一种治疗风寒湿邪中药组合物的制备方法及检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种治疗风寒湿邪中药组合物的制备方法及检测方法，属于中药【技术领域】。该中药组合物由乌梢蛇、荆芥、防风、醋香附、独活、土鳖虫、威灵仙、桂枝、羌活、地龙、制川乌、制草乌组成，采用塑制与泛制联合应用技术，制成易于吞服的丸型，从而改善该药临床应用上的弊端。通过增加薄层色谱鉴别加强该组合物的检测，同时采用薄层色谱法改善了毒性成分乌头碱的限量对照品斑点瞬间消失或不出现的问题，采用高效液相色谱法对其主成分5-O-甲基维斯阿米醇苷测定方法进行了改进，解决了以合格原材料投产而含量不达标，有效成分转移率偏低的技术难点。本发明检测方法不仅适用于工业化生产，同时也为临床用药提供了一种安全有效的检测手段。
【专利说明】一种治疗风寒湿邪中药组合物的制备方法及检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药、天然药物【技术领域】，具体涉及一种治疗风寒湿邪中药组合物的 制备方法及检测方法。
【背景技术】
[0002] 风湿性疾病是一类侵犯多种组织多系统和内脏器官的自身免疫性疾病，可致各种 组织和器官损伤，严重影响其正常功能，甚至造成致命性损害。目前市场上应用最广泛的 是"散寒活络丸"，以追风散寒、舒筋活络为主要疗效的中药组合物，主要用于风寒湿邪引起 的肩背疼痛，手足麻木，腰腿疼痛，行步困难等。用于风寒湿邪引起的肩背疼痛，手足麻木， 腰腿疼痛，行步困难等。其处方由按重量份的乌梢蛇（去头尾）85. 8份，荆芥85. 8份，防风 85. 8份，醋香附68. 2份，独活68. 2份，土鳖虫68. 2份，威灵仙68. 2份，桂枝51. 2份，羌活 51. 2份，地龙51. 2份，制川乌34份，制草乌34份组成。
[0003] 该"散寒活络丸"是经过塑制法制成的每丸重9g的大蜜丸，其给药途径必须通过 咀嚼或研麿后才能吞服，且每次服用9g，服用量较大，随着人们对生活质量要求的不断提 高，越来越多的患者对这种服用方式望而怯步，临床应用上出现越来越多患者不愿意服用 的现象，使该药物发挥不了应有的价值。另该组合物药味较多，成份复杂，原标准收载的控 制项目针对处方药材荆芥、香附、制川乌、制草乌和防风进行控制。
[0004] 其中荆芥的薄层鉴别具体步骤如下：
[0005] 取本品适量（相当于原药材7g)，加乙酸乙酯30?60ml，加热回流30?90分钟， 滤过，滤液浓缩至lml，作为供试品溶液。另取荆芥对照药材lg，加乙酸乙酯10?50ml，同 法制成对照药材溶液，照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述 两种溶液各1?10 μ 1，分别点于同一娃胶G薄层板上，以石油醚（30?60°C )-乙酸乙酯 (4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药 材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0006] 其中香附的薄层鉴别具体步骤如下：
[0007] 取本品适量（相当于原药材7g)，加乙醚30?60ml，浸渍1?3小时，超声处理 10?30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加丙酮lml使溶解，作为供试品溶液。另取α -香附酮 对照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010 年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液5?10 μ 1、对照品溶液2?5 μ 1，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以石油醚（60?90°C)_乙酸乙酯（17:3?5)为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以2, 4-二硝基苯肼甲醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同 颜色的斑点。
[0008] 存在的问题：①对制川乌、制草乌中乌头碱限量检查定性控制项，以甲苯-乙酸乙 酯-二乙胺（14:4:1)为展开剂，以改良碘化铋钾试液为显色剂，结果对照品斑点显色极不 稳定，有时瞬间消失，重现性差，且比移值较低，达不到对处方毒性成分起到真正控制的作 用。②对防风中5-0-甲基维斯阿米醇苷定量控制项，样品的处理方法：采用水饱和正丁醇 提取，用正丁醇饱和的水洗涤去杂质，操作时样品溶液乳化严重，长时间很难分离，由于操 作性不强，导致5-0-甲基维斯阿米醇苷转移率偏低，加样回收率不到60%，起不到对防风 的质量控制作用。由于本品处方中毒性成分乌头碱限量及含量控制方法操作性不强，造成 本品生产及检验对该两项指标无法有效控制。从而影响了该产品的临床疗效的稳定发挥。
【发明内容】
[0009] 本发明提供一种治疗风寒湿邪中药组合物的制备方法及检测方法，以解决目前 "散寒活络丸"不方便服用、制剂不易成型、及检测方法落后的问题。
[0010] 本发明丸剂的制备方法包括以下步骤：
[0011] a)破粗粉：称取去头尾乌梢蛇85. 8份，荆芥85. 8份，防风85. 8份，醋香附68. 2 份，独活68. 2份，土鳖虫68. 2份，威灵仙68. 2份，桂枝51. 2份，羌活51. 2份，地龙51. 2份， 制川乌34份，制草乌34份净药材破碎成粗粉；
[0012] b)灭菌：取上述粗粉铺于全身带孔的托盘内，使物料温度为50?60°C，保温1? 3小时；
[0013] C)细粉碎：将灭菌后的药材粗粉粉碎成细粉，过100目筛，并批混45分钟，细粉备 用；
[0014] d)炼蜜：将生蜜进行炼制，去浮沫、死蜂和其它杂质，制成45?55%的炼蜜，备 用；
[0015] e)制丸：将上述细粉加炼蜜辅料制成大蜜丸、小蜜丸、水蜜丸、水丸或糊丸剂。 [0016] 上述制备步骤（e)中，水蜜丸的制备方法如下，用80%的药粉与浓度50%炼蜜合 培，每10(^粉末用50%炼蜜40?458，压制成0.158的丸模，铺于托盘内，厚度为不超过 2cm，经45?50°C干燥，检测丸模水分小于8%时，停止干燥，室温晾12小时，将丸模倒入泛 丸锅内，转动锅体使丸粒在锅内形成滚动运动时交替添加蜜水和药粉操作，当20%泛丸药 粉全部泛尽后，撒入少许活性炭粉末，使活性炭均匀分布于每粒丸粒表面至成丸，取出，干 燥；成丸干燥时先将干燥空间温度迅速升至80°C，并在80°C保温lOmin，中间翻盘1次，然 后将温度降至50?60°C干燥；中间进行翻盘；当水分在12%以下时停止干燥，室温晾丸24 小时后，将成丸倒入抛光锅内，转动锅体使丸粒在锅内形成滚动运动时加入少许虫白蜡粉 末进行抛光，室温晾丸24小时后包装，每袋装5. Og。
[0017] 按本发明所述的一种治疗风寒湿邪中药组合物的制备方法制备的丸剂的检测方 法，包括荆芥、香附、羌活、独活、桂枝的薄层鉴别方法、毒性成分乌头碱限量检查方法、防风 中5-0-甲基维斯阿米醇苷含量测定方法：
[0018] 其中所述的荆芥的薄层鉴别具体步骤如下：
