预测巨大肝癌患者术后近期复发转移概率的模型及方法
【专利摘要】本发明涉及一种预测巨大肝癌患者术后近期复发转移概率的数学模型及方法。所述数学模型为：P＝1/(1+Y)，P为巨大肝癌患者术后近期复发转移概率，且P为6个月内的复发转移概率时：Y＝exp(4.092+2.073*X12-2.719*X14-2.58*X17+3.039*X19)；P为6～12个月的复发转移概率时，Y＝e?xp(2.528+1.633*X8+0.971*X12-1.517*X17)。本发明的有益效果主要体现在：从多因素、多蛋白综合分析巨大肝癌近期复发转移相关的多个指标，并通过预测模型达到预测术后近期复发转移的效果，对临床实践及治疗方案个体化选择具有重大意义。
【专利说明】预测巨大肝癌患者术后近期复发转移概率的模型及方法
(—)
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种用于预测巨大肝癌患者术后近期复发转移概率的数学模型及方法。
(二)
【背景技术】
[0002]肝细胞癌位居全球恶性肿瘤发病率第5位，死亡率居全球恶性肿瘤死因的第3位(Jemal A, Siegel R, Ward E, et al.Cancer statistics,2008.Cancer J Clin,2008 ；58:71-96)，我国是肝癌大国，每年大约有45万的肝癌新发病例，并已成为癌症导致患者死亡的第2位杀手(张伟东，苗国军；我国恶性肿瘤死亡率流行病学特征分析；中国健康教育，2009，25:246-248)，尤其是巨大肝癌。
[0003]巨大肝癌指的是直径大于1cm的肝癌亚型。目前手术切除治疗是巨大肝癌患者的首选方案，但术后易转移复发、预后差是巨大肝癌治疗效果差且致死率高的主要原因。统计数据表明，巨大肝癌术后5年之内复发的概率达到70%。研究表明，巨大肝癌术后复发转移最早可在术后2个月以内；术后I?2年为复发转移的高发期。Shimul等报道56例巨大肝癌根治术后复发病人，I年内复发21例(38% )，1年后复发31例(55%);并发现复发后生存率与复发时间密切相关:术后I年内复发者3年生存率显著低于I年后复发者(参考文献:Shimul A Shah, Paul D Greig, Steven Gallinger, et al.Factors associatedwith early recurrence after resect1n for hepatocellular carcinoa and outcomes.J Am Coll Surg, 2005，10(5):275-283.)。Hayashi等观察了肝癌术后复发时间与预后间的关系，I年内复发患者1、3、5年生存率分别为75.7%、36.6%和28.3%，远低于2年后复发的生存率(1、3、5年生存率分别为100%、92.2%和68.6% )(参考文献=Hayashi M，Shimizu T,Hirokawa F,et al.Clinicopathological risk factors for recurrence withone year after initial hepatectomy for hepatocellular carcinoma.J Am Surg,2011,77(5):572-578.)。可见肝癌术后I年内复发的比例较高，且对生存率有明显影响。但复发转移的机制还没有被明确阐明使临床缺少巨大肝癌预后判断指标和相应的治疗手段。
[0004]目前，有关巨大肝癌术后复发转移的相关因素分析比较多，但多数以单因素进行，这虽然在一定程度上给出了相对准确的判定，但仍属局限、片面；而肝癌术后复发是一个多因素的复杂的病理过程，在此过程中，蛋白分子特征决定了肝癌的生物学行为，迄今为止，尚未有相关文献报道巨块型肝癌术后近期复发转移的多因素、多蛋白的数学预测模型，若能从多因素、多蛋白综合分析肝癌复发转移相关的多个指标，建立巨大肝癌复发转移的数学预测模型，为临床个体化治疗、预测术后疗效提供理论和实验依据。
(三)
【发明内容】
[0005]本发明目的是提供一种预测巨大肝癌患者术后近期复发转移概率的数学模型及方法。
[0006]本发明采用的技术方案是:
[0007]—种用于预测巨大肝癌患者术后复发转移概率的数学模型P = 1/(1+Y)，P为巨大肝癌患者术后近期复发转移概率，且P为6个月内的复发转移概率时:Y = exp (4.092+2.073*Χ12-2.719*Χ14-2.58*Χ17+3.039*Χ19) ;Ρ 为 6 ~12 个月的复发转移概率时，Y = e xp (2? 528+1.633*Χ8+0.971*Χ12_1.517*Χ17);其中Χ8为术中癌栓，若有术中癌栓则Χ8 = 1、若无则X8 = O ；X12为肿瘤分级，肿瘤分级为I级时X12 = UI1-1II级时X12 = 2、IV级时X12=3 ；X14为IQGAP-2蛋白免疫组化表达情况，高表达时X14 = 2、低表达时X14 = I ；X17为S100A12蛋白免疫组化表达情况，高表达时X17 = 2、低表达时X17 = I ；X19为AP0A2蛋白免疫组化表达情况，高表达时X19 = 2、低表达时X19 = I。
