一种菟丝子配方颗粒指纹图谱及其建立方法

文档序号:6252058阅读:1097来源:国知局
一种菟丝子配方颗粒指纹图谱及其建立方法
【专利摘要】本发明涉及一种菟丝子配方颗粒指纹图谱及其建立方法,属于药物分析【技术领域】。包括对照品、供试品溶液的制备、色谱条件的选择和指纹图谱的建立。通过对13批菟丝子配方颗粒指纹图谱的对比,确定了5个共有特征峰,以金丝桃苷峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±5%之内。规定值为:1号峰0.24、2号峰0.82、S峰1.00、3号峰1.11、4号峰1.63。 本发明重复性好,准确可靠,所建立的HPLC指纹图谱方法可有效地控制菟丝子配方颗粒的质量。
【专利说明】一种菟丝子配方颗粒指纹图谱及其建立方法

【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药材的质量控制方法,具体涉及一种菟丝子配方颗粒指纹图谱 及其建立方法,属于药物分析【技术领域】。

【背景技术】
[0002] 中药配方颗粒是以符合炮制规范的优质中药饮片为原料,采用现代高新技术提炼 而成的单味浓缩颗粒,其性味、归经、功效与原生药基本一致。中药配方颗粒是中药剂型改 革的一部分,代替传统饮片使用,要求"源于饮片,高于饮片"。在临床使用中实现了用药的 "高效安全、稳定可控、方便卫生"。由于中药配方颗粒具有小剂型、疗效好、见效快,服用、携 带、贮藏方便等特点,非常适应现代社会包括国际社会对天然药物的需求和现代社会紧张 生活的需要。
[0003] 宽丝子为旋花科植物宽丝子CuscutachinensisLam.的干燥成熟种子,始载于 《神农本草经》,并被列为上品,味甘、辛,性平,功效补益肝肾,固精缩尿,安胎,明目,止 泻,是中医补肾壮阳的要药。现代药理研究表明其具有增强生殖系统作用,提高心血管系 统功能,提高免疫力、抗氧化、抗衰老、抗癌、保肝明目等作用,用于肝肾不足,腰膝酸软,阳 痿遗精,遗尿尿频,肾虚胎漏,胎动不安,目昏耳鸣,脾肾虚泻。菟丝子主要含有黄酮类、有机 酸、甾醇类、多糖、生物碱类、微量元素和氨基酸等多种成分,其中黄酮类成分为其主要有效 成分,黄酮类化合物包括金丝桃苷、紫云英苷、山奈酚、槲皮素、槲皮素-3-0-3-D-半乳糖 (2- 1)P-D-芹糖苷等。由于近年来,菟丝子在制药及临床需要量增大,而其产量又低,产 生了供求失衡现象,价格走高,所以菟丝子出现了严重的掺假现象,混淆品,伪品层出不穷, 是各个药材市场上抽检不合格率最高的品种之一。因此,急需一种标准对菟丝子药材及菟 丝子制剂的质量进行判定。
[0004] 目前,我国质量控制体系对中药及其制剂的质量控制内容主要包括外观鉴别、性 状检查以及有效成分的含量测定。中药配方颗粒已失去了药材原本的外观性状,其质量控 制很大程度依靠有效成分的检测。而在有效成分的含量测定方面,所测成分大多是1-2个 指标成分,这与中药所含化学成分复杂,发挥药效时多成分、多靶点协同作用的特性不甚吻 合。此外,在各品种的性状、理化鉴别以及含量测定方面,存在普适性内容,即有效成分的专 属性不强,例如仅仅鉴定绿原酸不能区分金银花、山银花或菊花,因此较难全面科学的评价 中药材及其制剂的质量。特征指纹图谱作为一种综合的、可量化的鉴别模式,中药材及其制 剂的真实性和质量的一致性以及稳定性均可有效地加以检测和控制。


