一种血清岩藻糖苷酶检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种血清岩藻糖苷酶检测试剂盒，包括试剂1和2，试剂1：缓冲液pH4.0-4.550-500mmol/L表面活性剂1-50g/L抗干扰剂1-20g/L防腐剂0.1-100g/L；试剂2：缓冲液(pH7.0-7.5)50-500mmol/L葡萄糖2-60g/L己糖激酶1-20KU/L葡萄糖-6-磷酸脱氢酶1-20KU/L硫酸镁0.3-5g/L底物0.2-5g/L稳定剂1-100mmol/L保护剂0.1-40g/L防腐剂0.1-100g/L。本发明解决了普遍存在的底物稳定性不好、抗干扰能力差、灵敏度较低问题。
【专利说明】一种血清岩藻糖苷酶检测试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明属于医学检验测定【技术领域】，具体涉及一种血清岩藻糖苷酶检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] a -L岩藻糖苷酶（a -L-Fucosidase，AFU)，是一种溶酶体酸性水解酶，广泛分布 于人体内的各种组织、细胞和体液中，尤其以肝、肾等组织活性较高。AFU作为溶酶体酸性 水解酶，能水解含有岩藻糖的脂质、粘蛋白和粘多糖，AFU试剂正是利用这一特性对其活力 进行检测。1977年，Bauer等在动物实验中观察到Morris鼠肝癌组织中AFU活力较正常肝 脏高7倍，且与肿瘤长期相关。1984年Deugnier等发现，肝细胞癌患者血清中AFU升高， 提出把AFU作为诊断肝癌的一种新的标志酶，并被后续研究证实肝癌与AFU活力的相关性。 近年来，随着AFU检测方法研究及其他肿瘤或非肿瘤性疾病的血清AFU水平变化的研究深 入，岩藻糖苷酶活力测定已经成为一个基本诊断指标，并与其他实验室指标相结合，成为肝 癌、胃癌、胰腺癌、结肠癌、口腔癌、白血病、卵巢肿瘤等疾病诊断的重要指标，大大提高了相 关疾病诊断的准确率及预后效果的评价，体现出良好的临床诊断价值。
[0003] AFU检测试剂盒目前在国外已广泛应用于癌症诊断，尤其是原发性肝癌的早期筛 查。AFU与AFP，两项指标联合检测，起到优势互补作用，阳性检出率可达到95%左右，有助 于原发性肝癌的诊断、病情变化判别及治疗效果观察，从而弥补了 AFP在原发性肝癌诊断 上的缺陷。AFU试剂除了作为原发性肝癌的标志物之一，近年来已逐渐作为重要或辅助结 合指标，应用于胃癌、胰腺癌、结肠癌、口腔癌、白血病、卵巢肿瘤等疾病的诊断检测。由此可 见，AFU活性检测今后将发展成为一个市场容量大、应用范围广的诊断指标。
[0004] 目前，测定AFU活力的方法主要有荧光法、终点比色法、速率法。
[0005] (1)荧光法：是利用岩藻糖苷化合物在岩藻糖苷酶水解后，释放出可发射荧光的 4-甲基伞型酮，通过检查荧光强度来分析酶活力。该方法的灵敏度高，既能用于血清，也适 用于活检组织、细胞、脑脊液等量小的样本。但是该方法对仪器要求高，不仅需要凝胶过滤 除去干扰物质，而且需要荧光分光光度计，不能用于自动化分析，难以进行普及推广。
[0006] (2)终点比色法：是以PNP-AFU为底物，底物被酶分解后产生色团，该色团在碱性 条件下呈现黄色，利用分光光度法进行定量分析。本方法简便、设备要求不高，但是由于酶 底物本身的抗干扰性差，不能解决血清黄疸和溶血、脂血等因素对测定结果的影响，且操作 繁琐，所需反应时间长。而且AFU作为酶需要在酸性环境下进行酶促反应，而色团需在碱性 条件下呈色，所以也不适合自动化检测，推广难度大。
[0007] (3)速率法：以AFU在适宜反应条件下催化含呈色基团的特定底物水解，在一定波 长下可使吸光度增加，连续监测吸光度值的变化，可计算出样本中AFU的活性。该方法操作 简单，测定时间短，灵敏度及抗干扰性都有所提高，适用于各种半/全自动分析仪器，便于 临床单位推广应用。
[0008] 由于速率法具有便于临床推广应用的特点，近年来，AFU活力测试逐步在临床医学 方面得到普遍应用。然而，本方法所采用的底物普遍存在不稳定，灵敏度不够高的缺陷。本 发明正是基于此问题，提供了一种高性能的血清岩藻糖苷酶检测试剂盒的制备方法，并完 美解决了底物稳定性及其灵敏度问题。
【发明内容】
[0009] 本发明所要解决的技术问题是针对现有技术现状，提供一种底物稳定、测定准确、 方便使用、稳定可靠且灵敏度高的血清岩藻糖苷酶检测试剂盒。
[0010] 本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种血清岩藻糖苷酶检测试剂 盒，其特征在于：该试剂盒由试剂1和试剂2组成，
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【权利要求】
1. 一种血清岩藻糖苷酶检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒由试剂1和试剂2组成，
2. 根据权利要求1所述的血清岩藻糖苷酶检测试剂盒，其特征在于：所述的缓冲液为 三羟甲基氨基缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬 酸缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液、MES缓冲液、Good's缓冲液或硼酸缓冲液中的一种或几种。
3. 根据权利要求1所述的血清岩藻糖苷酶检测试剂盒，其特征在于：所述的表面活性 剂为非离子表面活性剂。
4. 根据权利要求3所述的血清岩藻糖苷酶检测试剂盒，其特征在于：所述的非离子表 面活性剂为吐温-20、曲拉通100、Brij35中的一种或几种。
5. 根据权利要求1所述的血清岩藻糖苷酶检测试剂盒，其特征在于：所述的防腐剂选 自G418、卡那霉素、叠氮钠、Proclin300中的一种或几种。
6. 根据权利要求1所述的血清岩藻糖苷酶检测试剂盒，其特征在于：所述发热抗干扰 剂为胆红素氧化酶。
7. 根据权利要求1所述的血清岩藻糖苷酶检测试剂盒，其特征在于：所述的底物选自 2-氯-对硝基苯酚-a-L-岩藻糖苷或M-G-CNP-AFU中的一种。
8. 根据权利要求1所述的血清岩藻糖苷酶检测试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂选 自还原型辅酶I或还原型辅酶II中的一种。
9. 根据权利要求1所述的血清岩藻糖苷酶检测试剂盒，其特征在于：所述的保护剂选 自聚乙二醇、丙三醇、丙二醇、蔗糖、海藻糖、山梨醇、BSA中的一种或者几种。
【文档编号】G01N33/52GK104267178SQ201410543027
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月15日 优先权日:2014年10月15日
【发明者】邹炳德, 邹继华, 黎鹏, 贾江花 申请人:宁波美康生物科技股份有限公司