一种稳定、抗干扰能力强的血清总胆汁酸检测试剂的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种稳定、抗干扰能力强的总胆汁酸的检测试剂，属于临床体外检测【技术领域】。该试剂中采用新型MES和HEPES生物缓冲体系并添加了新型两性表面活性剂椰油酰胺丙基甜菜碱和非离子表面活性剂烷基糖苷，试剂的抗干扰能力和稳定性得到大幅提升。此外，本试剂R2组分中还添加了γ-Fe2O3纳米粒子，其特殊的纳米效应和生物类酶活性特点使其可以有效提高试剂中的NADH和3α-HSD酶的活性并催化反应的进行，提高了分析检测的准确度。因而该试剂可以有效的检测血清总胆汁酸的含量，抗干扰能力强，稳定性好。
【专利说明】-种稳定、抗干扰能力强的血清总胆汁酸检测试剂
【技术领域】
[0001] 本发明涉及用于临床测定血清中总胆汁酸含量的试剂，属于临床体外检测技术领 域。
【背景技术】
[0002] 总胆汁酸（TBA)是在肝脏内合成与甘氨酸或牛賴酸结合成为结合型胆汁酸，然后 被肝细胞分泌入胆汁，随胆汁至肠道后，在肠道内细菌作用下被水解成游离型胆汁酸，有 97%被肠道重新吸收后回到肝脏，如此循环不息，该样能使总胆汁酸发挥最大生理效应，更 可防止总胆汁酸大量进入循环中对其它组织细胞的毒害(总胆汁酸的PH值非常低)。正常人 血中胆汁酸浓度很低且相对稳定，一旦当化纽胞发生病变，血清TBA很容易升高，血清TBA 升高与肝细胞损伤程度成正比，因而血清TBA水平是反映肝实质损伤的一项重要指标。目 前对于总胆汁酸的检测方法主要有酶比色法和循环法两种。临床上常用循环法对总胆汁酸 进行检测。循环法检测血清总胆汁酸的原理主要如下： 胆汁酸被3a-轻基类固醇脱氨酶（3a-HSD)及化io-NA护（二核巧酸氧化型）特异性 地氧化，生成3-丽类固醇及化io-NA畑(二核巧酸还原型)。生成的3-丽类固醇在3a-HSD 及化io-NADH存在下，生成胆汁酸和NA护。通过上述循环，血清中微量的胆汁酸得到了放大， 化io-NADH也同比的扩增，于是通过测定化io-NADH在405nm处特异性的吸光度变化，即可 计算得到标本中胆汁酸的含量。市场上循环法检测总胆汁酸的试剂种类也较多，但试剂稳 定性及抗干扰能力普遍不好，因而检测效果也不理想。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供一种用于检测血清中总胆汁酸的试剂。该试剂可W有效检测 血清总胆汁酸的含量，抗干扰能力强，稳定性好。
[0004] 本发明采用W下技术方案： 一种稳定、抗干扰能力强的总胆汁酸检测试剂，其特征在于，它包括试剂Rl和试剂R2 ; 所述试剂Rl的组成为： 2- (N-吗晰代）己賴酸缓冲液（pH4. 5) 80-150mmol/L thioNA护 0. 6-1. 2g/L BSA 0. 8-1. 2g/L 藏糖 8-15g/L 甘露醇 8-15g/L 焼基糖巧 0. 6-2g/L 挪油醜胺丙基甜菜碱 0. 6-2g/L 叠氮轴 0. 8-1. 5g/L; 试剂R2组成为： 4-轻己基脈嗦己賴酸缓冲液（pH9. 2) 150-300mmol/L 3a-轻基类固醇脱氨酶 10-20KU/L NADH 2-5g/L BSA 0. 6-1. 2g/L 纳米粒子 10-30mmol/L 藏糖 8-15g/L 甘露醇 8-15g/L 焼基糖巧 0. 6-2g/L 挪油醜胺丙基甜菜碱 0. 6-2g/L 叠氮轴 0. 8-1. 5g/L。
[0005] 上述纳米粒子为Y-Feg化纳米粒子，粒径为5-30皿。
[0006] 作为本发明的一种优选，所述试剂Rl中各组分为： 2- (N-吗晰代）己賴酸缓冲液（pH4. 5) IOOmmol/L thioNA护 0.8g/L BSA 1.Og/L 藏糖 lOg/L 甘露醇 lOg/L 焼基糖巧 Ig/L 挪油醜胺丙基甜菜碱 Ig/L 叠氮轴 Ig/L。