[0019] 取本品10g，研细，加乙酸乙酯40ml，加热回流60分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作 为供试品溶液，另取荆芥对照药材lg，加乙酸乙酯20ml，同法制成对照药材溶液，照中国药 典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以30?60°C石油醚：乙酸乙酯=4:1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫 外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0020] 其中所述的香附的薄层鉴别具体步骤如下：
[0021] 取本品15g，研细，加乙醚50ml，浸渍1小时，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残 渣加丙酮lml使溶解，作为供试品溶液，另取α -香附酮对照品，加丙酮制成每lml含lmg 的溶液，作为对照品溶液，照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品 溶液5 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60?90°C石油醚：乙酸乙 酯17:3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2, 4-二硝基苯肼甲醇溶液，供试品色谱中，在与对 照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0022] 本发明所述桂枝的薄层鉴别具体步骤如下：
[0023] (a)取本品15g，研细，加乙酸乙脂10?30ml，回流提取30?60分钟，滤过，滤过， 滤液浓缩至lml，作为供试品溶液；
[0024] (b)对照品溶液的制备：取肉桂酸对照品，加乙酸乙酯制成每lml含0. 2mg的溶 液，作为对照品溶液；
[0025] (c)色谱条件与操作：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取 上述两种溶液各5?10 μ 1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环已烷：乙醚：冰醋酸= 5:6:0. 1为展开剂，展开，取出，晾干，在254nm紫外光灯下看荧光，供试品色谱中，在与对照 品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0026] 上述桂枝的薄层鉴别方法曾按2004年8月出版的辽宁中医药杂志第8期中收载 的槟榔七味丸质量标准中的肉桂的薄层鉴别方法，样品采用甲醇超声提取，碱性条件下乙 醚除杂，酸性条件下乙醚提取有效成分，本发明以正已烷：乙醚：冰醋酸=5:5:0. 1为展开 剂操作，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置无斑点出现；将样品的处理方法采用乙酸 乙酯直接回流制备，展开剂采用环已烷：乙醚：冰醋酸=5:6:0. 1操作，斑点清晰，同法制备 的阴性无干扰。
[0027] 本发明所述的羌活和独活的薄层鉴别具体步骤如下：
[0028] (a)取本品15g，研细，加乙醚80ml及1 %氢氧化钠溶液30?50ml，加热回流1小 时，滤过，分取乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯lml使溶解，作为供试品溶液；
[0029] (b)对照品溶液的制备：取独活与羌活对照药材各lg，加乙醚20ml及1 %氢氧 化钠溶液l〇ml，同法分别制成对照药材溶液，另取羌活醇对照品加乙酸乙酯制成每lml含 0. 5?1. Omg的溶液，作为对照品溶液；
[0030] (C)色谱条件与操作：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取 上述三种溶液各5?10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30?60°C石油醚：乙酸乙 酯：甲苯：冰醋酸=5:2:3:0. 1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供 试品色谱中，在与独活对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，再喷以茴香醛 试液，在105°C加热至显色，供试品色谱中，在与羌活对照药材及羌活醇对照品色谱相应的 位置上，应显相同颜色的斑点；
[0031] 上述羌活和独活的薄层鉴别其展开系统参考2006年7月山西中医学院学报第5 期出版的香樟风寒熨剂的薄层鉴别中独活的薄层鉴别的展开系统："正已烷-石油醚（30? 60°C )-乙酸乙酯（2:1:1)，完全按照此展开系统操作，供试品中的斑点分离度不好，将展开 系统以石油醚（30?60°C ):乙酸乙酯：甲苯：冰醋酸=5:2:3:0. 1展开，在荧光及显色剂 不同的观察条件下，供试品色谱中，羌活与独活两种药材的有效成分均能有效分离，现象明 显，易于判断。
[0032] 本发明所述的乌头碱限量检查具体步骤如下：
[0033] 取本品适量，研细，取10. 4g，加氨试液10ml，拌匀，放置1?3小时，加乙醚50? 70ml，振摇1小时，放置24小时，滤过，滤渣用乙醚10ml洗涤，洗液与滤液合并，低温蒸干， 残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取乌头碱对照品适量，加无水乙醇制成每 lml含1. Omg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试 验，精密吸取供试品溶液8 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲 烷：丙酮：甲醇=5 :1 :1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点，或不出现斑点。
[0034] 上述乌头碱限量检查采用原标准的展开系统"甲苯-乙酸乙酯-二乙胺=14 :4 : 1"与原显色剂"改良碘化铋钾"，结果对照品不出现斑点或出现瞬间就消失的斑点，致使生 产检验无法判断其产品是否为合格产品，通过对比性研究，现采用三氯甲烷：丙酮：甲醇= 5 :1 :1展开剂，以稀碘化铋钾试液显色解决了对照品斑点的问题，易于生产实际对产品的 分析判断。
[0035] 本发明所述的防风含量采用高效液相色谱法测定步骤如下：
[0036] (a)色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：水 =15 :85为流动相；检测波长为254nm，理论板数按5-0-甲基维斯阿米醇苷峰计算应不低 于 3000 ;
[0037] (b)对照品溶液的制备，取5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，精密称定，加甲醇 制成每lml含60 μ g的溶液，即得；
[0038] (c)供试品溶液的制备，取重量差异或装量差异项下的本品，研细，称取2. 8g，精 密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇l〇〇ml，称定重量，水浴加热回流1?3小时，放冷， 再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，蒸至近干，残渣加 甲醇5ml分次溶解，加在中性氧化铝柱上，该中性氧化铝的粒度100?200目、用量7g，柱内 径1. 5cm，用80 %甲醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸至近干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml容 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0039] (d)测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪， 测定，即得；
