一种四制香附饮片的质量控制方法
【专利摘要】本发明公开了一种四制香附饮片的质量控制方法，本发明建立四制香附HPLC指纹图谱，以活性成分α-香附酮为基准峰，计算基准峰中α-香附酮的含量，其它主要活性成分的指纹峰以α-香附酮为参照，计算每个活性成分指纹峰以α-香附酮计的相对含量。本发明的方法具有可操作性，仅需用一个已知的对照品α-香附酮成分含量即可控制其他未知主要有效成分的相对含量，达到控制四制香附饮片质量的一种科学方法。该方法简单，易于推广，减少了对照品的使用量，解决了市场单体物质对照品不足且昂贵的问题，使四制香附饮片质量稳定，药效作用增强，有助于推动中药产业快速发展。
【专利说明】一种四制香附饮片的质量控制方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药质量控制【技术领域】，尤其涉及一种四制香附饮片的质量控制方 法。
【背景技术】
[0002] 香附为莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根莖。始载于《名医别录》， 具有疏肝理气、调经止痛的功效，为妇科调经止痛的要药，素有"气病之总司，女科之主帅" 之美称，临床用于治疗痛经、月经失调、功能性子宫出血等多种妇科疾病。由于香附炮制前 后药理作用及化学成分发生较大变化，因此临床多以炮制品入药。
[0003] 中药炮制是一门古老的制药技术，现有许多传统炮制工艺仍主要以经验继承为 主，缺乏现代科学技术手段的深入研究，导致饮片质量难以控制，无法与大生产及现代中医 药的发展相适应。为了统一炮制技术与现代中药炮制发展的步伐，本发明将现代工艺技术 与传统方法有机融合，传统炮制理论与现代科学内涵相辅相成，可为传统流派工艺的现代 传承和发展奠定坚实的基础。
[0004] 香附的炮制目的主要是减少苦味及香燥之气，提高疗效，改变或增强药物作用的 部位和趋向。随着中药炮制的发展，由于南北用药习惯的不同，古代众多的香附炮制方法或 失传或进一步发展，导致了现今香附炮制"各地各法，一药数法"的局面，据文献报道沿用 的炮制方法有醋制、酒制、四制香附、七制香附、蜜制、制炭、姜制、盐制等20余种之多。在江 西、福建、台湾等周边地区，习用四制法炮制香附，炮制工艺独具特色，在药界享有很高的声 誉，但炮制技术仍主要以经验继承为主，缺乏现代科学技术手段的质量控制方法，无法做到 "质量稳定、工艺规范、饮片可控"，这在很大程度上限制了其独特炮制技术的传承与推广应 用。
[0005] 为此，采用现代科学技术手段与方法对四制香附饮片进行质量控制，实现四制香 附的规模化生产，推动中药产业快速发展，这是传承与发展中药传统炮制工艺的需要，也是 保证中药炮制饮片做到"质量稳定、工艺规范、饮片可控"的关键所在。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种四制香附饮片的质量控制方法。通过采用多种化 学模式识别技术，结合药理效应研究，探明谱-效关系并分离出效应成分，获得多个单体 化合物，通过药理试验确认主要活性效应成分物质有5种，其保留时间分别为：16. lmin、 18. 5min、24. 9min、29. 5min和30. 5min，并以已确认的5个主要活性成分为饮片质量控制指 标，制定四制香附饮片质量控制方法，规范炮制关键技术参数，利于工业化生产质量控制， 确保临床用药的有效性。本发明旨在宏扬传统炮制技术，推进四制香附的标准化、规范化及 工业化生产的进程，促进其大规模地推广应用。
[0007] 本发明采用如下技术方案：
[0008] 本发明的四制香附饮片的质量控制方法如下：
[0009] (1)高效液相色谱法测定条件：
[0010] 色谱柱：Diamonsil C18 ;检测波长：220-280nm ;流速：0· 5-1. 5mL/min ;进样量： 20 μ L ;柱温：室温；流动相：甲醇和重蒸馏水；洗脱程序：梯度洗脱；
[0011] ⑵对照品溶液的制备：
[0012] 精密量取α-香附酮对照品〇.〇5mL，置于10mL容量瓶中，用95%乙醇稀释至刻 度，摇匀，即得浓度为5ug/mL对照品溶液；
[0013] (3)标准方程的建立：
[0014] 精密吸取对照品溶液配制成系列浓度，注入液相色谱仪，按步骤（1)的色 谱条件分析，测定峰面积，以对照品量为横坐标，峰面积值为纵坐标得标准方程y = 136.75x+3. 5384,R = 0.9996 ；
