一种快速定量检测gal-3 的免疫荧光试纸条的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种快速定量检测GAL-3的免疫荧光试纸条，它包括试纸条支撑片以及试纸条支撑片上顺次搭接粘贴的样品垫片、检测膜和吸水垫片，样品垫片和检测膜之间设有偶合物垫片，偶合物垫片一端上方设有第一层玻璃纤维垫片，其一端下方设有第二层玻璃纤维垫片或者偶合物垫片一端上方仅设有第一层玻璃纤维垫片或者不设有任一垫片，所述检测膜上设有检测线，所述检测线包被有半乳糖凝集素-3（GAL-3）抗体，所述检测线另一边设有控制线，控制线包被有抗链霉亲和素（SAV）抗体，所述偶合物垫片上涂布有荧光标记的GAL-3单克隆抗体或多克隆抗体偶合物。该试纸具有方便快捷、操作简单、结果准确等优点，适于临床快速诊断。
【专利说明】-种快速定量检测GAL-3的免疫荧光试纸条
【技术领域】
[0001] 本实用新型属于临床医学诊断领域，具体涉及一种用于定量检测GAL-3的免疫荧 光试纸条。
【背景技术】
[0002] 半乳糖凝集素-3( Galectin-3，Gal_3)也称半乳糖结合蛋白-3,分子量为31kD，是 半乳糖凝集素家族的重要成员之一。Galectin家族的成员需要满足两个标准：第一对-半 乳糖的亲和力；第二在糖识别域（the carbohydrate recognition domain, CRD)有显著序 列相似性。Galectin-3有两个功能域：羧基端是糖识别域，包含了 135个氨基酸残基；氨 基端包含100?150个氨基酸残基，由富含脯氨酸和甘氨酸的9个氨基酸残基串联重复组 成。Galectin-3主要在巨噬细胞、嗜酸性细胞、中性粒细胞及肥大细胞中表达。其功能依据 其在细胞内的定位。在静止细胞内主要存在于胞浆，而在增殖细胞中则主要存在于细胞核。 Galectin-3参与调节细胞生长，抗凋亡，介导细胞黏附，参与血管形成及炎症反应等生物学 功能。研究表明半乳糖凝集素-3是心肌纤维化标志物，与心力衰竭的发生和死亡风险增加 相关。心室功能障碍患者的半乳糖凝集素-3含量会升高，而且含量于心衰的严重程度直接 相关。快速定量检测患者的半乳糖凝集素-3水平具有重大的临床意义。
[0003] 目前，检测半乳糖凝集素-3 (Gal-3)的方法目前主要是酶联免疫技术（ELISA)， ELISA技术存在以下缺点：检测设备要求高，成本高；干扰因素较多，重复性不好；检测时间 长。因此酶联免疫技术检测半乳糖凝集素-3不适合临床快速诊断。目前尚无快速的定量 检测方法，因此如何能够制作出快速的定量检测试纸成为需要迫切解决的问题。
【发明内容】
[0004] 本实用新型要解决的技术问题是提供一种能快速定量检测GAL-3的免疫荧光试 纸条，本实用新型所述快速定量检测GAL-3的免疫荧光试纸具有方便快捷、操作简单、结果 准确等优点，适于临床快速检测。
[0005] 为了解决上述技术问题，本实用新型提供了一种快速定量检测GAL-3的免疫荧光 试纸条，它包括试纸条支撑片以及试纸条支撑片上顺次搭接粘贴的样品垫片、检测膜和吸 水垫片，所述样品垫片和检测膜之间设有偶合物垫片，偶合物垫片一端上方设有第一层玻 璃纤维垫片，其一端下方设有第二层玻璃纤维垫片或者偶合物垫片一端上方仅设有第一层 玻璃纤维垫片或者不设有任一垫片，所述检测膜上设有检测线，所述检测线包被有半乳糖 凝集素-3 (GAL-3)抗体，所述检测线另一边设有控制线，控制线包被有抗链霉亲和素（SAV) 抗体，所述偶合物垫片上涂布有荧光标记的半乳糖凝集素-3单克隆抗体或多克隆抗体偶 合物。
[0006] 所述控制线与检测线平行设置于检测膜上，并与偶合物垫片部分重叠或不重叠。
[0007] 采用如上技术方案后，其有益效果为：
[0008] 本实用新型所述的快速定量检测GAL-3的免疫荧光试纸的工作原理是：采用免疫 侧流反应原理，通过双抗体夹心法制备而成。检验时样本中的GAL-3抗原首先与偶合垫上 的GAL-3抗体偶合物发生免疫反应，形成免疫复合物。其后免疫复合物随着样本在检测膜 上层析流动，当免疫复合物层析至检测膜上的检测区（GAL-3检测线）时，与预先包被在检 测膜上的抗GAL-3抗体发生反应从而被固定在检测膜的检测线上。样本中的GAL-3越多， 检测线上的复合物越多，条带上的光密度值就越高。同时，在检测过程中，未与GAL-3抗原 结合的荧光标记的GAL-3抗体偶合物，当层析至检测膜的控制线时，免疫荧光偶合物会与 预先包被在检测膜上的抗SAV抗体发生反应从而被固定在对照区(控制线）上。