[0040] 本品含防风以5-0-甲基维斯阿米醇苷（C22H280 1Q)计，每袋不得少于0. 85mg。
[0041] 上述含量测定方法中，供试品的制备方法按原乙醚除杂，正丁醇超声提取制备样 品，其药材中5-0-甲基维斯阿米醇苷转移率为65%左右，致使合格的药材生产出不合格的 产品，采用中性氧化铝柱80%甲醇洗脱的处理方法，其药材转移率达95%以上。
[0042] 本发明采用塑制与泛制联合应用技术：①解决了处方药材本身粘性差、减少粘合 剂用量不宜易制剂成型的问题；②解决了 9g/丸太大，不方便服用问题，制成易于吞服的丸 粒；③解决了单次服用量过大问题，单次服用量由9g降低为3. 6?5g。从而改善该药临床 应用大蜜丸无法直接吞服、单次服用量为9g太大的弊端。另通过增加薄层色谱鉴别加强该 组合物的检测，同时采用薄层色谱法改善了毒性成分乌头碱的限量对照品斑点瞬间消失或 不出现的问题；采用高效液相色谱法对其主成分5-0-甲基维斯阿米醇苷测定方法进行了 改进；解决了以合格原材料投产而含量不达标，有效成分转移率偏低的技术难点，修订后的 工艺制备方法及质量控制方法，不仅适用于工业化生产，同时也为临床用药提供了一种安 全有效的控制方法。
[0043] 本发明的制备方法简单易行，适合于工业化大生产；检测方法专属性较强，重现性 好，经方法学验证，其准确性高，同时为工业化生产提供了一种科学、准确的检测方法。
【专利附图】
【附图说明】
[0044] 图1是本发明荆芥鉴别薄层色谱图；
[0045] 图2是本发明香附鉴别薄层色谱图；
[0046] 图3是本发明羌活和独活鉴别薄层荧光色谱图；
[0047] 图4是本发明羌活和独活鉴别薄层色谱图；
[0048] 图5是本发明桂枝鉴别薄层色谱图；
[0049] 图6是本发明乌头碱限量检查薄层色谱图；
[0050] 图7是本发明5-0-甲基维斯阿米醇苷紫外最大吸收光谱图；
[0051] 图8是本发明5-0-甲基维斯阿米醇苷含量标准曲线图；
[0052] 图9是本发明5-0-甲基维斯阿米醇苷含量空白溶液色谱图；
[0053] 图10是本发明5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品色谱图；
[0054] 图11是本发明5-0-甲基维斯阿米醇苷含量样品色谱图；
[0055] 图12是本发明5-0-甲基维斯阿米醇苷含量阴性对照色谱图。
【具体实施方式】
[0056] 实施例1水蜜丸的制备方法
[0057] (a)取去头尾乌梢蛇85. 8g，荆芥85. 8g，防风85. 8g，醋香附68. 2g，独活68. 2g， 土鳖虫68.2g，威灵仙68.2g，桂枝51.2g，羌活51.2g，地龙51.2g，制川乌34g，制草乌 34g，破碎成粗粉；
[0058] (b)灭菌：取上述粗粉铺于全身带孔的托盘内，粗粉厚度为5cm，设置温度为55°C， 保温2小时；
[0059] (c)细粉碎：将灭菌后的药材粗粉置粉碎机内粉碎成细粉，过100目筛，并批混45 分钟，混匀；
[0060] ⑷炼蜜：将生蜜进行炼制，去浮沫、死蜂和杂质，制成50%的炼蜜，备用；
[0061] (e)制丸：用80%的药粉与浓度50%炼蜜合挖，每100g粉末用50%炼蜜42g，压 制成〇. 15g的丸模，铺于托盘内，厚度为不超过2cm，经47°C干燥，检测丸模水分小于8%时， 停止干燥，室温晾12小时，将丸模倒入泛丸锅内，转动锅体使丸粒在锅内形成滚动运动时 交替添加蜜水和药粉操作，当20%泛丸药粉全部泛尽后，撒入少许活性炭粉末，使活性炭均 匀分布于每粒丸粒表面至成丸，取出，干燥；成丸干燥时先将干燥空间温度迅速升至80°C， 并在80°C保温lOmin，中间翻盘1次，然后将温度降至55°C干燥冲间进行翻盘；当水分在 12%以下时停止干燥，室温晾丸24小时后，将成丸倒入抛光锅内，转动锅体使丸粒在锅内 形成滚动运动时加入少许虫白蜡粉末进行抛光，室温晾丸24小时后包装，每袋装5. 0g。
[0062] 实施例2水蜜丸的制备方法
[0063] (a)取去头尾乌梢蛇85. 8g，荆芥85. 8g，防风85. 8g，醋香附68. 2g，独活68. 2g， 土鳖虫68.2g，威灵仙68.2g，桂枝51.2g，羌活51.2g，地龙51.2g，制川乌34g，制草乌 34g，破碎成粗粉；
[0064] (b)灭菌：取上述粗粉铺于全身带孔的托盘内，粗粉厚度为5cm，设置温度为50°C， 保温3小时；
[0065] (c)细粉碎：将灭菌后的药材粗粉置粉碎机内粉碎成细粉，过100目筛，并批混45 分钟，混匀；
[0066] ⑷炼蜜：将生蜜进行炼制，去浮沫、死蜂和杂质，制成45%的炼蜜，备用；
[0067] (e)制丸：用80%的药粉与浓度45%炼蜜合挖，每100g粉末用45%炼蜜40g，压 制成0. 15g的丸模，铺于托盘内，厚度为不超过2cm，经45°C干燥，检测丸模水分小于8%时， 停止干燥，室温晾12小时，将丸模倒入泛丸锅内，转动锅体使丸粒在锅内形成滚动运动时 交替添加蜜水和药粉操作，当20%泛丸药粉全部泛尽后，撒入少许活性炭粉末，使活性炭均 匀分布于每粒丸粒表面至成丸，取出，干燥；成丸干燥时先将干燥空间温度迅速升至80°C， 并在80°C保温lOmin，中间翻盘1次，然后将温度降至50°C干燥冲间进行翻盘；当水分在 12%以下时停止干燥，室温晾丸24小时后，将成丸倒入抛光锅内，转动锅体使丸粒在锅内 形成滚动运动时加入少许虫白蜡粉末进行抛光，室温晾丸24小时后包装，每袋装5. 0g。 [0068] 实施例3水蜜丸的制备方法
[0069] (a)取去头尾乌梢蛇85. 8g，荆芥85. 8g，防风85. 8g，醋香附68. 2g，独活68. 2g， 土鳖虫68.2g，威灵仙68.2g，桂枝51.2g，羌活51.2g，地龙51.2g，制川乌34g，制草乌 34g，破碎成粗粉；
[0070] (b)灭菌：取上述粗粉铺于全身带孔的托盘内，粗粉厚度为5cm，设置温度为60°C， 保温1小时；
[0071] (c)细粉碎：将灭菌后的药材粗粉置粉碎机内粉碎成细粉，过100目筛，并批混45 分钟，混匀；
[0072] (d)炼蜜：将生蜜进行炼制，去浮沫、死蜂和杂质，制成55%的炼蜜，备用；
[0073] (e)制丸：用80%的药粉与浓度55%炼蜜合挖，每100g粉末用55%炼蜜45g，压 制成0. 15g的丸模，铺于托盘内，厚度为不超过2cm，经50°C干燥，检测丸模水分小于8%时， 停止干燥，室温晾12小时，将丸模倒入泛丸锅内，转动锅体使丸粒在锅内形成滚动运动时 交替添加蜜水和药粉操作，当20%泛丸药粉全部泛尽后，撒入少许活性炭粉末，使活性炭均 匀分布于每粒丸粒表面至成丸，取出，干燥；成丸干燥时先将干燥空间温度迅速升至80°C， 并在80°C保温10min，中间翻盘1次，然后将温度降至60°C干燥冲间进行翻盘；当水分在 12%以下时停止干燥，室温晾丸24小时后，将成丸倒入抛光锅内，转动锅体使丸粒在锅内 形成滚动运动时加入少许虫白蜡粉末进行抛光，室温晾丸24小时后包装，每袋装5. 0g。
