膀胱肿瘤相关抗原检测试剂盒的制作方法

膀胱肿瘤相关抗原检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种膀胱肿瘤相关抗原检测试剂盒。试剂盒包含两株特异性膀胱肿瘤相关抗原(BTAA)单克隆抗体。多孔板上包被的单克隆抗体与辣根过氧化物酶(HRP)标记的单克隆抗体以及被测样本的膀胱肿瘤相关抗原形成“包被抗体-抗原-HRP标记抗体”的夹心复合物结构。HRP进而与底物反应产生信号，用以进行膀胱肿瘤相关抗原定量分析。通过本发明的试剂盒，使得能够迅速、灵敏地定量检测样本中的膀胱肿瘤相关抗原含量。
【专利说明】膀胱肿瘤相关抗原检测试剂盒

【技术领域】
[0001] 本发明属于分子免疫学领域，具体涉及检测样本中膀胱肿瘤相关抗原含量的试剂 盒。

【背景技术】
[0002] 膀胱癌是我国最常见的泌尿系肿瘤，大约90%的膀胱癌为膀胱尿路上皮癌。膀胱 癌的复发率很高，60% -70%的患者可能复发，11%复发的患者可进展为浸润性肿瘤。目前 对于膀胱癌诊断及随访主要依赖于膀胱镜检查和尿细胞学检查，患者依从性差，价格比较 昂贵，不易作为常规镜检；患者虽然特异度高且无创，但对低度表浅性的肿瘤敏感性低，容 易产生假阴性的结果。因此，寻找敏感度及特异度高的膀胱肿瘤标志物作为膀胱癌的早期 诊断、检测以及预后评估受到越来越多的关注。
[0003] 膀胱肿瘤是泌尿系统最常见的肿瘤，其中以膀胱移行细胞癌（bladder transitional cell carcinoma, BTCC最多见）。BTCC生物学行为复杂多变，表现为易复 发、多发、浸润和转移，所以这些因素容易影响到对膀胱癌的诊断和治疗。目前，膀胱癌的诊 断主要依靠尿脱落细胞学和膀胱镜检查，膀胱镜检查属于侵入性检查，患者较痛苦，某些情 况下尚有导致尿路感染的可能性，因而不适用于膀胱癌的群体性筛查。其他检查方法，如尿 脱落细胞学检查虽然特异度高，但是灵敏度较差，容易受到尿路感染等因素的干扰。一般来 讲，一种新的临床早期诊断和检测方法应该具有非侵入性的特点，同时具有较好的灵敏度 和特异度，并且兼顾操作简便，使用成本低。因此，寻找灵敏度高、特异度强，并且便于群体 性筛查的无创性检查方法是近年来膀胱癌临床研究的热点。
[0004] 建立一种简便快速、特异度强并且不具有侵入性的检查方法有利于膀胱癌的早期 诊断，对善预后以及检测复发都具有重要意义。


【发明内容】

[0005] 根据一些实施方式，提供了一种检测样本中膀胱肿瘤相关抗原的试剂盒，其包 含：
[0006] 包被有第一膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体的多孔板、
[0007] 样品稀释液、
[0008] 酶工作液、
[0009] 化学发光液。
[0010] 在一些实施方案中，包被有第一膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体的多孔板中第一膀 胱肿瘤相关抗原单克隆抗体由保藏号为CGMCC No. 9317或9318的杂交瘤细胞所产生。 [0011] 当多孔板上的单克隆抗体由保藏号为CGMCC No. 9317的杂交瘤细胞所产生时，则 酶工作液中的单克隆抗体由本发明的另一株杂交瘤细胞产生；反之亦然，当多孔板上的单 克隆抗体由保藏号为CGMCC No. 9318的杂交瘤细胞所产生时，则酶工作液中的单克隆抗体 由保藏号为CGMCC No. 9317的杂交瘤细胞产生。
[0012] 在一些实施方案中，样品稀释液包含氯化钠、山羊血清、吐温-20、和防腐剂。在具 体实施方案中，样品稀释液包含30g/L氯化钠、25ml/L山羊血清、5ml/L吐温-20和0. 5ml/ L Proclin-300。样本稀释液可以配制成浓缩型，也可以不是。技术人员可以理解，其它浓 缩倍数也包括在本发明范围内。
[0013] 在一些实施方案中，酶工作液包含磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、小牛血清、辣 根过氧化物酶标记的第二膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体和防腐剂。在一些实施方案中，第 二膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体由保藏号为CGMCC No. 9318或9317的杂交瘤细胞所产生。 在具体实施方案中，酶工作液包含5. 8g/L磷酸氢二钠、0. 593g/L磷酸二氢钠、8. Og/L氯化 钠、200ml/L小牛血清、0. 5ml/L Proclin-300和0. 4 mg/L辣根过氧化物酶标记的第二膀胱 肿瘤相关抗原单克隆抗体。