[0007] 作为本发明的另一种优选，所述试剂R2中各组分为： 4-轻己基脈嗦己賴酸缓冲液（pH9. 2) 200mmol/L 3a-轻基类固醇脱氨酶 15KU/L NADH 3g/L BSAIg/L 纳米粒子 20mmol/L 藏糖 lOg/L 甘露醇 lOg/L 焼基糖巧 Ig/L 挪油醜胺丙基甜菜碱 Ig/L 叠氮轴 Ig/L。
[0008] 本发明所述的Y-F62化纳米粒子是采用常规微乳-水热法或超声沉淀法合成。
[0009] 本发明的有益效果是： 1)采用新型2- (N-吗晰代）己賴酸（MES)和4-轻己基脈嗦己賴酸（肥阳S)生物缓 冲液，该两种缓冲液具有水溶性好、不易馨合盐离子、在可见光和紫外光波段没有明显光吸 收、抑不易受温度变化的影响等优点；因此，可W给试剂中NA畑和3a-服D提供极其温和 的储存和反应条件，有效提高试剂的稳定性和抗干扰能力。
[0010] 2)采用新型两性表面活性剂挪油醜胺丙基甜菜碱与非离子表面活性剂焼基糖巧 (APG)联用，可显著增强其抗静电和抑菌特性，使 试剂的抗干扰能力和稳定性得到大幅提升。
[0011] 3)Y-Fe2〇3纳米粒子特殊的纳米效应和生物类酶活性特点使其可W有效提高试剂 中的NADH和3a-服D酶的活性并催化反应的进行，保证了试剂具有较好的检测灵敏度和准 确度。
【专利附图】
【附图说明】
[0012] 图1是本发明实施例1所得试剂与对照组试剂检测结果线性相关图； 图2是本发明实施例2所得试剂与对照组试剂检测结果线性相关图； 图3是本发明实施例3所得试剂与对照组试剂检测结果线性相关图； 图4是本发明实施例1-3所得试剂与对照组试剂稳定性试验结果图。
【具体实施方式】[001引 实施例1 一种稳定、抗干扰能力强的总胆汁酸的检测试剂，包括试剂Rl和试剂R2。
[0014] 其中，试剂Rl的组成为： MES(2- (N-吗晰代）己賴酸）缓冲液（pH4. 5) SOmmol/L thioNA护 0.6g/L BSA 0.8g/L 藏糖 地/L 甘露醇 8g/L 焼基糖巧(APG) 0. 6g/L 挪油醜胺丙基甜菜碱 0. 6g/L 叠氮轴（NaNs) 0. 8g/L； 试剂R2组成为： 肥阳S( 4-轻己基脈嗦己賴酸）缓冲液（pH9. 2) ISOmmol/L 3a-轻基类固醇脱氨酶（3a-服D) 10KU/L NADH 2g/L BSA 0.6g/L 纳米粒子 IOmmol/L 藏糖 地/L 甘露醇 8g/L 焼基糖巧(APG) 0. 6g/L 挪油醜胺丙基甜菜碱 0. 6g/L 叠氮轴（NaNs) 0. 8g/L。
[0015] 上述纳米粒子为粒径为5-20皿的Y-Fe2化纳米粒子。
[001引 实施例2 一种稳定、抗干扰能力强的总胆汁酸的检测试剂，包括试剂Rl和试剂R2。
[0017]其中，试剂Rl的组成为： MES(2- (N-吗晰代）己賴酸）缓冲液（pH4. 5) ISOmmol/L thioNA护 1. 2g/L BSAI. 2g/L 藏糖 15g/L 甘露醇 15g/L 焼基糖巧（APG) 2g/L 挪油醜胺丙基甜菜碱 2g/L 叠氮轴（NaNs) 1. 5g/L； 试剂R2组成为： 肥阳S( 4-轻己基脈嗦己賴酸）缓冲液（pH9. 2) 300mmol/L 3a-轻基类固醇脱氨酶（3a-服D) 20KU/L NADH 5g/L BSA 1. 2g/L 纳米粒子 30mmol/L 藏糖 15g/L 甘露醇 15g/L 焼基糖巧（APG) 2g/L 挪油醜胺丙基甜菜碱 2g/L 叠氮轴（NaNs) 1. 5g/L。
[0018] 上述纳米粒子为粒径为20-30皿的Y-Feg化纳米粒子。
[001引实施例3 一种稳定、抗干扰能力强的总胆汁酸的检测试剂，包括试剂Rl和试剂R2。