[0074] 实施例4按本发明所述的一种治疗风寒湿邪中药组合物的制备方法制备的丸剂 的检测方法，包括荆芥、香附、羌活、独活、桂枝的薄层鉴别方法、毒性成分乌头碱限量检查 方法、防风中5-0-甲基维斯阿米醇苷含量测定方法：
[0075] 其中所述的荆芥的薄层鉴别具体步骤如下：
[0076] 取本品10g，研细，加乙酸乙酯40ml，加热回流60分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作 为供试品溶液，另取荆芥对照药材lg，加乙酸乙酯20ml，同法制成对照药材溶液，照中国药 典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以30°C石油醚：乙酸乙酯=4:1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯 下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0077] 其中所述的香附的薄层鉴别具体步骤如下：
[0078] 取本品15g，研细，加乙醚50ml，浸渍1小时，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残 渣加丙酮lml使溶解，作为供试品溶液，另取α-香附酮对照品，加丙酮制成每lml含lmg 的溶液，作为对照品溶液，照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品 溶液5 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60°C石油醚：乙酸乙酯17:3 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2, 4-二硝基苯肼甲醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0079] 本发明所述桂枝的薄层鉴别具体步骤如下：
[0080] (a)取本品15g，研细，加乙酸乙脂10ml，回流提取30分钟，滤过，滤过，滤液浓缩至 lml,作为供试品溶液；
[0081] (b)对照品溶液的制备：取肉桂酸对照品，加乙酸乙酯制成每lml含0. 2mg的溶 液，作为对照品溶液；
[0082] (c)色谱条件与操作：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸 取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环已烷：乙醚：冰醋酸= 5:6:0. 1为展开剂，展开，取出，晾干，在254nm紫外光灯下看荧光，供试品色谱中，在与对照 品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0083] 上述桂枝的薄层鉴别方法曾按2004年8月出版的辽宁中医药杂志第8期中收载 的槟榔七味丸质量标准中的肉桂的薄层鉴别方法，样品采用甲醇超声提取，碱性条件下乙 醚除杂，酸性条件下乙醚提取有效成分，本发明以正已烷：乙醚：冰醋酸=5:5:0. 1为展开 剂操作，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置无斑点出现；将样品的处理方法采用乙酸 乙酯直接回流制备，展开剂采用环已烷：乙醚：冰醋酸=5:6:0. 1操作，斑点清晰，同法制备 的阴性无干扰。
[0084] 本发明所述的羌活和独活的薄层鉴别具体步骤如下：
[0085] (a)取本品15g，研细，加乙醚80ml及1%氢氧化钠溶液30ml，加热回流1小时，滤 过，分取乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯lml使溶解，作为供试品溶液；
[0086] (b)对照品溶液的制备：取独活与羌活对照药材各lg，加乙醚20ml及1 %氢氧 化钠溶液l〇ml，同法分别制成对照药材溶液，另取羌活醇对照品加乙酸乙酯制成每lml含 0. 5mg的溶液，作为对照品溶液；
[0087] (c)色谱条件与操作：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取 上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30°C石油醚：乙酸乙酯：甲苯：冰 醋酸=5:2:3:0. 1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在 与独活对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，再喷以茴香醛试液，在105°C 加热至显色，供试品色谱中，在与羌活对照药材及羌活醇对照品色谱相应的位置上，应显相 同颜色的斑点；
[0088] 上述羌活和独活的薄层鉴别其展开系统参考2006年7月山西中医学院学报第5 期出版的香樟风寒熨剂的薄层鉴别中独活的薄层鉴别的展开系统："正已烷-石油醚（30? 60°C )-乙酸乙酯（2:1:1)，完全按照此展开系统操作，供试品中的斑点分离度不好，将展开 系统以石油醚30°C ):乙酸乙酯：甲苯：冰醋酸=5:2:3:0. 1展开，在荧光及显色剂不同的 观察条件下，供试品色谱中，羌活与独活两种药材的有效成分均能有效分离，现象明显，易 于判断。
[0089] 本发明所述的乌头碱限量检查具体步骤如下：
[0090] 取本品适量，研细，取10. 4g，加氨试液10ml，拌匀，放置1小时，加乙醚50ml，振 摇1小时，放置24小时，滤过，滤渣用乙醚10ml洗涤，洗液与滤液合并，低温蒸干，残渣加 无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取乌头碱对照品适量，加无水乙醇制成每lml含 1. 〇mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，精密 吸取供试品溶液8 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷：丙酮： 甲醇=5 :1 :1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照 品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点，或不出现斑点。
[0091] 上述乌头碱限量检查采用原标准的展开系统"甲苯-乙酸乙酯-二乙胺=14 :4 : 1"与原显色剂"改良碘化铋钾"，结果对照品不出现斑点或出现瞬间就消失的斑点，致使生 产检验无法判断其产品是否为合格产品，通过对比性研究，现采用三氯甲烷：丙酮：甲醇= 5 :1 :1展开剂，以稀碘化铋钾试液显色解决了对照品斑点的问题，易于生产实际对产品的 分析判断。
[0092] 本发明所述的防风含量采用高效液相色谱法测定步骤如下：
[0093] (a)色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：水 =15 :85为流动相；检测波长为254nm，理论板数按5-0-甲基维斯阿米醇苷峰计算应不低 于 3000 ;
[0094] (b)对照品溶液的制备，取5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，精密称定，加甲醇 制成每lml含60 μ g的溶液，即得；
