一种山梨糖发酵过程检测及发酵终点判断方法
【专利摘要】一种山梨糖发酵过程检测及发酵终点判断方法，包括以下步骤：1）对照品溶液配制：用超纯水精密配制对照品溶液；2）样品处理：取Vc生产中一步山梨糖发酵液5ml，加入5ml含ZnSO4和K4Fe(CN)6溶液，离心沉沉淀，取上清液，用超纯水稀释；3）色谱条件：色谱柱：氢形离子排阻色谱柱；流动相：超纯水；检测器：示差检测器；4）测定：用外标法计算出待测样品的山梨糖、山梨醇等的含量；5）发酵终点判断：监控发酵过程，当山梨糖含量不再升高且山梨醇含量低于0.5mg/ml,即可判断为发酵终点。本发明操作方便，提高了检测的准确性和工作效率，降低了发酵能耗和生产成本。
【专利说明】一种山梨糖发酵过程检测及发酵终点判断方法
[0001]【技术领域】:
本发明涉及Vc生产领域，尤其涉及一种山梨糖发酵过程检测及发酵终点判断方法。
[0002]【背景技术】:
传统Vc生产中一步发酵是以山梨醇为原料，细菌发酵转化成山梨糖。发酵过程中山梨糖的含量检测采取甘油铜滴定法，山梨醇仅在接种前用折光法检测含量，发酵过程中无监控；发酵终点由于无法检测发酵液中残留山梨醇的量，而是通过检测山梨糖含量不增加作为判定标准。由于甘油铜检测还原糖的方法检测误差较大，一般在5%左右，经验性强，不同操作人员易发生偏差，为确保检测的准确性，通常会采用发酵液中多次取样进行复检，重复确认，耗时长，导致发酵终点判断延后，增加发酵能耗。
[0003]
【发明内容】
:
本发明的目的是提供一种山梨糖发酵过程检测及发酵终点判断方法，更准确、高效的对Vc生产过程中一步发酵的过程检测，可以同时检测发酵液中山梨糖及山梨醇的含量，监控发酵进程，并判定发酵终点。
[0004]本发明是这样实现的:一种山梨糖发酵过程检测及发酵终点判断方法，包括以下步骤:1)对照品溶液配制:用超纯水精密配制含山梨糖25mg/ml、山梨醇lmg/ml的对照品溶液；2)样品处理:取Vc生产中一步山梨糖发酵液5ml，加入5ml含ZnS0420_60mg/ml和K4Fe (CN)610-30mg/ml的溶液，混匀，倒入离心沉淀机沉淀，取上清液，用超纯水稀释上述上清液至2-20倍后，倒入过滤器过滤；3)色谱条件:色谱柱:氢形离子排阻色谱柱，柱温:60-85°C;流动相:用硫酸调制成pH等于2的超纯水,流动相流速:0.4-1.0ml/min ;检测器:示差检测器，示差检测器样品池温度:25°C -50°C内；4)测定:将对照品溶液与样品溶液进样检测，根据对照品出峰时间、峰面积，用外标法计算出待测样品的山梨糖、山梨醇等的含量；5)发酵终点判断:监控发酵过程，当山梨糖含量不再升高且山梨醇含量低于0.5mg/ml,即可判断为发酵终点。
[0005]本发明所述的离心沉淀机转速为12000rpm。
[0006]本发明所述的过滤器滤头孔径为0.22微米。
[0007]本发明操作方便，提高了检测的准确性和工作效率，降低了发酵能耗和生产成本。
[0008]【具体实施方式】:
以下实施例仅用于说明本发明，但本发明并不受这些实施例的限制。
[0009]实施例1:
配制含山梨糖25mg/ml、山梨醇lmg/ml对照品溶液，配制好流动相^Vc生产中一步发酵中间样5ml,加入5ml含ZnSO4 (40mg/ml)和K4Fe (CN)6 (20mg/ml)的溶液，混勻，转速12000rpm离心沉降，取上清液用超纯水稀释20倍，用0.22微米过滤头过滤；进样检测，进样量为20微升；色谱条件:流速为0.8ml/min ;柱温为60°C;示差检测器样品池温度为35°C ；色谱柱:赛分科技Carbomix H 10:8% 7.8*300mm ;测定:将对照品溶液与样品溶液进样检测，根据对照品出峰时间、峰面积，用外标法计算出待测样品的山梨糖、山梨醇等的含量，监控发酵过程判断发酵终点山梨醇含量值为0.47mg/ml。
