Ncx1和nckx4作为诊断动脉导管闭合或开放的标志物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及NCX1和NCKX4作为诊断动脉导管闭合或开放的标志物。本发明通过western blot、Qrt-PCR和免疫荧光三种方法对动脉导管闭合及开放的患者进行了蛋白表达差异的分析，首次证明NCX1、NCKX4蛋白在人动脉导管组织中表达，并且这些蛋白在闭合和开放的两组动脉导管组织中的相对表达量具有明显的差异，可能是调控动脉导管闭合或开放的关键因子，可用于动脉导管未闭的临床诊断，且诊断的准确度高。
【专利说明】NCX1和NCKX4作为诊断动脉导管闭合或开放的标志物
【技术领域】
[0001] 本发明涉及分子生物学及医学的临床诊断【技术领域】，具体地说，涉及NCX1和 NCKX4作为诊断动脉导管闭合或开放的标志物。
【背景技术】
[0002] 动脉导管是主动脉与肺动脉之间的一根管道，为胎儿循环的重要通路。小儿出生 后，动脉导管即在功能上关闭，绝大多数婴儿生后3个月左右在解剖上逐渐闭合成为动脉 初带，若不闭合即称动脉导管未闭。动脉导管的闭合分为两期；1.第一期为生理闭合期。婴 儿出生啼哭后第一 口吸气，肺泡即膨胀，肺血管阻力随之下降，肺动脉血流开始直接进入肺 脏，建立正常的肺循环，而不流经动脉导管，促进其闭合。动脉导管的组织学结构与两侧的 主动脉、肺动脉不同，管壁主要由平滑肌而不是弹性纤维组织组成，中层含粘性物质。足月 婴儿出生后血氧张力升高，作用于平滑肌，使之环形收缩，同时管壁粘性物质凝固，内膜垫 突入管腔，造成血流阻滞，营养障碍和细胞分解性坏死，因而导管发生生理性闭合。一般在 出生后10?15小时内完成，但在7?8天内有潜在性再开放的可能。2.此后内膜垫弥漫 性纤维增生完全封闭管腔，最终形成导管初带。导管纤维化一般起始于肺动脉侧，向主动脉 延伸，但主动脉端可W不完成，因而呈壶腹状。纤维化解剖性闭合，88%婴儿于8周内完成。 如该闭合过程延迟称动脉导管延期未闭。动脉导管出生后6个月未能闭合，将终生不能闭 合，则称持续动脉导管闭锁不全，临床上简称动脉导管闭锁不全。
[0003] 轴巧交换蛋白（NC幻是广泛存在于动物细胞膜上的一种离子转运蛋白，它在调节 细胞内巧离子平衡中发挥着关键的作用。迄今为止，科学家已克隆出8个不同类型、两大家 族的 NCX，他们分别是 NCX1、NCX2、NCX3 W及钟 W来的 NCX NCKX1、NCKX2、NCKX3、NCKX4 W 及 NCKX5。
[0004] 有许多从左向右分流也内崎形在胸骨左缘可听到同样的连续性机器样杂音或接 近连续的双期也杂音，难W辨识，在建立动脉导管未闭诊断进行治疗前必须予W鉴别。目前 尚未见关于动脉导管闭合诊断标志物的报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供用于诊断动脉导管未闭的标志物。
[0006] 在本发明的第一方面，NCX1蛋白可用作诊断动脉导管未闭的标志物。
[0007] 据此，本发明提供了 NCX1蛋白或其特异性抗体的用途，用于制备诊断动脉导管未 闭的试剂或试剂盒。
[0008] 还提供了一种用于诊断动脉导管未闭的试剂盒，所述的试剂盒包含检测NCX1蛋 白含量的试剂和检测目-actin蛋白含量的试剂。
[0009] 优选地，所述的检测NCX1蛋白含量的试剂为NCX1蛋白的特异性抗体，所述的检测 目-actin蛋白含量的试剂为目-actin蛋白的特异性抗体。
[0010] 还提供了一种芯片或阵列，所述的芯片或阵列上具有检测NCX1蛋白的试剂和检 测目-actin蛋白含量的试剂。
[0011] 优选地，所述的检测NCX1蛋白含量的试剂为NCX1蛋白的特异性抗体，所述的检测 目-actin蛋白含量的试剂为目-actin蛋白的特异性抗体。
[0012] 在本发明的另一方面，NCKX4蛋白可用作诊断动脉导管未闭的标志物。
[0013] 据此，本发明提供了 NCKX4蛋白或其特异性抗体的用途，用于制备诊断动脉导管 未闭的试剂或试剂盒。
[0014] 还提供了一种用于诊断动脉导管未闭的试剂盒，所述的试剂盒包含检测NCKX4蛋 白含量的试剂和检测目-actin蛋白含量的试剂。
[0015] 优选地，所述的检测NCKX4蛋白含量的试剂为NCKX4蛋白的特异性抗体，所述的检 测目-actin蛋白含量的试剂为目-actin蛋白的特异性抗体。
[0016] 还提供了一种芯片或阵列，所述的芯片或阵列上具有检测NCKX4蛋白的试剂和检 测目-actin蛋白含量的试剂。
[0017] 优选地，所述的检测NCKX4蛋白含量的试剂为NCKX4蛋白的特异性抗体，所述的检 测目-actin蛋白含量的试剂为目-actin蛋白的特异性抗体。