[0095] (c)供试品溶液的制备，取重量差异或装量差异项下的本品，研细，称取2. 8g，精 密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇l〇〇ml，称定重量，水浴加热回流1?3小时，放冷， 再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，蒸至近干，残渣加 甲醇5ml分次溶解，加在中性氧化铝柱上，该中性氧化铝的粒度100目、用量7g，柱内径 1. 5cm，用80 %甲醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸至近干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml容量瓶 中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0096] (d)测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪， 测定，即得；
[0097] 本品含防风以5-0-甲基维斯阿米醇苷（C22H280 1Q)计，每袋不得少于0. 85mg。
[0098] 上述含量测定方法中，供试品的制备方法按原乙醚除杂，正丁醇超声提取制备样 品，其药材中5-0-甲基维斯阿米醇苷转移率为65%左右，致使合格的药材生产出不合格的 产品，采用中性氧化铝柱80%甲醇洗脱的处理方法，其药材转移率达95%以上。
[0099] 实施例5按本发明所述的一种治疗风寒湿邪中药组合物的制备方法制备的丸剂 的检测方法，包括荆芥、香附、羌活、独活、桂枝的薄层鉴别方法、毒性成分乌头碱限量检查 方法、防风中5-0-甲基维斯阿米醇苷含量测定方法：
[0100] 其中所述的荆芥的薄层鉴别具体步骤如下：
[0101] 取本品l〇g，研细，加乙酸乙酯40ml，加热回流60分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作 为供试品溶液，另取荆芥对照药材lg，加乙酸乙酯20ml，同法制成对照药材溶液，照中国药 典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以45°C石油醚：乙酸乙酯=4:1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯 下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0102] 其中所述的香附的薄层鉴别具体步骤如下：
[0103] 取本品15g，研细，加乙醚50ml，浸渍1小时，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残 渣加丙酮lml使溶解，作为供试品溶液，另取α-香附酮对照品，加丙酮制成每lml含lmg 的溶液，作为对照品溶液，照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品 溶液5 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以75°C石油醚：乙酸乙酯17:3 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2, 4-二硝基苯肼甲醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0104] 本发明所述桂枝的薄层鉴别具体步骤如下：
[0105] (a)取本品15g，研细，加乙酸乙脂20ml，回流提取45分钟，滤过，滤过，滤液浓缩至 lml,作为供试品溶液；
[0106] (b)对照品溶液的制备：取肉桂酸对照品，加乙酸乙酯制成每lml含0. 2mg的溶 液，作为对照品溶液；
[0107] (c)色谱条件与操作：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸 取上述两种溶液各8 μ 1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环已烷：乙醚：冰醋酸= 5:6:0. 1为展开剂，展开，取出，晾干，在254nm紫外光灯下看荧光，供试品色谱中，在与对照 品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0108] 上述桂枝的薄层鉴别方法曾按2004年8月出版的辽宁中医药杂志第8期中收载 的槟榔七味丸质量标准中的肉桂的薄层鉴别方法，样品采用甲醇超声提取，碱性条件下乙 醚除杂，酸性条件下乙醚提取有效成分，本发明以正已烷：乙醚：冰醋酸=5:5:0. 1为展开 剂操作，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置无斑点出现；将样品的处理方法采用乙酸 乙酯直接回流制备，展开剂采用环已烷：乙醚：冰醋酸=5:6:0. 1操作，斑点清晰，同法制备 的阴性无干扰。
[0109] 本发明所述的羌活和独活的薄层鉴别具体步骤如下：
[0110] (a)取本品15g，研细，加乙醚80ml及1%氢氧化钠溶液40ml，加热回流1小时，滤 过，分取乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯lml使溶解，作为供试品溶液；
[0111] (b)对照品溶液的制备：取独活与羌活对照药材各lg，加乙醚20ml及1 %氢氧 化钠溶液l〇ml，同法分别制成对照药材溶液，另取羌活醇对照品加乙酸乙酯制成每lml含 0. 8mg的溶液，作为对照品溶液；
[0112] (c)色谱条件与操作：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取 上述三种溶液各8ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以45°C石油醚：乙酸乙酯：甲苯：冰 醋酸=5:2:3:0. 1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在 与独活对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，再喷以茴香醛试液，在105°C 加热至显色，供试品色谱中，在与羌活对照药材及羌活醇对照品色谱相应的位置上，应显相 同颜色的斑点；
[0113] 上述羌活和独活的薄层鉴别其展开系统参考2006年7月山西中医学院学报第5 期出版的香樟风寒熨剂的薄层鉴别中独活的薄层鉴别的展开系统："正已烷-石油醚（30? 60°C )-乙酸乙酯（2:1:1)，完全按照此展开系统操作，供试品中的斑点分离度不好，将展开 系统以石油醚45°C :乙酸乙酯：甲苯：冰醋酸=5:2:3:0. 1展开，在荧光及显色剂不同的观 察条件下，供试品色谱中，羌活与独活两种药材的有效成分均能有效分离，现象明显，易于 判断。
[0114] 本发明所述的乌头碱限量检查具体步骤如下：
[0115] 取本品适量，研细，取10. 4g，加氨试液10ml，拌匀，放置2小时，加乙醚60ml，振 摇1小时，放置24小时，滤过，滤渣用乙醚10ml洗涤，洗液与滤液合并，低温蒸干，残渣加 无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取乌头碱对照品适量，加无水乙醇制成每lml含 1. 〇mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，精密 吸取供试品溶液8 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷：丙酮： 甲醇=5 :1 :1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照 品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点，或不出现斑点。