[0014] 在一些实施方案中，化学发光液包含化学发光液A和化学发光液B。所述化学发光 液A含有鲁米诺和发光增强剂。化学发光液B含有过氧化物和发光增强剂。
[0015] 应当理解，本发明的各试剂可以配制成浓缩型，也可以不是。在一些实施方案中， 一些试剂配制成浓缩型，这可以减少运输、储存体积。技术人员可以理解，除了具体实例以 外的其它浓缩倍数也包括在本发明范围内。
[0016] 在一些实施方案中，样本来自哺乳动物，优选来自人类。样本选自全血、血浆、和血 清。在具体实施方案中，样本为人尿液。
[0017] 在一些实施方案中，本发明的试剂盒还可以根据需要包括校准品。校准品用于标 准曲线的绘制。在具体实施方案中，校准品包含已知浓度的膀胱肿瘤相关抗原纯品，膀胱肿 瘤相关抗原的浓度在l〇ng/ml至4000ng/ml范围内。在具体实施方案中，校准品中膀胱肿 瘤相关抗原的分别浓度为400、200、50、10、5、0 ng/ml。技术人员理解，其它浓度同样适用， 例如只需三个浓度点就足以建立一条标准曲线。
[0018] 在一些实施方案中，本发明的试剂盒还可以根据需要包括质控品。在具体实施方 案中，质控品为已知膀胱肿瘤相关抗原浓度的高值尿液样本稀释而成。在具体实施方案中， 高值质控的浓度在160 ng/ml至240ng/ml范围内；低值质控的浓度在16 ng/ml至24ng/ ml范围内。
[0019] 根据一些实施方案，提供了一种膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体，其由保藏号为 CGMCC No. 9317的杂交瘤细胞所产生。
[0020] 根据另一些实施方案，提供了一种膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体，其由保藏号为 CGMCC No. 9318的杂交瘤细胞所产生。
[0021] 根据另一些实施方案，提供了选自如下一种或两种的膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗 体在制备检测试剂中的用途：由保藏号为CGMCC No. 9317的杂交瘤细胞所产生的膀胱肿瘤 相关抗原单克隆抗体、和由保藏号为CGMCC No. 9318的杂交瘤细胞所产生的膀胱肿瘤相关 抗原单克隆抗体。在一个具体实施方案中，保藏号为CGMCC No. 9317和9318的杂交瘤细胞 所产生两株单克隆抗体共同用于制备检测试剂。所述检测试剂选自ELISA检测试剂、免疫 比浊检测试剂、磁颗粒检测试剂、化学发光检测试剂、免疫荧光检测试剂和放射免疫检测试 齐?;优选化学发光检测试剂；更优选所述检测试剂为检测膀胱肿瘤相关抗原的检测试剂。
[0022] 根据一些实施方案，提供一种杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCCNo. 9317。根据另一些 实施方案，提供一种杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC No. 9318。

【专利附图】

【附图说明】
[0023] 图1 :采用本发明的试剂盒绘制的校准曲线。

【具体实施方式】
[0024] 为了使本发明易于理解，下面结合具体实施例进一步阐述本发明。以下提供了本 发明实施方式中所使用的具体材料及其来源。但是，应当理解的是，这些仅仅是示例性的， 并不意图限制本发明，与如下试剂和仪器的类型、型号、品质、性质或功能相同或相似的材 料均可以用于实施本发明。
[0025] 实施例1.单克隆抗体的制备与鉴定
[0026] 1.免疫 Balb/c 小鼠
[0027] 选取6周龄、体重约20g的雌性Balb/c小鼠，初次免疫，取Factor Η纯品（购自 Fitzgerald，目录号30C-CP2038U) 20-50 μ g加弗氏完全佐剂皮下多点注射，第14和28天 分别进行第二次和第三次免疫剂量同上，加弗氏不完全佐剂腹腔内注射，融合前3天加强 免疫，剂量20-50 μ g为宜，3天后，取脾融合。
[0028] 2.细胞融合的步骤
