一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒，包括外包装盒以及放置在外包装盒内的酶标板、孔板封口粘合片、试剂瓶和试剂瓶内衬；所述酶标板由微孔板和设置在微孔板上的微孔条组成，所述孔板封口粘合片由保护层和粘贴层组成，所述粘贴层能完全覆盖在酶标板上对微孔条进行密封；所述试剂瓶成套设置微生物试剂瓶、标准品试剂瓶、培养基试剂瓶、生物素检测用缓冲液试剂瓶和无菌水试剂瓶；所述试剂瓶内衬上设置孔位，所述孔位大小与试剂瓶对应，所述试剂瓶放置在孔位内固定。本实用新型操作便捷，检测周期短，重现性好，结构简单、体积小、重量轻、成本低，运输和使用方便，可满足大批量样品的检测，提高工作效率。
【专利说明】一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒
【技术领域】
[0001]本实用新型属于生化鉴定【技术领域】，具体涉及一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒。
【背景技术】
[0002]生物素，又称维生素B7或维生素H，属于B族维生素，是维持生物体正常生命过程所必需的一类有机物质，作为乙酰CoA羧化酶、丙酮酸羧化酶和丙酰CoA羧化酶的必需辅助因子，对于细胞的生长，脂类、糖和氨基酸代谢，DNA的生物合成和各种免疫细胞正常功能起重要作用，虽然需要量很少，但对维持健康十分重要，婴儿若缺乏会造成最严重的神经症状，出现躁狂、嗜睡和发育迟缓。
[0003]由于生物素在婴幼儿生长发育过程中起着极其关键的作用，并且人体不能合成，婴幼儿乳制品中生物素的含量越来越受到重视，为此，GB10767-2012中规定，婴幼儿乳制品中生物素的含量不得低于0.4yg/100KJ，生物素的定量分析在婴幼儿乳制品分析中的地位日￡fL关出。
[0004]当前婴幼儿乳制品生物素检测方法一般有国标微生物法，HPLC法和酶联免疫法，其中国标微生物法操作复杂，检测周期长，重现性差；HPLC法前处理复杂，所需仪器昂贵，普及率较低；酶联免疫法检测结果与实际值相差较大，尚未成熟。基于上述问题，研发一种操作便捷，检测周期短，重现性好，成本低的婴幼儿乳制品生物素检测试剂盒，显得尤为重要。
实用新型内容
[0005]本实用新型的目的是提供一种检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒，该试剂盒准确度高，操作简便，检测周期短，重现性好，成本低，可满足大批量样品的检测。
[0006]本实用新型技术方案如下:一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒，包括外包装盒以及放置在外包装盒内的酶标板、孔板封口粘合片、试剂瓶和试剂瓶内衬；所述酶标板由微孔板和设置在微孔板上的微孔条组成，所述孔板封口粘合片由保护层和粘贴层组成，所述粘贴层能完全覆盖在酶标板上对微孔条进行密封；所述试剂瓶成套设置微生物试剂瓶、标准品试剂瓶、培养基试剂瓶、生物素检测用缓冲液试剂瓶和无菌水试剂瓶；所述试剂瓶内衬上设置孔位，所述孔位大小与试剂瓶对应，所述试剂瓶放置在孔位内固定。
[0007]所述微孔板包括板框、纵向隔板以及横向隔板，纵向隔板与横向隔板均设置在板框内，二者垂直交错组成板格；
[0008]所述孔板封口粘合片包括纵向裁剪线和横向裁剪线，纵向裁剪线与横向裁剪线垂直交错组成粘合格；
[0009]所述纵向裁剪线和横向裁剪线的数量及尺寸与板框内设置的纵向隔板以及横向隔板对应，一个粘合格对应一个板格；使用时可根据密封整块微孔板或是若干条微孔条，决定使用整片粘合片还是对粘合片进行裁剪，剩余的粘合片放入试剂盒中；
[0010]所述酶标板为16孔或48孔或96孔；经过辐照灭菌后的酶标板单独包装于无菌铝箔袋中；
[0011]所述酶标板数量至少为I块，一块酶标板对应配置一片孔板封口粘合片及一套试剂瓶；
[0012]优选的，酶标板为96孔，数量为3块；孔板封口粘合片3片，试剂瓶3套，试剂瓶内衬上设置3套试剂瓶孔位；
[0013]进一步的，试剂瓶还设置有100X生物素检测用缓冲液试剂瓶；试剂瓶内衬上设置相应的孔位；
[0014]所述微孔条上设置8个微孔，微孔条与微孔板上的板格之间活动镶嵌，每条微孔条能从微孔板上拆下；