[0116] 上述乌头碱限量检查采用原标准的展开系统"甲苯-乙酸乙酯-二乙胺=14 :4 : 1"与原显色剂"改良碘化铋钾"，结果对照品不出现斑点或出现瞬间就消失的斑点，致使生 产检验无法判断其产品是否为合格产品，通过对比性研究，现采用三氯甲烷：丙酮：甲醇= 5 :1 :1展开剂，以稀碘化铋钾试液显色解决了对照品斑点的问题，易于生产实际对产品的 分析判断。
[0117] 本发明所述的防风含量采用高效液相色谱法测定步骤如下：
[0118] (a)色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：水 =15 :85为流动相；检测波长为254nm，理论板数按5-0-甲基维斯阿米醇苷峰计算应不低 于 3000 ;
[0119] (b)对照品溶液的制备，取5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，精密称定，加甲醇 制成每lml含60 μ g的溶液，即得；
[0120] (c)供试品溶液的制备，取重量差异或装量差异项下的本品，研细，称取2. 8g，精 密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇l〇〇ml，称定重量，水浴加热回流1?3小时，放冷， 再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，蒸至近干，残渣加 甲醇5ml分次溶解，加在中性氧化铝柱上，该中性氧化铝的粒度160目、用量7g，柱内径 1. 5cm，用80 %甲醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸至近干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml容量瓶 中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0121] (d)测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪， 测定，即得；
[0122] 本品含防风以5-0-甲基维斯阿米醇苷（C22H280 1Q)计，每袋不得少于0. 85mg。
[0123] 上述含量测定方法中，供试品的制备方法按原乙醚除杂，正丁醇超声提取制备样 品，其药材中5-0-甲基维斯阿米醇苷转移率为65%左右，致使合格的药材生产出不合格的 产品，采用中性氧化铝柱80%甲醇洗脱的处理方法，其药材转移率达95%以上。
[0124] 实施例6按本发明所述的一种治疗风寒湿邪中药组合物的制备方法制备的丸剂 的检测方法，包括荆芥、香附、羌活、独活、桂枝的薄层鉴别方法、毒性成分乌头碱限量检查 方法、防风中5-0-甲基维斯阿米醇苷含量测定方法：
[0125] 其中所述的荆芥的薄层鉴别具体步骤如下：
[0126] 取本品10g，研细，加乙酸乙酯40ml，加热回流60分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作 为供试品溶液，另取荆芥对照药材lg，加乙酸乙酯20ml，同法制成对照药材溶液，照中国药 典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以60°C石油醚：乙酸乙酯=4:1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯 下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0127] 其中所述的香附的薄层鉴别具体步骤如下：
[0128] 取本品15g，研细，加乙醚50ml，浸渍1小时，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残 渣加丙酮lml使溶解，作为供试品溶液，另取α-香附酮对照品，加丙酮制成每lml含lmg 的溶液，作为对照品溶液，照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品 溶液5 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以90°C石油醚：乙酸乙酯17:3 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2, 4-二硝基苯肼甲醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0129] 本发明所述桂枝的薄层鉴别具体步骤如下：
[0130] (a)取本品15g，研细，加乙酸乙脂30ml，回流提取60分钟，滤过，滤过，滤液浓缩至 lml,作为供试品溶液；
[0131] (b)对照品溶液的制备：取肉桂酸对照品，加乙酸乙酯制成每lml含0. 2mg的溶 液，作为对照品溶液；
[0132] (c)色谱条件与操作：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸 取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环已烷：乙醚：冰醋酸= 5:6:0. 1为展开剂，展开，取出，晾干，在254nm紫外光灯下看荧光，供试品色谱中，在与对照 品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0133] 上述桂枝的薄层鉴别方法曾按2004年8月出版的辽宁中医药杂志第8期中收载 的槟榔七味丸质量标准中的肉桂的薄层鉴别方法，样品采用甲醇超声提取，碱性条件下乙 醚除杂，酸性条件下乙醚提取有效成分，本发明以正已烷：乙醚：冰醋酸=5:5:0. 1为展开 剂操作，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置无斑点出现；将样品的处理方法采用乙酸 乙酯直接回流制备，展开剂采用环已烷：乙醚：冰醋酸=5:6:0. 1操作，斑点清晰，同法制备 的阴性无干扰。
[0134] 本发明所述的羌活和独活的薄层鉴别具体步骤如下：
[0135] (a)取本品15g，研细，加乙醚80ml及1 %氢氧化钠溶液50ml，加热回流1小时，滤 过，分取乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯lml使溶解，作为供试品溶液；
[0136] (b)对照品溶液的制备：取独活与羌活对照药材各lg，加乙醚20ml及1 %氢氧 化钠溶液l〇ml，同法分别制成对照药材溶液，另取羌活醇对照品加乙酸乙酯制成每lml含 1. 〇mg的溶液，作为对照品溶液；
[0137] (c)色谱条件与操作：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取 上述三种溶液各l〇ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60°C石油醚：乙酸乙酯：甲苯：冰 醋酸=5:2:3:0. 1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在 与独活对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，再喷以茴香醛试液，在105°C 加热至显色，供试品色谱中，在与羌活对照药材及羌活醇对照品色谱相应的位置上，应显相 同颜色的斑点；