[0029] 制备饲养细胞层：取一只未免疫的Balb/c小鼠，6周龄，拉颈处死，浸泡在75%酒 精内5min，用无菌剪刀剪开皮肤，暴露腹膜，用无菌注射器注入6ml预冷的培养液（严禁刺 破肠管），反复冲洗，吸出冲洗液，冲洗液放入l〇ml离心管，1200 rpm/分离6min，用20% (v/v)胎牛血清（FCS)的培养液混悬，调整细胞数至lX105/ml，加入96孔板，100μ 1/孔， 放入37°C C02孵箱培养。
[0030] 制备免疫脾细胞：取免疫好的Balb/c小鼠，拉颈处死，无菌取脾脏，用10ml不完全 培养液洗一次，脾脏研碎，过200目细胞筛，将脾细胞转移至10ml离心管中，800rpm离心10 min，细胞用10ml培养液洗2次，细胞计数，取1 X 108脾淋巴细胞悬液备用。
[0031] 制备骨髓瘤细胞SP2/0 :取对数生长骨髓瘤细胞离心，用无血清培养液洗2次，计 数，取得5 X107细胞备用。
[0032] 细胞融合：将骨髓瘤细胞与脾细胞按1 :10的比例混合在一起，在50ml离心管中 用无血清不完全培养液洗1次，离心，1200rpm，8min ;弃上清，用吸管吸净残留液体，以免影 响聚乙二醇（PEG)浓度。轻轻弹击离心管底，使细胞沉淀略松动。
[0033] 加入37°C预温的lml 45% (g/100ml)PEG(分子量4000)溶液，边加边轻微摇动。 37°C水浴作用90s。加37°C预温的不完全培养液以终止PEG作用，每隔2min分别加入lml、 21111、31111、41111、51111和61111。离心，800印111，6111；[11。充上清，用含20 (%(￥八）小牛血清碰1'选择 培养液重悬。将上述细胞，加到已有饲养细胞层的96孔板内，每孔加100 μ 1。将培养板置 37°C、5% C02培养箱中培养。
[0034] 3.杂交瘤细胞的筛选
[0035] 脾细胞和骨髓瘤细胞融合后5天，形成多种细胞的混合体，补加 HAT培养基 100 μ 1，第10天换HT培养基培养。杂交瘤细胞布满孔底1/5面积时，即可采用间接CLIA 法检测培养上清，筛选阳性克隆。以Factor Η纯品（Fitzgerald)包被酶标板（5yg/ ml) 100 μ 1/孔，4°C过夜，将酶标板孔中的液体倒尽，加入PBST，重复洗涤三次；加入封闭液 200 μ 1/孔进行封闭，置于37°C，1小时。甩干封闭液，加入100 μ 1细胞培养上清，阳性对照 选小鼠的免疫血清，阴性对照选SP2/0培养上清，空白为洗涤液，于37°C静置2h。加入HRP 标记羊抗鼠二抗（1:5000) 100μ 1/孔，于37°C静置60min。加入PBST，重复洗涤三次；加入 底物反应液100 μ 1/孔，37°C置暗处反应10分钟。加入H2S04 (2mol/L) 50 μ 1/孔，终止反应。 酶标仪检测450nm吸光度值。以Factor Η纯品（Fitzgerald)为抗原，免疫小鼠，成功得到 2株分泌BTAA单克隆抗体的杂交瘤细胞株（编号12D4和11E9)，这二株单克隆抗体分别特 异性识别并结合Factor Η纯品（Fitzgerald)。
[0036] 4.杂交瘤的克隆化
[0037] 筛选得到的阳性克隆，采用有限稀释法对杂交瘤克隆化，克隆前1天制备饲养细 胞层，将要克隆的杂交瘤细胞用不完全培养基从培养孔内轻轻吹干，计数。调整细胞为5个 细胞/ml。取准备的饲养细胞层的细胞培养板，每孔加入稀释细胞ΙΟΟμΙ。孵育于37°C、 5% C02孵箱中。在第7天换液，以后每3天换液1次。9天可见细胞克隆形成，化学发光法 检测检测抗体效价。并将最强的阳性克隆再次克隆化，直至细胞阳性率达100%，即可定株； 定株的细胞扩大培养。并送保藏中心保藏。
[0038] 5.杂交瘤细胞的保藏
[0039] 将杂交瘤细胞株（分类名BTAA杂交瘤细胞株）于2014年6月16日保藏于中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（北京市朝阳区北辰西路1号院3号），保藏编 号分别为 CGMCC No. 9317、CGMCC No. 9318。
[0040] 实施例2.单克隆抗体的大量生产
[0041] 已具备两株单克隆抗体杂交瘤细胞株：取IX 1〇7的细胞浓度注射于Balb/c小鼠 腹腔，10天后收集腹水。通过以下步骤纯化单克隆抗体：
[0042] 1.收集所得的腹水以2500 rpm离心，取上清。加等体积的PBS(pH7. 4)与1/2体 积的饱和硫酸铵，4°C、静置30min ;
[0043] 2.以 3000 rpm，4。。，离心 20min ;