[0020] 其中，试剂Rl的组成为： MES(2- (N-吗晰代）己賴酸）缓冲液（pH4. 5) IOOmmol/L thioNA护 0.8g/L BSA 1.Og/L 藏糖 lOg/L 甘露醇 lOg/L 焼基糖巧（APG) Ig/L 挪油醜胺丙基甜菜碱 Ig/L 叠氮轴（NaNs) Ig/Lo
[0021] 试剂R2中各组分为： 肥阳S( 4-轻己基脈嗦己賴酸）缓冲液（pH9. 2) 200mmol/L 3a-轻基类固醇脱氨酶（3a-服D) 15KU/L NADH 3g/L BSAIg/L 纳米粒子 20mmol/L 藏糖 lOg/L 甘露醇 lOg/L 焼基糖巧（APG) Ig/L 挪油醜胺丙基甜菜碱 Ig/L 叠氮轴（NaNs) Ig/Lo
[0022] 上述纳米粒子为粒径为5-15皿的Y-Fe2化纳米粒子。
[0023] 本发明描述的总胆汁酸检测试剂的使用方法是；在使用时采用具有双试剂功能的 全自动生化分析仪，如东芝40全自动分析仪等，利用双试剂速率法进行测定。将Rl和R2 放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸觸水、Randox复合校准品(英国朗道 实验诊断有限公司）和样本，操作如表1 : 表1本发明总胆汁酸检测试剂检测方法
【权利要求】
1. 一种稳定、抗干扰能力强的总胆汁酸检测试剂，其特征在于，它包括试剂R1和试剂 R2 ;所述试剂R1的组成为： 2- (N-吗啉代）乙磺酸缓冲液（pH4. 5) 80-150mmol/L thioNAD+ 0. 6-1. 2g/L BSA 0. 8-1. 2g/L 鹿糖 8-15g/L 甘露醇 8-15g/L 烷基糖苷 0. 6-2g/L 椰油酰胺丙基甜菜碱 0. 6-2g/L 叠氮钠 0. 8-1. 5g/L ; 试剂R2组成为： 4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液（pH9. 2) 150-300mmol/L 3 a -羟基类固醇脱氢酶 10-20KU/L NADH 2-5g/L BSA 0. 6-1. 2g/L 纳米粒子 10_30mmol/L 鹿糖 8-15g/L 甘露醇 8-15g/L 烷基糖苷 0. 6-2g/L 椰油酰胺丙基甜菜碱 0. 6-2g/L 叠氮钠 0. 8-1. 5g/L。
2. 根据权利要求1所述的总胆汁酸检测试剂，其特征在于，所述纳米粒子为Y_Fe203纳 米粒子，粒径为5_30nm。
3. 根据权利要求1所述的总胆汁酸检测试剂，其特征在于，所述试剂R1中各组分为： 2- (N-吗啉代）乙磺酸缓冲液（pH4. 5) 100mmol/L thioNAD+ 0.8g/L BSA 1. Og/L 蔗糖 l〇g/L 甘露醇 l〇g/L 烷基糖苷 lg/L 椰油酰胺丙基甜菜碱 lg/L 叠氮钠 lg/L。
4. 根据权利要求1所述的总胆汁酸检测试剂，其特征在于，所述试剂R2中各组分为： 4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液（pH9. 2) 200mmol/L 3 a -羟基类固醇脱氢酶 15KU/L NADH 3g/L BSA lg/L 纳米粒子 20mmol/L 蔗糖 l〇g/L 甘露醇 l〇g/L 烷基糖苷 lg/L 椰油酰胺丙基甜菜碱 lg/L 叠氮钠 lg/L。
【文档编号】G01N21/78GK104359906SQ201410696971
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年11月28日 优先权日:2014年11月28日
【发明者】杨君莉, 李志明, 甘宜梧, 谭柏清, 谢清华, 包兴艳, 赵新 申请人:山东博科生物产业有限公司