[0009] 当反应结束后，利用免疫荧光检测仪将控制线和检测线的光密度进行分析，并将 所分析得到的结果进行运算，从而得到相对光密度值（RI)。然后检测仪根据已预先设置在 检测仪内的标准曲线对GAL-3的浓度进行计算并显示结果，以ng/mL为单位表示。
[0010] 综上所述，本实用新型所述快速定量检测GAL-3的免疫荧光试纸条，该试纸具有 方便快捷、操作简单、结果准确等优点，适于临床快速诊断。
【专利附图】
【附图说明】
[0011] 图1是本实用新型所述快速定量检测GAL-3的免疫荧光试纸条的结构示意图。
[0012] 其中：1_样品垫片、2-检测膜、3-吸水垫片、4-支撑片、5偶合物垫片、6-1第一层 玻璃纤维垫片、6-2第二层玻璃纤维垫片、7-检测线、8-控制线。
【具体实施方式】
[0013] 下面结合附图和【具体实施方式】对本实用新型进行详细说明，不能理解为是对本实 用新型的限制；
[0014] 制备快速定量检测GAL-3的免疫荧光试纸条：
[0015] 如图1所示的免疫荧光试纸条结构，一种快速定量检测GAL-3的免疫荧光试纸条， 它包括试纸条支撑片4以及试纸条支撑片上顺次搭接粘贴的样品垫片1、检测膜2和吸水垫 片3,所述样品垫片1和检测膜2之间设有偶合物垫片5,偶合物垫片5 -端上方设有第一 层玻璃纤维垫片6-1，其一端下方设有第二层玻璃纤维垫片6-2或者偶合物垫片5 -端上 方仅设有第一层玻璃纤维垫片6-1或者不设有任一垫片，所述检测膜2上设有检测线7,所 述检测线7包被有半乳糖凝集素-3 (GAL-3)抗体，所述检测线7另一边设有控制线8,控制 线8包被有抗链霉亲和素（SAV)抗体，所述偶合物垫片5上涂布有荧光标记的半乳糖凝集 素-3单克隆抗体或多克隆抗体偶合物。
[0016] 所述控制线8与检测线7平行设置于检测膜2上，并与偶合物垫片5部分重叠或 不重叠。
[0017] 其中，检测膜2在荧光试纸中用于固定包被抗体，同时也是免疫反应的发生处；检 测线7是将半乳糖凝集素-3 (GAL-3)抗体使用1*PBS、甲醇等缓冲液稀释后，划线于所述检 测膜2上，干燥及烘烤后，即得；控制线8是将抗链霉亲和素（SAV)抗体使用1*PBS、甲醇等 缓冲液稀释后，划线于所述检测膜2上，干燥及烘烤后，即得。
[0018] 其中，所述偶合物垫片5的原材料为玻璃纤维滤膜，将用于制备偶合物垫片的玻 璃纤维滤膜放入预封闭缓冲液中浸泡后取出，干燥后，用包膜仪器将荧光标记的半乳糖凝 集素-3单克隆抗体或多克隆抗体偶合物涂布在偶合物垫片5上，干燥即得。
[0019] 另外，所述样品垫片1可对液态样品起到初步过滤作用。将样本垫片1用封闭液 浸泡后，干燥即得。
[0020] 将上述各组成部件按图1所示结构粘贴在支撑垫片4上，获得快速定量检测GAL-3 的免疫荧光试纸条。
[0021] 按以下步骤进行检测：1)抽取的病人血清、血浆或全血等待检样本，如低温保存 样本需恢复至室温。2)将待测样品加入样本垫片1上，反应。3)判读，将所述免疫荧光试 纸置于免疫荧光检测仪中判定结果。
【权利要求】
1. 一种快速定量检测GAL-3的免疫荧光试纸条，它包括试纸条支撑片（4)以及试纸条 支撑片上顺次搭接粘贴的样品垫片（1)、检测膜（2)和吸水垫片（3)，所述样品垫片（1)和 检测膜（2)之间设有偶合物垫片（5)，偶合物垫片（5)-端上方设有第一层玻璃纤维垫片 (6-1 )，其一端下方设有第二层玻璃纤维垫片（6-2)或者偶合物垫片（5) -端上方仅设有第 一层玻璃纤维垫片（6-1)或者不设有任一垫片，其特征在于：所述检测膜（2)上设有检测线 (7 )，所述检测线（7 )包被有半乳糖凝集素-3 (GAL-3)抗体，所述检测线（7 )另一边设有控制 线（8)，控制线（8)包被有抗链霉亲和素（SAV)抗体，所述偶合物垫片（5)上涂布有荧光标记 的半乳糖凝集素-3单克隆抗体或多克隆抗体偶合物。
2. 根据权利要求1所述的免疫荧光试纸条，其特征在于：所述控制线（8)与检测线（7) 平行设置于检测膜（2)上，并与偶合物垫片（5)部分重叠或不重叠。
【文档编号】G01N33/66GK203909046SQ201420197148
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2014年4月22日 优先权日:2014年4月22日
【发明者】刘红剑, 威廉姆.努特, 何小红, 刘丽萍, 张丹 申请人:瑞莱生物科技（江苏）有限公司