一种苦瓜叶挥发性杀虫组分的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种苦瓜叶挥发性杀虫组分的检测方法，即通过GC-MS技术鉴定苦瓜叶片化学成分的方法和结果。它是采用同时蒸馏法提取苦瓜叶片挥发性组分的方法得到提取液，经过二氯甲烷萃取处理后再经毛细管色谱柱分离，将所得样品质谱图与标准谱图库中的谱图对比定性，并采用峰面积归一化法计算相对含量。从苦瓜叶挥发性组分中鉴定出14种化学成分。结果显示(Z)-牻牛儿醇醋酸酯、6-亚异丙基-1-甲基二环[3.1.0]己烷、N,N-二甲基-2-苯乙胺为苦瓜叶挥发性提取物中的主要化学成分，分别占总出峰面积的16.21%、2.18%和0.92%。本发明为苦瓜叶作为一种植物资源的开发利用奠定了基础，提供了实证依据。
【专利说明】一种苦瓜叶挥发性杀虫组分的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物资源的综合开发【技术领域】，涉及采用现代分析检测仪器检测植物、蔬菜化学成分的检测方法，更具体的说是一种苦瓜叶挥发性杀虫组分的检测方法。
【背景技术】
[0002]苦瓜(Momordica Charantia L)又名锦蒸枝、癞葡萄、癞瓜、凉瓜等,系葫芦科苦瓜属蔓性草本植物，据《滇南本草》、《本草纲目》记载，苦瓜叶片具有治胃痛、痢疾、疗疮肿毒、驱虫等功效，通过田间调查和实验证实苦瓜叶及其提取物还具有较强抗虫性，K.Prabakar等对苦瓜、蛇瓜、丝瓜、冬瓜和西瓜这五种葫芦科植物叶片的甲醇提取物对致倦库蚊(CWmquinquefasciatus)幼虫杀虫活性进行了研究,结果表明苦瓜叶甲醇提取物对致倦库蚊的杀虫活性最大，其LC5tl值为465.85ppm，低于其它四种葫芦科植物。陈宏等采用乙醚、丙酮、乙醇、石油醚4种有机溶剂浸提和热提苦瓜叶片，以提取液涂抹桑叶和甘蓝叶分别饲喂家蚕和菜青虫，试验结果表明:4种有机溶剂提取液处理试虫，其取食量降低，生长速率缓慢，存活率下降，其中以乙醚提取液的作用效果最强。除叶片浸提产物外，叶片挥发性物质对昆虫也有一定的拒食性，但关于此方面研究至今未见相关的文献报道。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种苦瓜叶挥发性杀虫组分的检测方法。本文通过气相色谱-质谱-计算机联用系统对苦瓜叶挥发组分作了一个系统的分析，试图揭示苦瓜叶抗虫作用的化学本质，为苦 瓜叶片抗虫作用的进一步研究提供参考，并为苦瓜叶作为一种植物资源的综合开发提供科学依据。为实现此目的，本
【发明内容】
提供如下的技术内容:
一种苦瓜叶挥发性杀虫组分的检测方法，其特征在于包括如下的步骤:
(1)苦瓜叶挥发性组分:
将新鲜苦瓜叶用去离子水冲洗干净，置于阴凉洁净处晾去表面水分，称取500g捣碎，进行水蒸气蒸馏，蒸馏时间2 h，溜出液速度为80-100滴/min。蒸馏液用IOOmL二氯甲烷萃取，每次20mL，萃取5次，粗提物经旋转蒸发仪浓缩至5 mL，得到淡黄色油状提取物，备用；
(2)采用GC-MS进行分析，气相色谱条件:柱子初始温度40°C保持3min，以5°C/min升至180°C保持2min，再以10°C /min升至280°C，保持2min，进样口温度:250°C，质谱连接线温度:250°C，高纯氦气为载气，流速l.0ml/min，分流比:10:1，进样量:1.ΟμL ;质谱条件:质谱电离方式为ΕΙ，电子轰击源电子能量70eV，离子源温度230°C，电子倍增器电压1.0 X 105，溶剂延迟时间:3min，扫描范围m/z: 35-1000aum ；
(3)利用峰面积归一化法计算各峰面积的相对含量，从苦瓜叶挥发性组分中分析鉴定出14种化合物，主要成分有16.21% (Z)-栊牛儿醇醋酸酯，16.21%6-亚异丙基-1-甲基二环[3.1.0]己烷，0.92%N, N-二甲基-2-苯乙胺。
[0004]本发明具更加体的试验方法如下:
1、材料与方法1.1仪器和试剂
GC-MS 联用仪(Thermo, Focus GC, DSQ II，美国)
TR-5MS 色谱柱(30mX 25mmX0.25Mm), NIST05 标准谱图库
氯仿，丙酮、二氯甲烷、无水硫酸钠和氢氧化钠均为分析纯(天津市元立化工有限公司)苦瓜叶采自天津市郊区，经鉴定为葫芦目葫芦科苦瓜属长丰三号苦瓜的叶片，用去离子水洗净后烘干备用。
[0005]1.2分析样品的制备
采用同时蒸馏法。将新鲜苦瓜叶用去离子水冲洗干净，置于阴凉洁净处晾去表面水分，称取500g捣碎，进行水蒸气蒸馏，蒸馏时间2 h，溜出液速度为80-100滴/min。蒸馏液用IOOmL二氯甲烷萃取，每次20mL，萃取5次，粗提物经旋转蒸发仪浓缩至5 mL,得到淡黄色油状提取物作GC-MS分析。
[0006]1.3GC-MS 分析条件
气相色谱条件:柱子初始温度40°C保持3min,以5°C /min升至180°C保持2min,再以IO0C /min升至280°C，保持2min，进样口温度:250°C，质谱连接线温度:250°C，高纯氦气为载气，流速1.0ml/min,分流比:10:1,进样量:1.ΟμL ；
质谱条件:质谱电离方式为EI，电子轰击源电子能量70eV，离子源温度230°C，电子倍增器电压1.0 X 105，溶剂延迟时间:3min，扫描范围m/z:35-1000aum。
[0007]按上述GC-MS分析条件对苦瓜叶提取物上机测试，苦瓜叶挥发性组分的总离子流色谱图(见图1)。各峰的鉴定主要通过NIST05谱库检索，并根据有机化合物的质谱断裂一般规律和文献报道的数据分析确定，利用峰面积归一化法计算各峰面积的相对含量(结果见表1)。
[0008]通过GC-MS技术，从苦瓜叶挥发性组分中分析签定出14种化合物，结果显示(Z)-栊牛儿醇醋酸酯、6-亚异丙基-1-甲基二环[3.1.0]己烷、N，N-二甲基-2-苯乙胺为苦瓜叶挥发性提取物中的主要化学成分，分别占总出峰面积的16.21%、2.18%和0.92%。从化合物类型来看，苦瓜叶挥发性提取物的主要化学成分为酯类、脂肪酸、醇类、生物碱类和萜类等，其中以酯类的含量最为丰富。
[0009]表1苦瓜叶挥发性提取液化学成分的GC-MS分析结果
【权利要求】
1.一种苦瓜叶挥发性杀虫组分的检测方法，其特征在于按如下的步骤进行: (1)苦瓜叶挥发性组分: 将新鲜苦瓜叶用去离子水冲洗干净，置于阴凉洁净处晾去表面水分，称取500g捣碎，进行水蒸气蒸馏，蒸馏时间2 h，溜出液速度为80-100滴/min ;蒸馏液用IOOmL二氯甲烷萃取，每次20mL，萃取5次，粗提物经旋转蒸发仪浓缩至5 mL，得到淡黄色油状提取物，备用； (2)采用GC-MS进行分析，气相色谱条件:柱子初始温度40°C保持3min，以5°C/min升至180°C保持2min，再以10°C /min升至280°C，保持2min，进样口温度:250°C，质谱连接线温度:250°C，高纯氦气为载气，流速l.0ml/min，分流比:10:1，进样量:1.ΟμL ;质谱条件:质谱电离方式为ΕΙ，电子轰击源电子能量70eV，离子源温度230°C，电子倍增器电压1.0 X 105，溶剂延迟时间:3min，扫描范围m/z: 35-1000aum ； (3)利用峰面积归一化法计算各峰面积的相对含量，从苦瓜叶挥发性组分中分析鉴定出14种化合物，主要成分有16.21% (Z)-栊牛儿醇醋酸酯，16.21%6-亚异丙基-1-甲基二环[3.1.0]己烷，0.92%N, N-二甲基-2-苯乙胺。
【文档编号】G01N30/02GK103954702SQ201410158780
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2014年4月18日 优先权日:2014年4月18日
【发明者】陈宏 , 单少杰, 郭红梅, 李翔, 姜虹羽, 雷盯函 申请人:天津师范大学