[0044] 3.去沉淀，上清加等体积的饱和硫酸铵，静置30min ;
[0045] 4.以 3000 rpm，4°C,离心 20min ;
[0046] 5.取沉淀，加5ml生理盐水与5ml饱和硫酸铵静置30min ;
[0047] 6.以 3000 rpm，4。〇，离心 20min ;
[0048] 7.沉淀加5ml生理盐水与5ml (λ 02M的PB缓冲液（PH7. 4);
[0049] 8.加8倍柱体积的ΡΒ缓冲液平衡Protein G凝胶柱（购自GE公司）；
[0050] 9.将第7步中的混合液加到凝胶柱中；
[0051] 10.使用10倍柱体积的PB缓冲液洗脱杂蛋白；
[0052] 11.用0. 2M pH2. 8甘氨酸缓冲液洗脱抗体并收集；
[0053] 12.使用再生液清洗柱子；
[0054] 13.加平衡液平衡柱子。
[0055] 实施例3.本发明膀胱肿瘤相关抗原的化学发光检测试剂盒的制备
[0056] 1.制备包被有膀胱肿瘤相关抗原单抗的多孔板：
[0057] a)包被：采用0. 05M、pH值为9. 6的碳酸盐缓冲液与适当浓度的实施例2制备的 膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体（CGMCC No. 9317)混合制成包被混合液，并将其加载于多孔 板上，4°C包被12h ;
[0058] 碳酸盐缓冲液标准配方：
[0059] 无水碳酸钠 1. 600g
[0060] 碳酸氢钠 2. 940g
[0061] pH值9. 60?9. 80纯化水定容至1000ml
[0062] b)洗板：稀释20倍浓缩洗液至1倍浓度，使用1倍浓度洗液洗板2次；20倍浓缩 洗液标准配方：
[0063] 氣化钠 90.000g 十二水合磷酸氢二钠 29._g -:水合磷酸二氣钠 2.970g 吐温 20 10.000ml pH位6.20-6.60 纯化水定容至1000ml
[0064] c)封闭：将封闭液（磷酸氢二钠5. 8g，磷酸二氢钠0. 593g，氯化钠8. 0g，山羊血清 100ml，Proclin-3000. 5ml，纯化水定容至1000ml)加载于多孔板上，室温2小时，甩干，干燥 过夜。
[0065] 2.酶工作液的制备：
[0066] 2. 1标记步骤：
[0067] (1)称取1 mg辣根过氧化物酶（HRP，购自Sigma)溶解于300 μ 1蒸馏水中。
[0068] (2)于上液中加入0· 6 μ 1新配的0· 1Μ NaI04溶液，室温下避光搅拌20分钟。
[0069] (3)将上述溶液装入透析袋中，使用ImM pH 4. 4的醋酸钠缓冲液透析，4°C过夜。
[0070] (4)加20 μ 1 1M pH 9. 5碳酸盐缓冲液，使HRP的pH升高到9. 0至9. 5,然后立即 加入1 mg本发明的另一株抗体（CGMCC No. 9318)(在lml 0· 01M碳酸盐缓冲液中），室温避 光轻轻搅拌2小时。
[0071] (5)加0· 05ml新配的4mg/ml NaBH4液，混勻，再置4°C 2小时。
[0072] (6)将上述液装入透析袋中，使用0· 15M pH7. 4 PBS透析，4°C过夜。
[0073] (7)加入等体积的甘油，-20°C保存，最终辣根过氧化物酶标抗体浓度为lmg/ml。
[0074] 2. 2酶标记抗体浓度确定：
[0075] 采用方针法选择酶标抗体的工作浓度，取2 μ 1酶标抗体（lmg/ml)加入到5ml酶 稀释液中，即1 :2500的比例。
[0076] 2. 3酶工作液的配制：
[0077] 将2. 1步骤中制备的辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体，以1 :2500的比例将酶标 抗体溶于酶缓冲液中。酶缓冲液配方为：5. 8g/L磷酸氢二钠、0. 593 g/L磷酸二氢钠、8. 0g/ L 氯化钠、200ml/L 小牛血清、0· 5 ml/LProclin-300)。
[0078] 3.样品稀释液的制备：
[0079] 1000ml样品稀释液包括30. 0g氯化钠、25. 0ml山羊血清、5. 0ml吐温-20、0. 5ml Proclin-300。
[0080] 4.化学发光液：化学发光液A和化学发光液B为外购试剂（购自：罗氏），其中化 学发光液A含有鲁米诺和发光增强剂，化学发光液B含有过氧化物和发光增强剂。或者根 据化学发光技术，自行配制。
[0081] 5.校准品的配制：
