果蝇生物模型的构建和筛选的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种果蝇生物模型的构建和筛选，系统筛选方法包括如下步骤：S1、通过观察果蝇红眼基因决定的果蝇眼睛颜色的表型变化进行第一次筛选；S2、通过检测果蝇幼虫的眼盘上表达的绿色荧光蛋白基因的强弱变化进行在第一次筛选的基础上进行第二次筛选。本发明构建了既能观测染色质结构变化，又能观测核受体介导基因转录调控水平变化的果蝇生物模型。
【专利说明】果蝇生物模型的构建和筛选
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物领域，具体涉及一种果蝇生物模型的构建和筛选。
【背景技术】
[0002]目前有关生物体内染色质结构调控的研究，主要是用酵母或果蝇分子遗传学分析系统进行的。在这个研究领域内，研究者们利用包含内在性染色质结构变化的分析系统，对已知因子的新功能及其在染色体上的局部定位进行了详细的研究，并被世界一流杂志给予高度评价。近年来，又对组织特异性的组蛋白修饰酶及组蛋白置换机制有了更深一层的研究。但是，目前这些研究工作由于只能在捕捉内在性染色质结构变化的基础上进行，因此很难对组蛋白的分子间相互作用在遗传学上进行深入的分析。从根本上来说，高等真核生物有着复杂的染色质环境，研究推测多彩的染色质环境变化应具有高度的顺次性。因此，在生物体内构建一种既能用肉眼观察又能在分子水平上进行生物化学研究的分析系统是非常必要的。
【发明内容】
[0003]为解决上述问题，本发明提供了一种果蝇生物模型的构建和筛选，本发明构建了既能观测染色质结构变化，又能观测核受体介导基因转录调控水平变化的果蝇生物模型。
[0004]本发明通过如下技术方案实现:
[0005]果蝇生物模型的筛选，包括如下步骤:
[0006]S1、通过观察果蝇红眼基因(white)决定的果蝇眼睛颜色的表型变化进行第一次筛选，具体筛选过程是转有AR报告基因和AR表达基因的果蝇与数千种带有各种基因突变型的果蝇杂交后，在果蝇子代通过观测AR介导的基因转录活性的变化为指标来筛选辅调节因子；
[0007]S2、通过检测果蝇幼虫的眼盘上表达的绿色荧光蛋白基因(GFP)的强弱变化，在第一次筛选的基础上进行第二次筛选，具体筛选过程是转有AR报告基因和AR表达基因的果蝇与数千种带有各种基因突变型的果蝇杂交后，在果蝇子代通过观测AR介导的基因转录活性的变化为指标，即检测果蝇幼虫的眼盘上表达的绿色荧光蛋白基因的强弱变化来进一步确认辅调节因子。
[0008]本发明构建了既能观测染色质结构变化，又能观测核受体介导基因转录调控水平变化的果蝇生物模型。
【具体实施方式】
[0009]为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0010]本具体实施提供了一种果蝇生物模型的构建和筛选，筛选方法包括如下步骤:
[0011]S1、通过观察果蝇红眼基因(white)决定的果蝇眼睛颜色的表型变化进行第一次筛选，具体筛选过程是转有AR报告基因和AR表达基因的果蝇与数千种带有各种基因突变型的果蝇杂交后，在果蝇子代通过观测AR介导的基因转录活性的变化为指标，即观察果蝇红眼基因决定的果蝇眼睛颜色的表型变化来筛选辅调节因子；
[0012]S2、通过检测果蝇幼虫的眼盘上表达的绿色荧光蛋白基因(GFP)的强弱变化，在第一次筛选的基础上进行第二次筛选，具体筛选过程是转有AR报告基因和AR表达基因的果蝇与数千种带有各种基因突变型的果蝇杂交后，在果蝇子代通过观测AR介导的基因转录活性的变化为指标，即检测果蝇幼虫的眼盘上表达的绿色荧光蛋白基因的强弱变化来进一步确认辅调节因子。
[0013]实施例1