[0008]本发明人通过收集巨块型肝癌根治性切除术的标本，采用病例对照研究方法，所有病例手术切除前未经任何放疗和化疗，并通过病理证实为肝细胞肝癌。根据6个月内复发组(A组)及6~12个月复发组(B组)为实验组，12个月内未复发组作为对照组，对其临床病理因素进行单因素、多因素分析(各因素统计变量赋值见下表)，筛选出影响巨块型肝癌术后近期复发转移的独立危险因素。结合通过蛋白组学筛选出复发转移相关的差异蛋白，通过免疫组织化学检测蛋白的相对表达量，通过多因素logistic回归分析，得出一个预测巨块型肝癌术后近期复发转移的数学方程，通过回代性分析判断该方程的灵敏度、准确度、特异性，判断该方程能够预测巨块型肝癌术后近期复发转移。
[0009]各因素的统计变量赋值
[0010]
【权利要求】
1.一种用于预测巨大肝癌患者术后复发转移概率的数学模型P = ι/α+γ)，P为巨大肝癌患者术后近期复发转移概率，且P为6个月内的复发转移概率时:Y = exp (4.092+2.073*Χ12-2.719*Χ14-2.58*Χ17+3.039*Χ19) ；Ρ 为 6-12 个月的复发转移概率时，Y = e xp (2.528+1.633*Χ8+0.971*Χ12_1.517*Χ17);其中 Χ8 为术中癌栓，若有则 Χ8 = 1、若无则 X8 = O ；X12 为肿瘤分级，I 级时 X12 = 1、I1-1II 级时 X12 = 2、IV 级时 X12 = 3 ；X14 为 IQGAP-2蛋白免疫组化表达情况，高表达时X14 = 2、低表达时X14 = I ；X17为S100A12蛋白免疫组化表达情况，高表达时X17 = 2、低表达时X17 = I ；X19为APOA2蛋白免疫组化表达情况，高表达时X19 = 2、低表达时X19 = I。
2.一种预测巨大肝癌患者术后近期复发转移概率的方法，所述方法包括: (1)取巨大肝癌患者活检组织或术中、术后的病理取材作为病理标本，并对病理标本的术中癌栓、肿瘤分级情况进行记录分析； (2)采用免疫组化SP染色法，分别获得病理标本IQGAP-2蛋白的免疫组化评分、S100A12蛋白的免疫组化评分和APOA12蛋白的免疫组化评分； (3)将上述取值分别代入6个月内的复发转移概率数学模型P= I/ (1+Y), Y = exp (4.092+2.073*X12-2.719*X14_2.58*X17+3.039*X19);和 6 ?12 个月的复发转移概率数学模型 P = 1/(1+Y)，Y = e xp (2.528+1.633*Χ8+0.971*Χ12_1.517*Χ17)，分别进行计算获得 6个月内和6?12个月的复发转移概率；其中Χ8为术中癌栓，若有则Χ8 = 1、若无则Χ8 =O ；Χ12 为肿瘤分级，I 级时 Χ12 = UI1-1II 级时 Χ12 = 2、IV 级时 Χ12 = 3 ；X14 为 IQGAP-2蛋白免疫组化表达情况，高表达时X14 = 2、低表达时X14 = I ；X17为S100A12蛋白免疫组化表达情况，高表达时X17 = 2、低表达时X17 = I ；X19为APOA2蛋白免疫组化表达情况，高表达时X19 = 2、低表达时X19 = I。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述免疫组化SP染色法方法如下: (a)取病理标本制备肝癌组织石蜡切片，60°C烤箱过夜； (b)切片脱腊；二甲苯I:10min ;二甲苯 II:10min ;二甲苯 III:10min ； (c)切片水化；依次浸泡:无水乙醇:3min;90%乙醇:3min ;80%乙醇:3min ;75%乙醇:3min ； (d)PBS清洗3次,每次5min ； (e)EDTA抗原高压修复:切片放入0.0lM EDTA修复液浸泡，沸水浴5min，冷却至室温，PBS清洗3次,每次5min ； (f)加入300μ L的3%过氧化氢水溶液，370C 1min, PBS清洗3次，每次5min ； (g)加入300μ L的3% BSA封闭液，37°C Ih ；PBS清洗3次，每次5min ； (h)加入一抗，相应蛋白的一抗抗体浓度如下:IQGAP-2蛋白抗体浓度为1:300，S100A12蛋白的抗体浓度为1:50，APOA2蛋白抗体浓度为1:300 ;4°C冰箱放置16h后取出，室温复温15min，然后PBS洗4次，每次5min ； (i)滴加二抗，所述的二抗为辣根过氧化物酶标记的相应二抗，37°C45min ;PBS洗4次，每次5min ； (j)PBS洗3次，每次5min ；DAB显色2?lOmin，镜下观察；双蒸水洗止显色，苏木素复染10s，用自来水冲洗浸泡； (k)脱水；依次浸泡:75%乙醇:2min ;80%乙醇:2min ;90%乙醇:2min ;无水乙醇:2min ； (I)用电吹风吹干，加入中性树胶，盖玻片覆盖； (m)以染色强度和阳性细胞率的得分之和作为判断标准:根据染色强度分为四级，细胞无染色记O分，弱染色记I分，中等染色记2分，强染色记3分；根据阳性细胞率也分为四级，O彡阳性细胞率彡5%记为O分，5% <阳性细胞率彡25%记为I分，25% <阳性细胞率(50%记为2分，阳性细胞率> 50%记为3分；上述两项积分相加，O分为阴性，I?2分为弱阳性，3?4分为中等阳性，5?6分为强阳性，将阴性和弱阳性定义为低表达，中等阳性和强阳性则为高表达。
【文档编号】G01N33/574GK104200060SQ201410368338
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年7月30日 优先权日:2014年7月30日
【发明者】刘景丰, 黄爱民, 刘小龙, 林承杰 申请人:福建医科大学附属第一医院, 福州市传染病医院