[0082] 用样品稀释液将Fitzgerald公司的Factor Η纯品稀释，使得校准品中的膀胱肿 瘤相关抗原浓度梯度分别为400、200、50、10、5、Ong/ml。
[0083] 根据需要，校准品可溯源至Fitzgerald公司的参考物质或者其它参考物质。
[0084] 6.质控品的配制：
[0085] 收集膀胱肿瘤相关抗原临床检测高值的人尿液样本（尿液可以是任何市售尿液 样本、或收集自临床机构），用样品稀释液稀释高值人尿液至期望的浓度范围内。高值质控： 160ng/ml 至 240ng/ml ;低值质控：16ng/ml 至 24ng/ml。2-8°C 保存备用。
[0086] 将上述各试剂组装成试剂盒，根据需要还可以在试剂盒中并入使用说明书、封板 膜等工具。
[0087] 测试例
[0088] 测试例1.本发明膀胱肿瘤相关抗原化学发光试剂盒的使用方法
[0089] 1. 1.实验前准备
[0090] 1. 1.自4°C冰箱中取出试剂盒，均应平衡到室温（18-25°C )。
[0091] 1. 2. 20倍浓缩洗涤液用纯化水或蒸馏水稀释20倍后使用。
[0092] 2.试验方法
[0093] 2. 1.加样温育：取足够数量的包被板，固定于框架上，分别设置校准品孔、质控品 孔和待测样品孔，记录各孔位置；在待测样品孔中加入45 μ 1样品稀释液，按顺序在校准品 孔中加入校准品50μ 1，在质控品孔加入质控品50μ 1，在样品孔中分别加入5μ 1的待测样 品（等同于样本进行了 10倍稀释）。每孔加入酶工作液50 μ 1 (建议在20min内完成此步 操作），震荡混匀，加盖封板膜，37°C温育30min。
[0094] 注：校准品和质控品无需稀释，可直接使用。
[0095] 2. 2.洗板：
[0096] 手工洗板：每孔加入350 μ 1洗液，静置5-10秒后弃尽，重复冲洗5次后，拍干；
[0097] 洗板机洗板：每孔加入350 μ 1洗液，每次洗涤间隔5-10秒，重复冲洗5次后，拍 干。
[0098] 2. 3.发光：每孔加入50 μ 1化学发光液Α和50 μ 1化学发光液Β，充分混勻后读 数。
[0099] 2. 4.测定：立即置化学发光仪下测定RLU值。
[0100] 2. 5.计算：根据校准品的浓度及对应的RLU值，以校准品S0孔调零，使用双对数 线性拟合方式（log(X)-log(Y))计算结果，结果乘以稀释倍数（10倍），即为样品最终浓度。
[0101] 线性方程为 log(RLU) = 4. 513+1. 065 log (浓度）；r = 1. 00。
[0102] 浓度 RLU Ong/ml 44396 5ng/ml 177976 1Ong/ml 375563 50 ng/ml 21960B7 200ng/ml 9266176 400ng/ml 18709627
[0103] 测试例2.本发明试剂盒的方法学指标
[0104] 1.准确度：回收率应在85%至115%之间；
[0105] 2.空白检出限：应不高于1 ng/ml ;
[0106] 3.测量系统的线性：在10ng/ml至4000ng/ml范围内线性相关系数r彡0. 9900。
[0107] 4.重复性：批内变异系数CV批内应不超过10% ;
[0108] 5.批间差：批间变异系数不超过15% ;
[0109] 表1.准确性、最低检出限、系统线性、重复性检测结果
[0110]

【权利要求】
1. 一种检测样本中膀胱肿瘤相关抗原的试剂盒，其包含： 包被有第一膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体的多孔板、 样品稀释液、 酶工作液、 化学发光液； 其中： 样品稀释液包含：氯化钠、山羊血清、吐温-20、和防腐剂； 酶工作液包含：磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、小牛血清、辣根过氧化物酶标记的第 二膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体和防腐剂； 化学发光液包含：化学发光液A和化学发光液B ;所述化学发光液A含有鲁米诺和发光 增强剂，化学发光液B含有过氧化物和发光增强剂； 当所述第一膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体由保藏号为CGMCC No. 9317的杂交瘤细胞所 产生时，第二膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体由保藏号为CGMCC No. 9318的杂交瘤细胞所产 生，或者当所述第一膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体由保藏号为CGMCC No. 9318的杂交瘤细 胞所产生时，第二膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体由保藏号为CGMCC No. 9317的杂交瘤细胞 所产生； 样本来自哺乳动物，优选人类；样本优选为人尿液。