[0014]以人类的雄激素受体(AR)作为核受体的代表，在果蝇体内构建了 AR介导的转录调控生物系统。因为明确染色质结构调节机能是研究转录调控机制所必须的，本项目构建的AR介导转录调控系统是一个既以染色质结构变化又以转录水平调节为指标的生物体内系统。斑点位置效应(PEV)是一种与异染色质和常染色质的状态和转录频度相关的分析系统，常用于分析染色质结构调节的研究。在果蝇体内的特殊条件下，P序列(P element)能够随意地插入果蝇染色体基因上。PEV分析系统是利用果蝇的这个特性，将5’端和3’端的P序列之间存在的果蝇红眼基因序列(white)插入到果蝇异染色质基因附近，因受异染色质基因转录抑制的影响，果蝇的红眼呈红白相间的斑点样分布。根据眼睛颜色的强弱变化来探讨染色质结构状态的调节。，首先把决定红眼的基因插入AR应答序列(AR responseelement, ARE)的下游来构建AR的报告基因，把此报告基因转入白眼果蝇体内制成转报告基因果蝇。然后将此报告基因在P序列的帮助下随机地插入染色体基因内，通过果蝇眼睛表型的颜色变化、斑点形成与否及基因读序的方法来筛选和鉴定报告基因插入在染色质中的位置(异染色质、常染色质)从而构建PEV果蝇模型。另一个被插入AR应答序列下游的报告基因是绿色突光蛋白基因(Green Fluorescence Protein,GFP),可通过人工分离果蚬幼虫的眼盘(eye disc)观测眼盘特异性表达的GFP从而检测AR介导的基因转录调节。若报告基因插入在常染色质上，在AR存在下，两个报告基因(white、GFP)呈高表达，即眼睛表型的颜色呈红色、眼盘特异性表达的荧光蛋白呈较强的颜色；若报告基因插入在异染色质附近部位，两个报告基因的表达则被抑制和减弱。由此，本实施例新构建的AR介导的基因转录调控相依存的PEV生物模型系统(以下称AR-PEV模型)能够在生物个体水平上用肉眼观测和把握染色质结构状态。应用这个分析系统，预计能够在遗传学上明确分析参与调控染色质结构的辅调节因子。
[0015]综上所述，本发明构建了既能观测染色质结构变化，又能观测核受体介导基因转录调控水平变化的果蝇生物模型。
[0016]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本【技术领域】的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明。
【权利要求】
1.果蝇生物模型的构建和筛选，其特征在于构建了既能观测染色质结构变化，又能观测核受体介导基因转录调控水平变化的果蝇生物模型。包括如下筛选步骤: 51、通过观察果蝇红眼基因决定的果蝇眼睛颜色的表型变化进行第一次筛选: 52、通过检测果蝇幼虫的眼盘上表达的绿色荧光蛋白基因的强弱变化，在第一次筛选的基础上进行第二次筛选。
2.根据权利要求1所述的果蝇生物模型的构建和筛选，其特征在于，所述步骤SI的具体操作为:将转有AR报告基因和AR表达基因的果蝇与数千种带有各种基因突变型的果蝇杂交后，在果蝇子代通过观测AR介导的基因转录活性的变化为指标来筛选辅调节因子。
3.根据权利要求1所述的果蝇生物模型的构建和筛选，其特征在于，所述步骤S2的具体操作为:将转有AR报告基因和AR表达基因的果蝇与数千种带有各种基因突变型的果蝇杂交后，在果蝇子代通过观测AR介导的基因转录活性的变化为指标，即检测果蝇幼虫的眼盘上表达的绿色荧光蛋白基因的强弱变化来进一步确认辅调节因子。
【文档编号】G01N21/64GK104304185SQ201410509551
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年9月18日 优先权日:2014年9月18日
【发明者】赵越, 王春玉, 林琳, 邹仁龙, 王胜利, 孙洪邈, 孙士莹, 吴怡 申请人:中国医科大学