【发明内容】

[0005] 本发明的目的是为菟丝子配方颗粒的质量控制和真伪鉴别提供一个方法,建立菟 丝子配方颗粒指纹图谱的方法,并由此方法得到菟丝子配方颗粒的指纹图谱。
[0006] 为实现上述发明的目的,本发明采取的技术方案如下: 一种菟丝子配方颗粒指纹图谱的建立方法,采用高效液相色谱法,包括如下步骤: (1) 对照品溶液的制备:精确称定金丝桃苷对照品,加甲醇配制成每lml含金丝桃苷 40~55yg的溶液,作为对照品溶液; (2) 供试品溶液的制备:精确称定菟丝子配方颗粒粉末0. 2~0. 8g,置锥形瓶中,加体积 浓度为80%~100%的甲醇溶液15~35ml,超声处理15~60min,放冷,用80%~100%的甲醇补足 减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,过〇. 1~〇. 5ym微孔滤膜,即得供试品溶液; (3 )测定:将步骤(1)所得的对照品溶液和步骤(2 )所得的供试品溶液分别进行高效液 相色谱分析,得到HPLC指纹图谱; (4)指纹图谱建立:通过比较不同菟丝子配方颗粒的HPLC特征图谱,确定菟丝子配方 颗粒的共有特征峰。
[0007] 所述的一种菟丝子配方颗粒指纹图谱的建立方法,供试品溶液的制备中所述的超 声处理为功率100~300W,频率20~30KHz。
[0008] 所述的一种菟丝子配方颗粒指纹图谱的建立方法,高效液相色谱法采用的仪器为 Waters2695高效液相色谱系统,EmpowerPro色谱工作站,Waters2489紫外检测器。 [0009] 所述的一种菟丝子配方颗粒指纹图谱的建立方法,步骤(3)所述的色谱条件 是色谱柱:Hypersil:250_X4. 6_,5ym柱;流动相:A乙腈-B水,梯度洗脱:0~8min,A为 10%~13% ;8~38min,A为 13% ;38?48min,A为 13%~17% ;48?60min,A为 17%~20% ; 60~65min,A为 20%~10% ;检测波长:300~360nm;流速 0? 5~1. 5ml/min;柱温:15~35°C;进样 量 20~30M<1。
[0010] 一种菟丝子配方颗粒指纹图谱的建立:取13批菟丝子配方颗粒(广东一方制药有 限公司,批号:0701045、0711137、0809123、0807116、0811114、0812561、0903125、0907077、 0911086、1003128、1003342、1006124、1011116)的供试品溶液,进样,记录 65min的色谱图, 以金丝桃苷对照品为参照峰,结果13批配方颗粒有5个共有峰,分别在7. 6, 26. 2, 32. 4, 35. 6,51. 8min出峰,见图2,共有峰的相对峰面积、相对保留时间均具有较好的重复性,见 表一、表二;5个共有峰的平均相对保留时间依次为:0? 238、0. 815、1. 000、1. 106、L627, RSD均小于2. 0%,这5个共有峰出峰时间较为稳定,可作为菟丝子配方颗粒的特征峰。
[0011] 特征图谱的色谱峰的指认: 精密吸取供试品溶液及金丝桃苷对照品溶液各25ill,注入高效液相色谱仪,在 32. 33min处的色谱峰为金丝桃苷的色谱峰,金丝桃苷的峰分布正态,达到基线分离,且峰面 积占总峰面积的25?56%,故选择金丝桃苷的峰作为参考峰,标记为峰S,其他特征峰标记 为峰1?4,见图1。
[0012] 重复性试验 取同一批样品(1003342)共6份,按上述方法分别制备成供试品溶液,进样测定,以金 丝桃苷色谱峰为参照峰(S),计算1?5号共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值, 其中各特征峰的相对保留时间的RSD均小于0. 6%,特征峰的相对峰面积RSD均小于3. 0%, 表明方法重复性良好。
[0013] 精密度试验 取重复性试验中同一供试品溶液,连续进样6次,以金丝桃苷色谱峰为参照峰(S),计 算1?5号共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值,其中各特征峰的相对保留时间 的RSD均小于0. 6%,特征峰的相对峰面积RSD均小于1. 0%,表明仪器精密度良好。
[0014] 稳定性试验 取重复性试验中同一供试品溶液,分别于0, 2,4,8,12, 24h进样测定,以金丝桃苷色谱 峰为参照峰(S),计算1?5号共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值,其中所相对 应的色谱峰相对保留时间均小于2. 0%,特征峰的相对峰面积的RSD均小于3. 0%,表明供试 品溶液在24h内稳定。
[0015] 表1 13批菟丝子配方颗粒相对保留时间

【权利要求】
1. 一种菟丝子配方颗粒指纹图谱,其特征在于:菟丝子配方颗粒的特征图谱有5个特 征峰,以金丝桃苷峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间应在规 定值的±5%之内,规定值为:1号峰0.24、2号峰0.82、5峰1.00、3号峰1.11、4号峰1.63。
2. -种菟丝子配方颗粒指纹图谱的建立方法,其特征在于:采用高效液相色谱法,包 括如下步骤: (1) 对照品溶液的制备:精确称定金丝桃苷对照品,加甲醇配制成每lml含金丝桃苷 40~55 y g的溶液,作为对照品溶液; (2) 供试品溶液的制备:精确称定菟丝子配方颗粒粉末0. 2~0. 8g,置锥形瓶中,加体积 浓度为80%~100%的甲醇溶液15~35ml,超声处理15~60min,放冷,用80%~100%的甲醇补足 减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,用〇. l~〇. 5 y m微孔滤膜,滤过,即得供试品溶液; (3 )测定:将步骤(1)所得的对照品溶液和步骤(2 )所得的供试品溶液分别进行高效液 相色谱分析,得到HPLC指纹图谱; (4)指纹图谱建立:通过比较不同菟丝子配方颗粒的HPLC特征图谱,确定菟丝子配方 颗粒的共有特征峰。
3. 根据权利要求2所述的一种菟丝子配方颗粒指纹图谱的建立方法,其特征在于:供 试品溶液的制备中所述的超声处理为功率l〇〇~300W,频率20~30KHz。
4. 根据权利要求2所述的一种菟丝子配方颗粒指纹图谱的建立方法,其特征在于:高 效液相色谱法采用的仪器为Waters 2695高效液相色谱系统,Empower Pro色谱工作站, Waters 2489紫外检测器。
5. 根据权利要求2所述的一种菟丝子配方颗粒指纹图谱的建立方法,其特征在于:步 骤(3)所述的色谱条件是色谱柱:Hypersil :250mmX4. 6mm,5 y m柱;流动相:A乙腈-B水, 梯度洗脱:〇~8min,A 为 10%~13% ;8~38min,A 为 13% ;38~48min,A 为 13%~17% ;48~60min, A 为 17%~20% ;60~65min,A 为 20%~10% ;检测波长:300~360nm ;流速0? 5~1. 5ml/min ;柱温: 15~35°C ;进样量 20~30W。
【文档编号】G01N30/02GK104458954SQ201410742982
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月9日 优先权日:2014年12月9日
【发明者】谭登平, 程学仁, 谢菲, 王闽予, 杜兰哲, 朱德全, 李慧 申请人:广东一方制药有限公司
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