一种中药血必净注射液中聚山梨酯80的含量检测方法

文档序号:6245031阅读:947来源:国知局
一种中药血必净注射液中聚山梨酯80的含量检测方法
【专利摘要】本发明属于医药【技术领域】,具体涉及一种中药血必净注射液中聚山梨酯80的气相色谱检测方法。本发明所述的检测方法,包括以下步骤:步骤1,对照品溶液制备:以聚山梨酯80为对照品,配制成对照品溶液;步骤2,供试品溶液的制备:取血必净注射液配制成供试品溶液;步骤3,分别将对照品溶液和供试品溶液注入气相色谱仪,得到色谱图;步骤4,根据色谱图对照品和供试品的色谱图,经过计算得到供试品溶液中的聚山梨酯80的含量。
【专利说明】一种中药血必净注射液中聚山梨酯80的含量检测方法

【技术领域】
[0001] 本发明属于医药【技术领域】,具体涉及一种中药血必净注射液中聚山梨酯80的气 相色谱检测方法。

【背景技术】
[0002] 血必净注射液是由红花、赤芍、川芎、丹参、当归等中药材经过现代生产工艺,并辅 以适当辅料制成的现代中药制剂,其多组分、多途径、多靶点的药理特性在临床治疗中呈现 出了明确的疗效。
[0003] 聚山梨酯80,又名:吐温80 (Polysorbate 80),为淡黄色至橙黄色的黏稠液体;微 有特臭。味微苦略淫,有温热感。在水、乙醇、甲醇或乙酸乙酯中易溶,在矿物油中极微溶解。 液体制剂中常用的表面活性剂的一种。为油/水型乳化剂,可用作稳定剂、扩散剂、抗静电 剂、纤维润滑剂等。由山梨糖醇酐单油酸酯和氧化乙烯反应制得。
[0004] 血必净注射液在制备过程中为增加溶液的表面张力,增加药物的溶解度,增加溶 液的稳定性加入了少量的聚山梨酯80。
[0005] 目前,市场上含有聚山梨酯80的注射液很多,但因聚山梨酯80具有一定的副作 用,因此必须对其含量加以控制,为此,研究人员开发出聚山梨酯80的检测方法,如通过 HPLC?ELSD检测的方法。ELSD为一种通用型检测器,其检测结果的精密度要求相对平均 偏差< 5%,且聚山梨酯80为聚氧乙烯20山梨醇酐单油酸,是个聚合物,因此该方法精密度 差,灵敏度不强,有一定的局限性。
[0006] 中国专利201410140478. 4公开了一种"血必净注射液中聚山梨酯80的快速检测 方法",该方法采用近红外光谱,适合于血必净注射液中吐温?80含量的快速测定。可以对 血必净注射液生产过程中的中间体、成品等在线取样,随时进行吐温?80的测定,以确保 药品质量和生产效率,检测费用低,经实际与现有方法相比,测定时间大为缩短,通常每个 样品在lmin之内完成,但因作为快速检测手段,其检测精度还有待提高,因此只适合生产 过程中使用,不适合作为抽检化验用,因此有必要找到另外的方法以用于成品抽检质量检 测。
[0007] 吐温?80和血必净注射液中的脂溶性成分如阿魏酸、丹参酮、洋川芎内酯I等相 互包裹,因此分离困难,需要找到事宜的分离剂。为此,本发明对有关检测方法进行了充分 的研究,找到了一种精密度高,操作简单,适用性强。


【发明内容】

[0008] 本发明提供了一种中药血必净注射液中聚山梨酯80的气相色谱检测方法。本 发明所建立的气相色谱法检测血必净注射液中聚山梨酯80的含量,与蒸发光散射检测 (ELSD)相比,其检测结果的精密度要求相对平均偏差为< 2%,较ELSD检测有很大的提升。
[0009] 本发明的检测原理为:聚山梨酯80中的主要成分油酸先经过皂化反应游离出来, 再与三氟化硼的甲醇溶液反应形成油酸甲酯,经气相色谱法检测油酸甲酯,从而实现对中 药血必净注射液中的聚山梨酯80的定量检测。经过方法学验证,用此方法可以准确地检测 血必净注射液中聚山梨酯8〇的含量,增加了产品的质量控制点,具有一定的现实意义。相 比于其他方法,本发明提供的方法具有专属性强、重复性好、灵敏、准确等特点。