2. 根据权利要求1所述的检测样本中膀胱肿瘤相关抗原的试剂盒，还包括校准品， 校准品包含已知浓度的膀胱肿瘤相关抗原纯品，膀胱肿瘤相关抗原的浓度在l〇ng/ml 至4000ng/ml范围内。
3. 根据权利要求1所述的检测样本中膀胱肿瘤相关抗原的试剂盒，还包括质控品， 质控品为已知膀胱肿瘤相关抗原浓度的高值尿液样本稀释而成。
4. 一种检测样本中膀胱肿瘤相关抗原的CLIA试剂盒，其包含： 包被有第一膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体的多孔板、 样品稀释液、 酶工作液、 化学发光液； 其中： 样品稀释液包含：30g/L氯化钠、25ml/L山羊血清、5ml/L吐温-20和0. 5ml/L Proclin-300 ； 酶工作液包含：5. 8g/L磷酸氢二钠、0. 593g/L磷酸二氢钠、8. 0g/L氯化钠、200ml/L小 牛血清、0. 5ml/L Proclin-300、和0. 4 mg/L辣根过氧化物酶标记的第二膀胱肿瘤相关抗原 单克隆抗体； 化学发光液由化学发光液A和化学发光液B组成；所述化学发光液A含有鲁米诺和发 光增强剂，化学发光液B含有过氧化物和发光增强剂； 当所述第一膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体由保藏号为CGMCC No. 9317的杂交瘤细胞所 产生时，第二膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体由保藏号为CGMCC No. 9318的杂交瘤细胞所产 生，或者当所述第一膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体由保藏号为CGMCC No. 9318的杂交瘤细 胞所产生时，第二膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体由保藏号为CGMCC No. 9317的杂交瘤细胞 所产生。
5. -种膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体，其由保藏号为CGMCC No. 9317的杂交瘤细胞所 产生。
6. -种膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体,其由保藏号为CGMCC No. 9318的杂交瘤细胞所 产生。
7. 选自如下一种或两种的膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体在制备检测试剂中的用途： 由保藏号为CGMCC No. 9317的杂交瘤细胞所产生的膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体、和 由保藏号为CGMCC No. 9318的杂交瘤细胞所产生的膀胱肿瘤相关抗原单克隆抗体； 所述检测试剂选自：ELISA检测试剂、免疫比浊检测试剂、磁颗粒检测试剂、化学发光 检测试剂、免疫荧光检测试剂和放射免疫检测试剂，优选化学发光检测试剂； 所述检测试剂优选为检测膀胱肿瘤相关抗原的检测试剂。
8. -种杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC No. 9317的杂交瘤细胞。
9. 一种杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC No. 9318的杂交瘤细胞。
【文档编号】G01N33/577GK104142401SQ201410359816
【公开日】2014年11月12日 申请日期:2014年7月25日 优先权日:2014年7月25日
【发明者】于晖, 李雨心, 陈勤慧, 王旭, 刘洋 申请人:北京普恩光德生物科技开发有限公司