兔脑组织因子冻干制剂的制备方法
【专利摘要】本发明公开了兔脑组织因子冻干制剂的制备方法，其步骤是：取新鲜兔脑，剥去脑膜及血管，弃去脑干，用生理盐水洗净；置于清洁乳钵内，加入丙酮至刚浸没兔脑；用研锤研磨，倒去丙酮，反复三次；用滤纸滤去丙酮；置于37℃烤箱并摊开，使丙酮蒸发烤干；加生理盐水，搅匀后放入37℃恒温水浴内预热激活、孵育并搅拌；离心分离；取上清液过滤后，获得兔脑FⅢ组织因子悬液，加入小瓶内，冻干、抽气、压瓶，即制成兔脑组织因子冻干制剂，-20℃保存。采用上述方案，技术更加成熟、质量更稳定、保质期更长，使用起来更方便，具有极高的医学教学、科研、临床诊疗及经济价值。
【专利说明】兔脑组织因子冻干制剂的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医学制剂的【技术领域】。更具体地说，本发明涉及一种兔脑组织因子冻干制剂的制备方法。
【背景技术】
[0002]上世纪七十年代，为了研究弥散性血管内凝血(DIC)，而研制获得的兔(狗)脑粉(Fill:组织因子的粗制品)。兔(狗)脑粉(FIII:组织因子的粗制品)作为弥散性血管内凝血(DIC)动物模型启动因子及DIC血液学诊断指标凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT)的检测具有重要价值。
[0003]但是，在现有技术中，兔脑凝血活酶(FIII:组织因子)只有粉剂，只有用兔脑凝血活酶制成的凝血酶原时间(PT)测定试剂盒。使用时，需要经过预热激活一个小时，然后离心、过滤等过程，才后能使用。
[0004]另外，现有技术中的制剂的保质期较短，只有8个月。
[0005]但是，在现有技术中，市售只有兔脑粉剂(实际上只是F II1:组织因子的粗制品)。使用时，需要经过预热激活、孵育60min，然后经离心、过滤等过程后，才能使用，使用起来较麻烦。另外，现有技术中兔脑粉剂的技术质量不稳定、保质期较短，一 20C保存保质期只有6个月。
【发明内容】
[0006]本发明提供兔脑组织因子冻干制剂的制备方法，其目的是质量更稳定、使用更方便、保质期更长。
[0007]为了实现上述目的，本发明采取的技术方案为:
[0008]本发明的兔脑组织因子冻干制剂的制备方法，其步骤是:
[0009]a、取新鲜兔脑，剥去脑膜及血管，弃去脑干，用生理盐水洗净；置于清洁乳钵内，加入丙酮至刚浸没兔脑；
[0010]b、用研锤研磨，然后，倒去丙酮；再加入新丙酮研磨后再倒去丙酮；如此反复三次；
[0011]C、用滤纸滤去丙酮；
[0012]d、将滤去丙酮后的兔脑置于37°C烤箱并摊开，使丙酮蒸发烤干，制成兔脑粉，即兔脑组织因子粗制品，其活力PT≦ 13S ；
[0013]e、取按上述步骤制得的兔脑组织因子，即兔脑粉，加生理盐水，搅匀后放入37°C恒温水浴内预热激活、孵育60min，每隔15min搅拌一次；
[0014]f、然后离心分离；取离心分离得到的上清液过滤后，即得到兔脑组织因子悬液。
[0015]g、取兔脑组织因子悬液加入小瓶内，冻干、抽气、压瓶，即制成兔脑组织因子冻干制剂，— 20°C保存。
[0016]在所述的步骤f中，离心分离的参数为1000转/min，时间为5min。[0017]在所述的步骤e中，取兔脑粉400mg,加生理盐水至10ml。
[0018]在所述的步骤g中，所述的小瓶规格为5ml或10ml，即制成兔脑组织因子5ml/瓶或IOml/瓶冻干制剂。
[0019]使用时，将兔脑组织因子5ml/瓶加蒸馏水5ml，或IOml/瓶冻干制剂加蒸馏水IOml,即分别制成5ml或IOml的兔脑组织因子悬液。
[0020]本发明采用上述技术方案，兔脑组织因子(Fill:组织因子)从兔脑组织中提取，脑组织含量最高；制成兔脑粉(组织因子的粗制品)再制成兔脑组织因子5ml/瓶或IOml/瓶冻干制剂，因此，技术更加成熟、质量更稳定、保质期更长O 12月)，使用起来更方便；效价比更高；使用时只要加蒸馏水溶解就可以使用，不需经过预热激活、孵育、离心、过滤等过程，在临床医学诊断、治疗、弥散性血管内凝血(DIC)等血液病的实验研究以及实验教学等领域有着广泛的用途，具有极高医学教学、科研、临床诊断、治疗及经济价值。
【具体实施方式】
[0021]下面通过对实施例的描述，对本发明的【具体实施方式】作进一步详细的说明，以帮助本领域的技术人员对本发明的发明构思、技术方案有更完整、准确和深入的理解。
[0022]本发明为一种兔脑组织因子冻干制剂的制备方法，将兔脑粉(F II1:组织因子粗制品)制成5ml/瓶或IOml/瓶冻干制剂，技术更加成熟、质量更稳定、保质期更长、使用起来更加方便，可以广泛应用在医学教学、科研和临床诊断治疗中。
[0023]为了解决现有技术存在的问题并克服其缺陷，实现使用更方便、技术更成熟、质量更稳定、保质期更长的发明目 的，本发明采取的技术方案为:
[0024]上述兔脑组织因子冻干制剂的制备方法的步骤是:
[0025]a、取新鲜兔脑，剥去脑膜及血管，弃去脑干，用生理盐水洗净；置于清洁乳钵内，加入丙酮至刚浸没兔脑；
[0026]b、用研锤研磨，然后，倒去丙酮；再加入新丙酮研磨后再倒去丙酮；如此反复三次；
[0027]C、用滤纸滤去丙酮；
[0028]d、将滤去丙酮后的兔脑置于37°C烤箱并在箱内摊开，使丙酮蒸发烤干，制成兔脑粉，即兔脑组织因子粗制品，其活力PT ^ 13S ；
[0029]e、取按上述步骤制得的兔脑粉(组织因子粗制品)，加生理盐水，搅匀后放入37°C恒温水浴内预热激活、孵育60min，每隔15min搅拌一次；
[0030]f、然后离心分离；取离心分离得到的上清液过滤后，获得兔脑凝血活酶悬液，该脑凝血活酶悬液即FIII组织因子悬液；
[0031]g、取兔脑F III组织因子悬液加入小瓶内，冻干、抽气、压瓶，即制成兔脑组织因子冻干制剂，零下20°C保质，保质期> 12月；所述的兔脑组织因子冻干制剂，即兔脑凝血活酶，也即F III组织因子。
[0032]通过上述方法获得的兔脑F III组织因子冻干制剂，制备技术更加成熟、质量更稳定、保质期更长、使用起来更方便。
[0033]使用时，不需粉剂样预热激活、孵育、离心、过滤，只要加蒸馏水溶解即可使用。-20°C保存，保质期> 12月。而现有技术_20°C保存，保质期仅为6个月。[0034]因此，兔脑F III组织因子冻干制剂的研制不论在医学科研教学、临床诊疗、经济上都有重要价值。在临床诊疗、弥散性血管内凝血(DIC)的实验研究和实验教学等有着广泛的实用价值。
[0035]本发明的实施例的技术参数为:
[0036]在所述的步骤f中，离心分离的参数为1000转/min，时间为5min。
[0037]在所述的步骤e中，取兔脑粉400mg,加生理盐水至10ml。
[0038]在所述的步骤g中，所述的小瓶规格为5ml，即制成兔脑组织因子5ml/瓶冻干制剂。
[0039]或者，在所述的步骤g中，所述的小瓶规格为10ml，即制成兔脑组织因子IOml/瓶冻干制剂。
[0040]使用时，将兔脑组织因子5ml/瓶冻干制剂加蒸馏水5ml即可制成兔脑组织因子悬液5ml。或者，将兔脑组织因子IOml/瓶冻干制剂加蒸馏水IOml即可制成兔脑组织因子悬液 IOml0
[0041]通过上述方法，兔脑粉(Fill:组织因子粗制品)能制成兔脑F III组织因子冻干制剂。
[0042]除兔以外其它动物，如狗、大小鼠、人脑粉剂以及胎盘制作FII1:组织因子粉剂(Fill:组织因子粗产品)，再制成F II1:组织因子冻干制剂的原理基本是相同的。
[0043]以上对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种非实质性的改进，或未经改进将本发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.兔脑组织因子冻干制剂的制备方法，其特征在于所述的制备方法步骤是: a、取新鲜兔脑，剥去脑膜及血管，弃去脑干，用生理盐水洗净；置于清洁乳钵内，加入丙酮至刚浸没兔脑； b、用研锤研磨，然后，倒去丙酮；再加入新丙酮研磨后再倒去丙酮；如此反复三次； C、用滤纸滤去丙酮； d、将滤去丙酮后的兔脑置于37°C烤箱并摊开，使丙酮蒸发烤干，制成兔脑粉，即兔脑组织因子粗制品，其活力PT ^ 13S ； e、取按上述步骤制得的兔脑组织因子，即兔脑粉，加生理盐水，搅匀后放入37°C恒温水浴内预热激活、孵育60min,每隔15min搅拌一次； f、然后离心分离；取离心分离得到的上清液过滤后，即得到兔脑组织因子悬液。 g、取兔脑组织因子悬液加入小瓶内，冻干、抽气、压瓶，即制成兔脑组织因子冻干制剂，一 20°C保存。
2.按照权利要求1所述的兔脑组织因子冻干制剂的制备方法，其特征在于: 在所述的步骤f中，离心分离的参数为1000转/min,时间为5min。
3.按照权利要求1所述的兔脑组织因子冻干制剂的制备方法，其特征在于: 在所述的步骤e中，取兔脑粉4·00mg,加生理盐水至10ml。 在所述的步骤g中，所述的小瓶规格为5ml或10ml，即制成兔脑组织因子5ml/瓶或IOml/瓶冻干制剂。
4.按照权利要求3所述的兔脑组织因子冻干制剂的制备方法，其特征在于: 使用时，将兔脑组织因子5ml/瓶加蒸馏水5ml，或IOml/瓶冻干制剂加蒸馏水10ml，即分别制成5ml或IOml的兔脑组织因子悬液。
【文档编号】G01N1/28GK103852362SQ201410093404
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2014年3月13日 优先权日:2014年3月13日
【发明者】陆晓华, 汪全海, 徐蕾, 王国光, 李伟, 赵雪 申请人:皖南医学院