[0010] 为此,本发明提供一种中药血必净注射液中聚山梨酯80的检测方法,所述方法包 括以下步骤:
[0011] 步骤1,对照品溶液制备:以聚山梨酯8〇为对照品,配制成对照品溶液;
[0012] 步骤2,供试品溶液的制备:取血必净注射液配制成供试品溶液;
[0013] 步骤3,分别将对照品溶液和供试品溶液注入气相色谱仪,得到色谱图;
[0014] 步骤4,根据色谱图对照品和供试品的色谱图,经过计算得到供试品溶液中的聚山 梨酯80的含量。
[0015] 其中,所述气相色谱的色谱条件如下:
[0016] 色谱柱:HP ?innowax (3〇m*0_ 32臟,0· 5〇um);
[0017] 进样口温度 260 ?280°C ;
[0018] 分流比 1:50 ?70;
[0019] 检测器温度300?360? ;
[0020] 柱温为60?保持0分钟,以每分钟20°C的速率升温至160?,保持1分钟,再以每 分钟2°C的速率升温至l 7〇°C?190?,保持20分钟;
[0021 ]柱流量为 1. 0 ?3. OmL/min。
[0022] 理论半数按油酸甲酯峰计算应不低于10000。
[0023] 其中,步骤1,对照品溶液制备:方法如下:称取聚山梨酯8020?40mg,置于40? 60ml圆底烧瓶中,加入0· 4?0· 6mol/L氢氧化钠的甲醇溶液1. 5?2. 5mL,置水浴中加热 回流2δ?35min,放冷;沿冷凝管加I2?16%三氟化硼的甲醇溶液1. 5?2. 5mL,加热回 流25?35min,放冷;沿冷凝管加正庚烷3?5mL,继续回流8?12min,放冷;萃取上层液, 加饱和氯化钠溶液8?lanL,振摇10?20秒,静置分层,取上层液,用水洗涤1?3次,每 次3?5mL,上层液经无水硫酸钠干燥后,得到对照品溶液。
[0024] 其中,步骤2,供试品溶液的制备:方法如下:精密量取血必净注射液15?30ml, 置于40?60ml圆底烧瓶中,置于80°C?100°C水浴上蒸干,加入0. 4?0. 6mol/L氢氧化 钠的甲醇溶液1· 5?2. 5mL,置水浴中加热回流25?35min,放冷;沿冷凝管加 12?16%三 氟化硼的甲醇溶液1. 5?2. 5mL,加热回流25?35min,放冷;沿冷凝管加正庚烷3?5mL, 继续回流8?12min,放冷;萃取上层液,加饱和氯化钠溶液8?12mL,振摇10?20秒,静 置分层,取上层液,用水洗涤1?3次,每次3?5mL,上层液经无水硫酸钠干燥后,得到供试 品溶液。
[0025]其中,步骤3,注入气相色谱仪:方法如下:分别精密吸取上述对照品溶液和供试 品溶液各〇· 8?1. 2 μ 1,注入气相色谱仪,得到色谱图。
[0026] 优选的,本发明的方法,步骤如下:
[0027] 步骤1,对照品溶液制备:方法如下:精密称取聚山梨酯80约30mg,置于50ml圆底 烧瓶中,加入〇· 5mol/L氢氧化钠的甲醇溶液2mL,置水浴中加热回流30min,放冷;沿冷凝管 加 14%三氟化硼的甲醇溶液2mL,加 热回流30min,放冷;沿冷凝管加正庚烷4mL,继续回流 lOmin,放冷;萃取上层液,加饱和氯化钠溶液lOmL,振摇15秒,静置分层,取上层液,用水洗 涤2次(萃取),每次4mL,上层液经无水硫酸钠干燥后,得到对照品溶液。
[0028]步骤2,供试品溶液的制备:方法如下:精密量取血必净注射液20ml,置于50ml圆 底烧瓶中,置于l〇〇°C水浴上蒸干,加入〇. 5mol/L氢氧化钠的甲醇溶液2mL,置水浴中加热 回流30min,放冷;沿冷凝管加14%三氟化硼的甲醇溶液2mL,加热回流30min,放冷;沿冷 凝管加正庚烧4mL,继续回流lOmin,放冷;萃取上层液,加饱和氯化钠溶液i〇 mL,振摇15 秒,静置分层,取上层液,用水洗涤2次(萃取),每次4mL,上层液经无水硫酸钠干燥后,得 到供试品溶液。
