一种甲钴胺片有关物质的测定方法
【专利摘要】本发明提供了一种甲钴胺片有关物质的测定方法，包括如下步骤：①供试品的制备：②对照品的制备；③采用高效液相色谱测定有关物质的含量，色谱条件为：固定相是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，流动相是由乙腈与磷酸盐缓冲液组成的混合液；检测波长为300～360nm，进样量为20μl，柱温为30℃，流速为0.5～1.5ml/min；梯度洗脱；④计算供试品中各杂质的含量。本发明提供的甲钴胺片有关物质的测定方法，通用性强、重现性好、分离度高、检测结果准确；经方法学验证表明，具有稳定性指示作用，能够快速、准确地实现甲钴胺片各杂质的限度控制，确保质量可控，而且该测定方法成本低廉，具有良好的经济效益和推广前景。
【专利说明】一种甲钴胺片有关物质的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及分析化学【技术领域】，更具体地说，涉及一种甲钴胺片有关物质的测定 方法。
【背景技术】
[0002] 甲钴胺又名甲基维生素 B12,是一种深红色结晶或结晶性粉末；无臭、无味；引湿 性强；遇光易分解；甲钴胺分子式为(：63Η 91〇Λ3〇14Ρ，分子量为1344. 38,其结构是以钴离子为 中心的大环络合物，该结构式如下：
[0003]
【权利要求】
1. 一种甲钴胺片有关物质的测定方法，包括如下步骤： (1) 供试品的制备：直接研磨甲钴胺片至细粉，取适量细粉置于量瓶中，加流动相使细 粉溶解、稀释至刻度，制成浓度为〇. 25mg/ml的溶液；摇匀、滤过，取续滤液作为供试品溶 液； (2) 对照品的制备：取适量步骤（1)所得的供试品溶液，加流动相稀释至刻度，制成浓 度为7. 5 μ g/ml的溶液，作为对照品溶液； (3) 采用高效液相色谱测定有关物质的含量：取步骤（2)所得的对照品溶液注入液相 色谱仪，调节检测灵敏度，再精密量取供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱仪，记录 色谱图至甲钴胺峰保留时间的2倍，供试品溶液中单个杂质含量不得大于1. 0%，总杂质含 量不得大于2. 0%。 色谱条件为：固定相是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，流动相是由乙腈与 磷酸盐缓冲液组成的混合液；检测波长为300?360nm，进样量为20 μ 1，柱温为30°C，流速 为0. 5?1. 5ml/min ;梯度洗脱； (4) 计算供试品中各杂质的含量。
2. 根据权利要求1所述的甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于：所述的梯度洗 脱中，于0?2分钟，流动相中乙腈的体积占5%，磷酸盐缓冲液的体积占95% ;于2?15 分钟，流动相中乙腈的体积从5 %变化为15 %，磷酸盐缓冲液的体积从95 %变化为85 %;于 15?30分钟，流动相中乙腈的体积从15%变化为20%，磷酸盐缓冲液的体积从85%变化 为80% ;于30?32分钟，流动相中乙腈的体积从20%变化为25%，磷酸盐缓冲液的体积 从80%变化为75% ;于32?35分钟，流动相中乙腈和磷酸盐缓冲液的体积各自回到初始 比例，色谱柱重新平衡；后运行2分钟,使色谱柱充分平衡。
3. 根据权利要求1或2所述的甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于：所述的磷 酸盐缓冲液的浓度为〇. 01?〇. 〇5mol/L，PH值为3. 5?5. 0。
4. 根据权利要求3所述的甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于：所述的磷酸盐 缓冲液的浓度为〇· 〇3mol/L，PH值为3. 5。
5. 根据权利要求1或2所述的甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于：所述的磷 酸盐缓冲液选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢胺、磷酸氢二胺中的一种 或几种。
6. 根据权利要求5所述的甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于：所述的磷酸盐 缓冲液选自磷酸二氢钠。
7. 根据权利要求1所述的甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于：所述的步骤 (1)、步骤⑵中的流动相是由乙腈与0. 03mol/L磷酸二氢钠溶液按照体积比19 :81的比例 混合而成。
8. 根据权利要求1所述的甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于：所述的色谱条 件为：固定相是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，流动相是由乙腈与磷酸盐缓冲 液组成的混合液；检测波长为342nm，进样量为20μ 1，柱温为30°C，流速为1. Oml/min ;梯 度洗脱。
【文档编号】G01N30/89GK104122363SQ201410288671
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2014年6月24日 优先权日:2014年6月24日
【发明者】徐春玲, 徐秀卉, 陆振宇, 宋远征, 姚丽萍, 蒋国潮, 徐鹏鹤, 丁忠海 申请人:杭州康恩贝制药有限公司