[0138] 上述羌活和独活的薄层鉴别其展开系统参考2006年7月山西中医学院学报第5 期出版的香樟风寒熨剂的薄层鉴别中独活的薄层鉴别的展开系统："正已烷-石油醚（30? 60°C )-乙酸乙酯（2:1:1)，完全按照此展开系统操作，供试品中的斑点分离度不好，将展开 系统以石油醚60°C乙酸乙酯：甲苯：冰醋酸=5:2:3:0. 1展开，在荧光及显色剂不同的观察 条件下，供试品色谱中，羌活与独活两种药材的有效成分均能有效分离，现象明显，易于判 断。
[0139] 本发明所述的乌头碱限量检查具体步骤如下：
[0140] 取本品适量，研细，取10. 4g，加氨试液10ml，拌勻，放置3小时，加乙醚70ml，振 摇1小时，放置24小时，滤过，滤渣用乙醚10ml洗涤，洗液与滤液合并，低温蒸干，残渣加 无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取乌头碱对照品适量，加无水乙醇制成每lml含 1. 〇mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，精密 吸取供试品溶液8 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷：丙酮： 甲醇=5 :1 :1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照 品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点，或不出现斑点。
[0141] 上述乌头碱限量检查采用原标准的展开系统"甲苯-乙酸乙酯-二乙胺=14 :4 : 1"与原显色剂"改良碘化铋钾"，结果对照品不出现斑点或出现瞬间就消失的斑点，致使生 产检验无法判断其产品是否为合格产品，通过对比性研究，现采用三氯甲烷：丙酮：甲醇= 5 :1 :1展开剂，以稀碘化铋钾试液显色解决了对照品斑点的问题，易于生产实际对产品的 分析判断。
[0142] 本发明所述的防风含量采用高效液相色谱法测定步骤如下：
[0143] (a)色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：水 =15 :85为流动相；检测波长为254nm，理论板数按5-0-甲基维斯阿米醇苷峰计算应不低 于 3000 ;
[0144] (b)对照品溶液的制备，取5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，精密称定，加甲醇 制成每lml含60 μ g的溶液，即得；
[0145] (c)供试品溶液的制备，取重量差异或装量差异项下的本品，研细，称取2. 8g，精 密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇l〇〇ml，称定重量，水浴加热回流3小时，放冷，再称 定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，精密量取续滤液50ml，蒸至近干，残渣加甲醇 5ml分次溶解，加在中性氧化铝柱上，该中性氧化铝的粒度200目、用量7g，柱内径1. 5cm，用 80%甲醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸至近干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲 醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0146] (d)测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪， 测定，即得；
[0147] 本品含防风以5-0-甲基维斯阿米醇苷（C22H280 1Q)计，每袋不得少于0· 85mg。
[0148] 上述含量测定方法中，供试品的制备方法按原乙醚除杂，正丁醇超声提取制备样 品，其药材中5-0-甲基维斯阿米醇苷转移率为65%左右，致使合格的药材生产出不合格的 产品，采用中性氧化铝柱80%甲醇洗脱的处理方法，其药材转移率达95%以上。
[0149] 试验例1 5-0-甲基维斯阿米醇苷含量检测方法的方法学研究
[0150] 仪器：Agilentl200高效液相色谱仪（G1311A四元梯度泵、G1329A自动进样器、 G1314B可变波长紫外检测器、G1322A真空脱气泵、G1316A柱温箱、G2170B化学工作站）、赛 多利斯BP211D电子天平。
[0151] 试剂：乙腈（色谱纯）、甲醇（分析纯）、正丁醇（分析纯）、水（纯化水），其它试 剂均为分析纯。
[0152] 对照品：5-0-甲基维斯阿米醇苷，供含量测定用，批号：111523-201007,中国食品 药品生物制品检定研究院提供。
[0153] 测定波长的选择取5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液适量，以溶剂为空白，在 200?400nm波长处扫描，确定的最大波长为254nm。结果见图7。
[0154] 线性关系的考察取5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品（176. Oug/ml)溶液精密吸取此 液lml、3ml、5ml、7ml、9ml分别至10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。再精密吸取10ul，分 别注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积积分值为纵坐标，5-0-甲基维斯阿米醇苷进样量 (μ g)为横坐标绘制标准曲线。结果见表1、附图8。
[0155] 表1 5-0-甲基维斯阿米醇苷标准曲线测定结果
[0156]
【权利要求】
1. 一种治疗风寒湿邪中药组合物的制备方法，其特征在于包括下列步骤： a) 破粗粉：称取去头尾乌梢蛇85. 8份，荆芥85. 8份，防风85. 8份，醋香附68. 2份，独 活68. 2份，土鳖虫68. 2份，威灵仙68. 2份，桂枝51. 2份，羌活51. 2份，地龙51. 2份，制川 乌34份，制草乌34份净药材破碎成粗粉； b) 灭菌：取上述粗粉铺于全身带孔的托盘内，使物料温度为50?60°C，保温1?3小 时； c) 细粉碎：将灭菌后的药材粗粉粉碎成细粉，过100目筛，并批混45分钟，细粉备用； d) 炼蜜：将生蜜进行炼制，去浮沫、死蜂和其它杂质，制成45?55%的炼蜜，备用； e) 制丸：将上述细粉加炼蜜辅料制成大蜜丸、小蜜丸、水蜜丸、水丸或糊丸剂。
2. 根据权利要求1所述的治疗风寒湿邪中药组合物的制备方法，其特征在于：步骤（e) 中，水蜜丸的制备方法如下，用80%的药粉与浓度50%炼蜜合坨，每100g粉末用50%炼蜜 40?45g,压制成0. 15g的丸模，铺于托盘内，厚度为不超过2cm，经45?50°C干燥，检测 丸模水分小于8%时，停止干燥，室温晾12小时，将丸模倒入泛丸锅内，转动锅体使丸粒在 锅内形成滚动运动时交替添加蜜水和药粉操作，当20%泛丸药粉全部泛尽后，撒入少许活 性炭粉末，使活性炭均匀分布于每粒丸粒表面至成丸，取出，干燥；成丸干燥时先将干燥空 间温度迅速升至80°C，并在80°C保温lOmin，中间翻盘1次，然后将温度降至50?60°C干 燥；中间进行翻盘；当水分在12 %以下时停止干燥，室温晾丸24小时后，将成丸倒入抛光锅 内，转动锅体使丸粒在锅内形成滚动运动时加入少许虫白蜡粉末进行抛光，室温晾丸24小 时后包装，每袋装5. 0g。