[0029]步骤3,注入气相色谱仪:方法如下:分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液 各1 μ 1,注入气相色谱仪,得到色谱图。
[0030] 本发明的色谱条件和溶液的配制方法等是经过发明人筛选后获得的,筛选过程如 下:
[0031] 1、进样口温度
[0032] 对进样口的温度进行筛选,以考察进样口温度对检测的影响。结果见表1。
[0033] 表1不同进样口温度下的血必净注射液检测结果
[0034]

【权利要求】
1. 一种中药血必净注射液中聚山梨酯80的含量检测方法,其特征在于,所述方法包括 以下步骤: 步骤1,对照品溶液制备:以聚山梨醋80为对照品,配制成对照品溶液; 步骤2,供试品溶液的制备:取血必净注射液配制成供试品溶液; 步骤3,分别将对照品溶液和供试品溶液注入气相色谱仪,得到色谱图; 步骤4,根据色谱图对照品和供试品的色谱图,经过计算得到供试品溶液中的聚山梨酯 80的含量; 其中,所述气相色谱的色谱条件如下: 色谱柱:HP ?innowax (30m X0. 32mm,0· 50um); 进样口温度260?280°C, 分流比1 :50?70, 检测器温度300?360°C, 柱温为60°C保持0分钟,以每分钟20°C的速率升温至160°C,保持1分钟,再以每分钟 2°C的速率升温至170°C?190°C,保持20分钟; 柱流量为1. 〇?3. OmL/min。
2. 根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,其中,步骤1,对照品溶液制备:方法 如下:称取聚山梨酯8020?40mg,置于40?60ml圆底烧瓶中,加入0. 4?0. 6mol/L氢氧 化钠的甲醇溶液1. 5?2. 5mL,置水浴中加热回流25?35min,放冷;沿冷凝管加14%三氟 化硼的甲醇溶液1. 5?2. 5mL,加热回流25?35min,放冷;沿冷凝管加正庚烷3?5mL,继 续回流8?12min,放冷;萃取上层液,加饱和氯化钠溶液8?12mL,振摇10?20秒,静置 分层,取上层液,用水洗涤1?3次,每次3?5mL,上层液经无水硫酸钠干燥后,得到对照品 溶液。
3. 根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,其中,步骤2,供试品溶液的制备:方 法如下:精密量取血必净注射液15?30ml,置于40?60ml圆底烧瓶中,置于80°C?100°C 水浴上蒸干,加入0. 4?0. 6mol/L氢氧化钠的甲醇溶液1. 5?2. 5mL,置水浴中加热回 流25?35min,放冷;沿冷凝管加14%三氟化硼的甲醇溶液1. 5?2. 5mL,加热回流25? 35min,放冷;沿冷凝管加正庚烷3?5mL,继续回流8?12min,放冷;萃取上层液,加饱和 氯化钠溶液8?12mL,振摇10?20秒,静置分层,取上层液,用水洗涤1?3次,每次3? 5mL,上层液经无水硫酸钠干燥后,得到供试品溶液。
4. 根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,其中,步骤3所述注入气相色谱仪: 方法如下:分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各0. 8?1. 2 μ 1,注入气相色谱仪, 得到色谱图。
5. 根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤1,对照品溶液制备:方法如下: 精密称取聚山梨酯80约30mg,置于50ml圆底烧瓶中,加入0. 5mol/L氢氧化钠的甲醇溶液 2mL,置水浴中加热回流30min,放冷;沿冷凝管加14%三氟化硼的甲醇溶液2mL,加热回流 30min,放冷;沿冷凝管加正庚烷4mL,继续回流lOmin,放冷;萃取上层液,加饱和氯化钠溶 液10mL,振摇15秒,静置分层,取上层液,用水洗涤2次,每次4mL,上层液经无水硫酸钠干 燥后,得到对照品溶液。
