检测人血液中1,5-脱水山梨醇的试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明公开一种检测人血液中1,5-脱水山梨醇的试剂盒，R1：缓冲液20～200mM4-氨基安替比林1～10mMATP0.2～2mMPEP1～10mM,ATP-HK 1～50KU/L,丙酮酸激酶1～50KU/L抗坏血酸氧化酶1～50KU/L钒酸钠0.05～10mM表面活性剂0.01～5％稳定剂0.1～10％防腐剂0.01～1％；R2:缓冲液20～200mM，TOOS 1～10mM，POD 1～100KU/L，PROD 10～200KU/L，表面活性剂0.01～5％，稳定剂0.1～10％，防腐剂0.01～1％。具有效防止葡萄糖、胆红素、抗坏血酸、血脂等内源性干扰，稳定性好的优点。
【专利说明】检测人血液中1,5-脱水山梨醇的试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医学检验【技术领域】，具体涉及一种检测人血液中1，5-脱水山梨醇的 试剂盒。
【背景技术】
[0002] 糖尿病属于临床常见病、多发病，原因是胰岛素分泌不足引起，血液中1，5_脱水 山梨醇（1，5-AG)与葡萄糖（GLU)、糖化血红蛋白（HbAlc)、糖化白蛋白（GA)呈显著的负相 关。有资料表明，血浆葡萄糖（GLU)>8. 3mmol/L者，无一例伴有高水平的血浆1，5_脱水 山梨醇（1，5-AG)。
[0003] 1，5-脱水山梨醇（1，5-AG)与现有的糖尿病指标均呈现出显著的负相关，血液 中1，5_脱水葡萄糖醇的减少程度与糖尿病的严重程度显著相关。1，5_脱水葡萄糖醇 (1，5-AG)与其他指标最显著的区别是反映糖尿病病情变化的周期不同，血糖（GLU)反映 病人当时血糖状况，糖化白蛋白（GA)反应病人半个月内血糖的平均状况，糖化血红蛋白 (HbAlc)反映病人最近2?3个月左右的血糖平均水平，而1，5_脱水葡萄糖醇（1，5-AG)可 以反映近几天至1周的平均血糖水平。
[0004] 测定1，5-脱水山梨醇有高效液项色谱、微柱层析法、化学发光法等。这些方法比 较准确，但操作费事难以批量检测，并且这些方法只能现配现用，不能长期保存。而酶法测 定由于其无污染，并可试用与生化仪，操作简单等特点，有利于大规模推广。目前国内外主 要采用酶法测定1，5_脱水山梨醇（1，5-AG)，主要有氧化酶法与脱氢酶法两种方法。氧化 酶法的原理为，通过吡喃糖氧化酶（PROD)催化1，5-脱水山梨醇（1，5-AG)生成1，5-脱水 果糖和H2O2, H2O2在过氧化物酶的作用下使4-AAP和TOOS反应生成醌类有色物质。脱氢酶 法的原理为：1，5_脱水山梨醇在ADP依赖性己糖激酶（ADP-HK)的作用下生成AG-6磷酸 (AG-6-P)。AG-6-P再和NADP进行反应，生成NADPH。NADPH具有还原性，和显色剂作用生 成显色物质。但目前市场上的酶法试剂盒存在着稳定性差，易受葡萄糖、胆红素、抗坏血酸、 血脂等内源性干扰。
【发明内容】
[0005] 本发明针对现有技术的上述不足，提供一种能有效防止葡萄糖、胆红素、抗坏血 酸、血脂等内源性干扰，稳定性好的检测人血液中1，5-脱水山梨醇的试剂盒。
[0006] 为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种检测人血液中1，5-脱水 山梨醇的试剂盒，该试剂盒包含试剂1和试剂2,试剂1和试剂2中的组分和含量包括 ：
[0007] 试剂 1 :
[0008]
【权利要求】
1. 一种检测人血液中1，5-脱水山梨醇的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包含试剂1和 试剂2,上述两试剂中的各组分和含量包括 ： 试剂1 : 缓冲液 20~200mM 4-氨基安替比林 l~10mM ATP 0.2~2mM 磷酸烯醇式丙酮酸 1?10mM ATP依赖性己糖激酶 1?50KU/L 丙酮酸激酶 1-50KU/L 抗坏血酸氧化酶 1-50KU/L 偏钒酸钠 0.05~10mM 表面活性剂 0.01?5% 稳定剂 0.1?10% 防腐剂 0.01~1%; 试剂2 : 缓冲液 20?200mM TOOS 卜 10mM 过氧化物酶 1~100KU/L 吡喃糖氧化酶 10~200KU/L 表面活性剂 0.01?5% 稳定剂 0.1-10% 防腐剂 0.01~1%。
2. 根据权利要求1所述的检测人血液中1，5-脱水山梨醇的试剂盒，其特征在于：该试 剂盒包含试剂1和试剂2,上述两试剂中的各组分和含量包括 ： 试剂1 : 缓冲液 lOOmM 4-氨基安替比林 5mM ATP lmM 磷酸烯醇式丙酮酸 5mM ATP依赖性己糖激酶 20KU/L 丙酮酸激酶 20KU/L 抗坏血酸氧化酶 20KU/L 偏钒酸钠 2mM 表面活性剂 0.1% 稳定剂 1% 防腐剂 0.1% 试剂2 : 缓冲液 lOOmM TOOS 5mM 过氧化物酶 30KU/L 吡喃糖氧化酶 50KU/L 表面活性剂 0.1% 稳定剂 1% 防腐剂 0.1%。
3. 根据权利要求1或2所述的检测人血液中1，5-脱水山梨醇的试剂盒，其特征在于： 所述的缓冲液为磷酸缓冲液，Tris-HCl缓冲液，MES，MOPS，HEPES中的一种。
4. 根据权利要求1或2所述的检测人血液中1，5-脱水山梨醇的试剂盒，其特征在于： 所述表面活性剂为SDS，吐温，曲拉通，司班，Brij35中的一种。
5. 根据权利要求1或2所述的检测人血液中1，5-脱水山梨醇的试剂盒，其特征在于： 所述稳定剂为海藻糖，蔗糖，甘露醇中的一种。
6. 根据权利要求1或2所述的检测人血液中1，5-脱水山梨醇的试剂盒，其特征在于： 所述防腐剂为叠氮钠，proclin300,G418,苯甲酸钠中的一种。
7. 根据权利要求1所述检测人血液中1，5-脱水山梨醇的试剂盒，其特征在于，试剂1 中还含有0. 1?lOOmM钾离子，或者0. 1?lOOmM镁离子。
8. 根据权利要求1所述检测人血液中1，5-脱水山梨醇的试剂盒，其特征在于，试剂1 和试剂2中的缓冲液的pH值为5. 0?9. 0。
【文档编号】G01N33/66GK104483487SQ201410803217
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月22日 优先权日:2014年12月22日
【发明者】邹炳德, 邹继华, 汪屹, 贾江花 申请人:宁波美康生物科技股份有限公司