3. 按权利要求1或2所述的一种治疗风寒湿邪中药组合物的制备方法制备的丸剂的检 测方法，包括荆芥的薄层鉴别，具体步骤如下： 取本品l〇g，研细，加乙酸乙酯40ml，加热回流60分钟，滤过，滤液浓缩至lml，作为供试 品溶液，另取荆芥对照药材lg，加乙酸乙酯20ml，同法制成对照药材溶液，照中国药典2010 年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板 上，以30?60°C石油醚：乙酸乙酯=4:1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下 检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； 还包括香附的薄层鉴别，具体步骤如下： 取本品15g，研细，加乙醚50ml，浸渍1小时，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加 丙酮lml使溶解，作为供试品溶液，另取α -香附酮对照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶 液，作为对照品溶液，照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液 5 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一娃胶G薄层板上，以60?90°C石油醚：乙酸乙酯17:3 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2, 4-二硝基苯肼甲醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 其特征在于：还包括桂枝的薄层鉴别，具体步骤如下： (a) 取本品15g，研细，加乙酸乙脂10?30ml，回流提取30?60分钟，滤过，滤过，滤液 浓缩至lml，作为供试品溶液； (b) 对照品溶液的制备：取肉桂酸对照品，加乙酸乙酯制成每lml含0. 2mg的溶液，作 为对照品溶液； (c) 色谱条件与操作：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上 述两种溶液各5?10 μ 1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环已烷：乙醚：冰醋酸= 5:6:0. 1为展开剂，展开，取出，晾干，在254nm紫外光灯下看荧光，供试品色谱中，在与对照 品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； 还包括羌活和独活的薄层鉴别，具体步骤如下： (a) 取本品15g，研细，加乙醚80ml及1%氢氧化钠溶液30?50ml，加热回流1小时， 滤过，分取乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯lml使溶解，作为供试品溶液； (b) 对照品溶液的制备：取独活与羌活对照药材各lg，加乙醚20ml及1 %氢氧化钠溶 液l〇ml，同法分别制成对照药材溶液，另取羌活醇对照品加乙酸乙酯制成每lml含0. 5? 1. 〇mg的溶液，作为对照品溶液； (c) 色谱条件与操作：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述 三种溶液各5?10ul，分别点于同一娃胶G薄层板上，以30?60°C石油醚：乙酸乙酯：甲 苯：冰醋酸=5:2:3:0. 1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色 谱中，在与独活对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，再喷以茴香醛试液， 在105°C加热至显色，供试品色谱中，在与羌活对照药材及羌活醇对照品色谱相应的位置 上，应显相同颜色的斑点； 还包括乌头碱限量检查，具体步骤如下： 取本品适量，研细，取10. 4g，加氨试液10ml，拌匀，放置1?3小时，加乙醚50?70ml， 振摇1小时，放置24小时，滤过，滤渣用乙醚10ml洗涤，洗液与滤液合并，低温蒸干，残渣加 无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取乌头碱对照品适量，加无水乙醇制成每lml含 1. 〇mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，精密 吸取供试品溶液8μ 1、对照品溶液2μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷：丙酮： 甲醇=5 :1 :1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照 品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点，或不出现斑点； 还包括采用高效液相色谱法测定防风含量，步骤如下： (a) 色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：水= 15 :85为流动相；检测波长为254nm，理论板数按5-0-甲基维斯阿米醇苷峰计算应不低于 3000 ； (b) 对照品溶液的制备，取5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成 每lml含60 μ g的溶液，即得； (c) 供试品溶液的制备，取重量差异或装量差异项下的本品，研细，称取2. 8g，精密称 定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇l〇〇ml，称定重量，水浴加热回流1?3小时，放冷，再称 定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，蒸至近干，残渣加甲醇 5ml分次溶解，加在中性氧化铝柱上，该中性氧化铝的粒度100?200目、用量7g，柱内径 1. 5cm，用80 %甲醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸至近干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml容量瓶 中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； (d) 测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定， 即得。
【文档编号】G01N30/90GK104042824SQ201410299704
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年6月26日 优先权日:2014年6月26日
【发明者】王士青, 隋义东, 崔延辉, 陈希, 曹晓平 申请人:长春人民药业集团有限公司