[001引本发明优点在于：
[0019] 本发明通过western blot、化t-PCR和免疫英光H种方法对动脉导管闭合及开放 的患者进行了蛋白表达差异的分析，首次证明NCX1、NCKX4蛋白在人动脉导管组织中表达， 并且该些蛋白在闭合和开放的两组动脉导管组织中的相对表达量具有明显的差异，可能是 调控动脉导管闭合或开放的关键因子，可用于动脉导管未闭的临床诊断，且诊断的准确度 商。
【专利附图】
【附图说明】
[0020] 附图 1 是 NCX1、NCKX3 和 NCKX4 的 Western-blot 实验结果。
[002。 附图2是NCX1、NCKX3和NCKX4的化t-PCR实验结果，其中白色立柱为闭合组，黑 色立柱为开放组。
[0022] 附图3是NCX1、NCKX3和NCKX4的免疫英光实验结果，其中白色立柱为闭合组，黑 色立柱为开放组。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合附图对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。下列实施例中未注 明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆；实验手册（New York:Cold Spring Harbor L油oratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建 议的条件。
[0024] 实施例1
[00幼 1.材料和方法
[0026] 1. 1分离人动脉导管组织
[0027] 该实验所有步骤和过程均获得上海交通大学医学院伦理委员会批准。开放（n = 10,年龄=30. 2 + 6. 3天）或闭合（n = 10,年龄=25. 3 + 7. 9天）的动脉导管组织取自于 手术过程中的动脉导管依赖的先天性也脏病患儿（患儿详细信息见表1)。所有病人在手 术前均使用前列腺素El,但闭合组的动脉导管在手术前依然闭合了。动脉导管的状态（开 放或闭合）均经过也脏超声和CT确认，并在手术过程加W确认。所有样本用生理盐水冲洗 后，分成四部分，并迅速冻存于液氮中。
[002引表1患儿临床信息
[0029]
【权利要求】
1. NCX1蛋白或其特异性抗体的用途，其特征在于，用于制备诊断动脉导管未闭的试剂 或试剂盒。
2. -种用于诊断动脉导管未闭的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含检测NCX1蛋 白含量的试剂和检测0 -actin蛋白含量的试剂。
3. 根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的检测NCX1蛋白含量的试剂为 NCX1蛋白的特异性抗体，所述的检测0-actin蛋白含量的试剂为0-actin蛋白的特异性 抗体。
4. 一种芯片或阵列，其特征在于，所述的芯片或阵列上具有检测NCX1蛋白的试剂和检 测@ -actin蛋白含量的试剂。
5. 根据权利要求4所述的芯片或阵列，其特征在于，所述的检测NCX1蛋白含量的试剂 为NCX1蛋白的特异性抗体，所述的检测0-actin蛋白含量的试剂为0-actin蛋白的特异 性抗体。 6. NCKX4蛋白或其特异性抗体的用途，其特征在于，用于制备诊断动脉导管未闭的试剂 或试剂盒。
7. -种用于诊断动脉导管未闭的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含检测NCKX4 蛋白含量的试剂和检测0 -actin蛋白含量的试剂。
8. 根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的检测NCKX4蛋白含量的试剂为 NCKX4蛋白的特异性抗体，所述的检测0 -actin蛋白含量的试剂为0 -actin蛋白的特异性 抗体。
9. 一种芯片或阵列，其特征在于，所述的芯片或阵列上具有检测NCKX4蛋白的试剂和 检测0 -actin蛋白含量的试剂。
10. 根据权利要求9所述的芯片或阵列，其特征在于，所述的检测NCKX4蛋白含量的试 剂为NCKX4蛋白的特异性抗体，所述的检测0 -actin蛋白含量的试剂为0 -actin蛋白的 特异性抗体。
【文档编号】G01N33/68GK104502604SQ201410723762
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月3日 优先权日:2014年12月3日
【发明者】刘锦纷, 洪海筏, 叶霖财 申请人:上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心