片上移走。结果，苏木精的pH保持稳定。
[0048] 表1示出在LFJCAi ST-50U)XL:i('自动染色机上进行的标准H&E方案。

【权利要求】
1. 一种抑缓冲溶液，包括有机酸和多哲基醇，其中，所述抑缓冲溶液具有包括约抑 2.0-约抑5.0的抑缓冲范围。
2. 根据权利要求1所述的抑缓冲溶液，其中，所述抑缓冲溶液具有约抑2. 0-约抑 5.0的抑缓冲范围。
3. 根据权利要求1所述的抑缓冲溶液，其中，所述抑缓冲溶液包括约5% -约30% (v/v)的多哲基醇，所述多哲基醇选自由己二醇、丙二醇、丙S醇W及聚己二醇构成的组。
4. 根据权利要求1所述的抑缓冲溶液，其中，所述抑缓冲溶液包括约5% -约30% (v/v)的己二醇。
5. 根据权利要求1-4中任一项所述的抑缓冲溶液，其中，所述有机酸选自由苹果酸、巧 樣酸、马来酸、醋酸W及酒石酸构成的组。
6. 根据权利要求1-4中任一项所述的抑缓冲溶液，其中，所述有机酸选自由苹果酸、巧 樣酸、W及酒石酸构成的组。
7. 根据权利要求1-4中任一项所述的抑缓冲溶液，其中，所述有机酸是酒石酸。
8. 根据权利要求1-7中任一项所述的抑缓冲溶液，其中，所述抑缓冲溶液包括浓度为 约lOmM-约lOOmM的所述有机酸。
9. 根据权利要求1-8中任一项所述的抑缓冲溶液，其中，所述抑缓冲溶液进行缓冲， 使得当将水引入所述溶液时抑保持在约抑2. 0-约抑5. 0之间。
10. 根据权利要求1所述的抑缓冲溶液，其中，所述抑缓冲溶液包括约lOmM-约lOOmM 的酒石酸W及约5% -约30% (v/v)的己二醇。
11. 根据权利要求1-10中任一项所述的抑缓冲溶液，还包括抗微生物剂，所述抗微生 物剂至少在从约抑2. 0到约抑5. 0的抑范围中有效。
12. -种抑为约抑2. 0-约抑5. 0的溶液，包括侣盐W及约5% -约30% (v/v)的多 哲基醇，所述多哲基醇选自由己二醇、丙二醇、丙S醇W及聚己二醇构成的组。
13. 根据权利要求12所述的溶液，其中，所述侣盐选自包括硫酸侣锭、硫酸侣W及硫酸 侣钟的组。
14. 一种使用苏木精染色组织试样的方法，所述方法包括如下步骤；（i)将所述试样与 权利要求1-11中任一项所述的抑缓冲溶液接触；W及（ii)将所述试样转移到苏木精染色 溶液。
15. 根据权利要求14所述的方法，还包括在将所述试样与所述抑缓冲溶液接触之前水 洗所述试样。
16. 根据权利要求15所述的方法，其中，所述抑缓冲溶液在暴露于从先前所述试样与 水的接触所带出的水时，将抑保持在约抑2. 0-约抑5. 0。
17. 根据权利要求14-16中任一项所述的方法，其中，在暴露于从先前所述试样与所述 抑缓冲溶液的接触所带出的抑缓冲溶液时，苏木精染色溶液的抑增大小于0. 30抑单位。
18. 根据权利要求14-16中任一项所述的方法，其中，与所述试样不接触所述抑缓冲溶 液而进行的苏木精染色相比，所述苏木精溶液更持久地保持其染色能力，且染色特性没有 负面变化。
19. 根据权利要求14-18中任一项所述的方法，其中，在使用标准H&E染色程序且不 改变染色试剂的情况下，所述方法具有在染色特性没有负面变化的情况下染色至少约2700 个标准试样载玻片的能力。
20. -种用于进行苏木精-伊红染色的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1-11中任一 项所述的抑缓冲溶液W及选自由苏木精溶液、伊红溶液、分化液W及上藍剂溶液构成的组 的至少一种苏木精-伊红染色试剂。
21. 根据权利要求20所述的试剂盒，包括；（i)根据权利要求1-11中任一项所述的抑 缓冲溶液和（ii)苏木精溶液；（iii)伊红溶液；（iv)分化液；W及（V)上藍剂溶液。
22. 根据权利要求20或21所述的试剂盒，其中，所述抑缓冲溶液具有约抑2. 0-约 pH 5.0的抑缓冲范围。
23. 根据权利要求20-22中任一项所述的试剂盒，其中，所述抑缓冲溶液包括约 5%-约30% (v/v)的多哲基醇，所述多哲基醇选自由己二醇、丙二醇、丙S醇W及聚己二醇 构成的组。
24. 根据权利要求20-23中任一项所述的试剂盒，其中，所述抑缓冲溶液包括约 5% -约 30% (v/v)的己二醇。
25. 根据权利要求20-24中任一项所述的试剂盒，其中，所述有机酸选自由苹果酸、巧 樣酸、马来酸、醋酸W及酒石酸构成的组。
26. 根据权利要求20-25中任一项所述的试剂盒，其中，所述有机酸选自由苹果酸、巧 樣酸、W及酒石酸构成的组。
27. 根据权利要求20-26中任一项所述的试剂盒，其中，所述有机酸是酒石酸。
28. 根据权利要求20-27中任一项所述的试剂盒，其中，所述抑缓冲溶液包括浓度为约 lOmM-约lOOmM的有机酸。
29. 根据权利要求20-28中任一项所述的试剂盒，其中，所述抑缓冲溶液进行缓冲，使 得当将水引入所述溶液时抑保持在约抑2. 0-约抑5. 0之间。
30. 根据权利要求20所述的试剂盒，其中，所述抑缓冲溶液包括约lOmM-lOOmM的酒石 酸W及约5% -约30% (v/v)的己二醇。
【文档编号】G01N33/68GK104471405SQ201380016665
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2013年1月25日 优先权日:2012年1月26日
【发明者】斯坦利·E·汉森, 罗素·迈尔斯, 罗纳德·保罗, 奥德拉·拉斯马森, 凯特·泰勒 申请人:莱卡生物系统里士满股份有限公司