[0015] (4)供试品溶液的制备：
[0016] 取四制香附粗粉4g，加入95%乙醇32mL，加热回流提取3次，每次2h，合并滤液定 容至100mL，得四制香附药材液，用0. 45 μ m的微孔滤膜过滤，得供试品溶液；
[0017] (5)HPLC指纹图谱的建立：
[0018] 对供试品进行色谱分析，按步骤（1)的色谱条件分析，得到5种主要有效成分，建 立HPLC指纹图谱，以α -香附酮为基准峰作为参照峰，对已探明的主要有效成分指纹峰进 行相对含量测定，根据计算公式：指纹峰相对含量=(指纹峰峰面积/基准峰峰面积）X基 准峰含量，获得主要有效成分指纹峰相对含量，建立5种效应成分的定量方法。该方法的方 法学考察试验结果均表明：5个效应成分指纹峰的保留时间和峰面积RSD均小于5%，表明 仪器精密度、检测方法的重现性、样品溶液在24小时内的稳定性等均良好。
[0019] 步骤（1)中，色谱柱：Diamonsil C18 的规格为 250X4. 6mm，5ul。
[0020] 步骤⑴中，优选检测波长：12〇nm ;流速：1. OmL/min。
[0021] 步骤⑴中，流动相：甲醇㈧和重蒸馏水⑶梯度洗脱的体积比为：〇_l〇min， 30% -70% A 和 70% -30% B ;10-45min，70% -100% A 和 30% -0% B。
[0022] 步骤（1)中，梯度洗脱的方法如下表所示：
[0023]
【权利要求】
1. 一种四制香附饮片的质量控制方法，其特征在于：所述方法如下： (1) 高效液相色谱法测定条件： 色谱柱：Diamonsil C18 ;检测波长：220-280nm ;流速：0· 5-1. 5mL/min ;进样量： 20 μ L ;柱温：室温；流动相：甲醇和重蒸馏水；梯度洗脱； (2) 对照品溶液的制备： 精密量取〇-香附酮对照品0.051^，置于101^容量瓶中，用95%乙醇稀释至刻度，摇 匀，即得浓度为5ug/mL对照品溶液； (3) 标准方程的建立： 精密吸取对照品溶液配制成系列浓度，注入液相色谱仪，按步骤（1)的色谱条件分析， 测定峰面积，以对照品量为横坐标，峰面积值为纵坐标得标准方程y = 136. 75x+3. 5384, R =0. 9996 ； (4) 供试品溶液的制备： 取四制香附粗粉4g，加入95%乙醇32mL，加热回流提取3次，每次2h，合并滤液定容至 100mL，得四制香附药材液，用0. 45 μ m的微孔滤膜过滤，得供试品溶液； (5) HPLC指纹图谱的建立： 对供试品进行色谱分析，按步骤（1)的色谱条件分析，得到5种主要有效成分，建立 HPLC指纹图谱，以α -香附酮为基准峰作为参照峰，对已探明的主要有效成分指纹峰进行 相对含量测定，根据计算公式：指纹峰相对含量=(指纹峰峰面积/基准峰峰面积）X基准 峰含量，获得主要有效成分指纹峰相对含量，建立5种效应成分的定量方法。
2. 如权利要求1所述的四制香附饮片的质量控制方法，其特征在于：步骤⑴中，色谱 柱：Diamonsil C18 的规格为 250X4.6mm，5ul。
3. 如权利要求1所述的四制香附饮片的质量控制方法，其特征在于：步骤（1)中，检测 波长：250nm ;流速：1. OmL/min。
4. 如权利要求1所述的四制香附饮片的质量控制方法，其特征在于：步骤（1)中，流动 相：甲醇㈧和重蒸馏水⑶梯度洗脱的体积比为：〇-l〇min，30% -70% A和70% -30% B ; 10-45min，70% -100% A 和 30% -0% B。
5. 如权利要求1所述的四制香附饮片的质量控制方法，其特征在于：步骤（1)中，梯度 洗脱的方法如下表所示：
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6. 如权利要求1所述的四制香附饮片的质量控制方法，其特征在于：步骤（5)中，5种 主要有效成分保留时间分别为：16. lmin、18. 5min、24. 9min、29. 5min和30. 5min。
【文档编号】G01N30/88GK104155399SQ201410416072
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2014年8月22日 优先权日:2014年8月22日
【发明者】郭慧玲, 胡律江, 赵晓娟, 胡志方, 李淑雯 申请人:江西中医药大学