[0010]实施例2:
配制含山梨糖25mg/ml、山梨醇lmg/ml对照品溶液，配制好流动相。取Vc生产中一步发酵终点样5ml，加入5ml含ZnSO4 (50mg/ml)和K4Fe (CN) 6 (15mg/ml)的溶液，混匀，转速12000rpm离心沉降，取上清液用超纯水稀释5倍，0.22微米过滤头过滤。进样检测,进样量20微升；色谱条件:流速0.6ml/min ;柱温80°C ;示差检测器样品池温度35°C ;色谱柱:岛津SCR-101H ;测定:将对照品溶液与样品溶液进样检测，根据对照品出峰时间、峰面积，用外标法计算出待测样品的山梨糖、山梨醇等的含量，监控发酵过程判定发酵终点山梨醇含量值为 0.45mg/ml。
[0011]将传统终点判断方法的发酵终点样，用本发明方法进行检测，常规情况下残留山梨醇含量低于lmg/ml，部分批次残留山梨醇量高达4mg/ml以上，山梨醇含量远远高于0.5mg/ml，高浓度的残留山梨醇不仅造成原辅料的浪费，而且对后道生产有负面影响，新的检测方法，可更准确地监控发酵过程，更精确地判断发酵终点，减少了资源浪费，提高了产品质量，方便快捷，重现性好。本发明通过采用氢形色谱柱，与常规采用钠或钙形离子排阻色谱柱比较，分离度相当，出峰时间短，检测用时少，同时氢形色谱柱的耐污染性能远高于钠或钙形柱(例如岛津SCR-101C、赛分CarbomixCa-NP)，价格也相对低，在检测发酵液时可以检测更多样品数，降低检测成本。
[0012]本发明不限于这些公开的实施例，本发明将覆盖技术方案所描述的范围，以及权利所要求范围的各种变形及等效变化，在不偏离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域技术人员容易实现的任何修改或改进均属于本发明所要求保护的范围。
【权利要求】
1.一种山梨糖发酵过程检测及发酵终点判断方法，其特征在于:包括以下步骤:(O对照品溶液配制:用超纯水精密配制含山梨糖25mg/ml、山梨醇lmg/ml的对照品溶液；(2)样品处理:取Vc生产中一步山梨糖发酵液5ml，加入5ml含ZnS0420-60mg/ml和K4Fe (CN)610-30mg/ml的溶液，混匀，倒入离心沉淀机沉淀，取上清液，用超纯水稀释上述上清液至2-20倍后，倒入过滤器过滤；(3)色谱条件:色谱柱:氢形离子排阻色谱柱，柱温:60-85°C;流动相:用硫酸调制成pH等于2的超纯水,流动相流速:0.4-1.0ml/min ;检测器:示差检测器，示差检测器样品池温度:25°C -50°C内；(4)测定:将对照品溶液与样品溶液进样检测，根据对照品出峰时间、峰面积，用外标法计算出待测样品的山梨糖、山梨醇等的含量；(5)发酵终点判断:监控发酵过程，当山梨糖含量不再升高且山梨醇含量低于0.5mg/ml,即可判断为发酵终点。
2.根据权利要求1所述的一种山梨糖发酵过程检测及发酵终点判断方法，其特征在于:所述的离心沉淀机转速为12000rpm。
3.根据权利要求1所述的一种山梨糖发酵过程检测及发酵终点判断方法，其特征在于:所述的过滤器滤头孔径为0.22微米。
【文档编号】G01N30/02GK104297378SQ201410598175
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年10月31日 优先权日:2014年10月31日
【发明者】田学国, 顾越秋, 朱燕, 赵爱明, 曹云锋 申请人:江苏江山制药有限公司