6. 根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤2,供试品溶液的制备:方法 如下:精密量取血必净注射液20ml,置于50ml圆底烧瓶中,置于100°C水浴上蒸干,加入 0. 5mol/L氢氧化钠的甲醇溶液2mL,置水浴中加热回流30min,放冷;沿冷凝管加14%三氟 化硼的甲醇溶液2mL,加热回流30min,放冷;沿冷凝管加正庚烧4mL,继续回流lOmin,放冷; 萃取上层液,加饱和氯化钠溶液10mL,振摇15秒,静置分层,取上层液,用水洗涤2次,每次 4mL,上层液经无水硫酸钠干燥后,得到供试品溶液。
7. 根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤3所述注入气相色谱仪:方法如 下:分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各1 μ 1,注入气相色谱仪,得到色谱图。
8. 根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤如下: 步骤1,对照品溶液制备:方法如下:精密称取聚山梨酯80约30mg,置于50ml圆底烧 瓶中,置于l〇〇°C水浴上蒸干,加入0. 5mol/L氢氧化钠的甲醇溶液2mL,置水浴中加热回流 30min,放冷;沿冷凝管加14%三氟化硼的甲醇溶液2mL,加热回流30min,放冷;沿冷凝管加 正庚烷4mL,继续回流lOmin,放冷;萃取上层液,加饱和氯化钠溶液10mL,振摇15秒,静置 分层,取上层液,用水洗涤2次,每次4mL,上层液经无水硫酸钠干燥后,得到对照品溶液; 步骤2,供试品溶液的制备:方法如下:精密量取血必净注射液20ml,置于50ml圆底烧 瓶中,加入0. 5mol/L氢氧化钠的甲醇溶液2mL,置水浴中加热回流30min,放冷;沿冷凝管 加14%三氟化硼的甲醇溶液2mL,加热回流30min,放冷;沿冷凝管加正庚烷4mL,继续回流 lOmin,放冷;萃取上层液,加饱和氯化钠溶液10mL,振摇15秒,静置分层,取上层液,用水洗 涤2次,每次4mL,上层液经无水硫酸钠干燥后,得到供试品溶液; 步骤3,所述注入气相色谱仪:方法如下:分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液 各1μ 1,注入气相色谱仪,得到色谱图; 步骤4,根据色谱图对照品和供试品的色谱图,经过计算得到供试品溶液中的聚山梨酯 80的含量; 色谱条件 色谱柱:ΗΡ ?innowax (30m Χ0. 32mm,0· 50um); 进样口温度270°C, 分流比1 :60, 检测器温度330°C, 柱温为60°C保持0分钟,以每分钟20°C的速率升温至160°C,保持1分钟,再以每分钟 2°C的速率升温至180°C,保持20分钟; 柱流量为3. OmL/min 理论半数按油酸甲酯峰计算应不低于10000。
【文档编号】G01N30/02GK104297375SQ201410567353
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年10月23日 优先权日:2014年10月23日
【发明者】姚小青, 孙长海, 王虹, 张桂萍, 孙明珍, 薛莎, 蒋春亮, 于洋, 王起运 申请人:天津红日药业股份有限公司
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