[0015]所述微生物试剂瓶为棕色西林瓶，对微生物进行避光保护，瓶内装的生物素检测用微生物为冻干的植物乳杆菌ATCC8014 ；
[0016]所述标准品试剂瓶为棕色西林瓶，对标准品进行避光保护，瓶内装有无菌冻干的生物素标准品；
[0017]所述培养基试剂瓶为半透明塑料瓶，瓶中装有生物素检测干粉培养基并放有袋装干燥剂以防止培养基吸潮；
[0018]所述缓冲液试剂瓶为半透明塑料瓶，瓶内装有IX生物素检测用缓冲液；
[0019]所述无菌水试剂瓶为半透明塑料瓶，瓶内装有无菌水；
[0020]所述100X缓冲液试剂瓶为半透明塑料瓶，瓶内装有100X生物素检测用缓冲液；
[0021]所述试剂瓶内衬为纸质或塑料中空盒，盒子上端设置固定试剂瓶的孔位；
[0022]所述孔位包括微生物试剂瓶孔位、标准品试剂瓶孔位、培养基试剂瓶孔位、生物素检测用缓冲液试剂瓶孔位和无菌水试剂瓶孔位；
[0023]进一步的，试剂盒内衬上还设置有100X缓冲液试剂瓶孔位。
[0024]检测原理:样品检测时，微孔中的生物素检测用微生物会利用样品中的生物素生长，直至样品中生物素耗尽，最终的菌体浊度与样品中生物素含量呈线性相关，通过检测样品孔中微生物的浊度并与标准曲线比较，再乘以样品前处理时的稀释倍数，即可得到样品中生物素的含量。
[0025]有益效果:本实用新型操作便捷，检测周期短，重现性好，结构简单、体积小、重量轻、成本低，运输和使用方便，可满足大批量样品的检测，提高工作效率。
【专利附图】
【附图说明】
[0026]图1是本实用新型实施例1中酶标板结构示意图；
[0027]图2是本实用新型实施例1中孔板封口粘合片结构示意图；
[0028]图3是本实用新型实施例1中试剂瓶内衬结构示意图；
[0029]图中1-酶标板2_孔板封口粘合片3_试剂瓶内衬11-微孔板12_微孔条13_板框14-纵向隔板15-横向隔板16-板格21-粘贴层22-保护层23-纵向裁剪线24-横向裁剪线25-粘合格31-微生物试剂瓶孔位32-标准品试剂瓶孔位33-培养基试剂瓶孔位34-生物素检测用缓冲液试剂瓶孔位35-无菌水试剂瓶孔位36-100X生物素检测用缓冲液试剂瓶孔位。
【具体实施方式】
[0030]下面通过具体的实施方式对本实用新型的一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒作进一步说明。除非特别说明，本实用新型中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方式应理解为说明性的，而非限制本实用新型的范围，本实用新型的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本实用新型实质和范围的前提下，对这些实施方式中的结构和形状进行的各种改变或改动也属于本实用新型的保护范围。
[0031]实施例1:
[0032]本实用新型技术方案如下:结合图1、2、3说明。
[0033]一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒，包括包装盒以及放置在包装盒内的酶标板1、孔板封口粘合片2、试剂瓶和试剂瓶内衬3 ;所述酶标板I由微孔板11和设置在微孔板11上的微孔条12组成，所述孔板封口粘合片2由粘贴层21和保护层22组成，所述粘贴层21能完全覆盖在酶标板I上对微孔条12进行密封；所述试剂瓶成套设置微生物试剂瓶、标准品试剂瓶、培养基试剂瓶、生物素检测用缓冲液试剂瓶和无菌水试剂瓶；所述试剂瓶内衬3上设置孔位，所述孔位大小与试剂瓶对应，所述试剂瓶放置在孔位内固定。
[0034]所述微孔板11包括板框13、纵向隔板14以及横向隔板15，纵向隔板14与横向隔板15均设置在板框13内，二者垂直交错组成板格16 ；
[0035]所述孔板封口粘合片2包括纵向裁剪线23和横向裁剪线24，纵向裁剪线23与横向裁剪线24垂直交错组成粘合格25 ；
[0036]所述纵向裁剪线23和横向裁剪线24的数量及尺寸与板框13内设置的纵向隔板14以及横向隔板15对应,一个粘合格25对应一个板格16 ;使用时可根据密封整块微孔板11或是若干条微孔条12，决定使用整片粘合片还是对粘合片进行裁剪，剩余的粘合片放入试剂盒中；
[0037]所述酶标板I为96孔；经过辐照灭菌后单独包装于无菌铝箔袋中；
[0038]所述酶标板I数量为3块，对应配置3片孔板封口粘合片2及3套试剂瓶及I个生物素检测用100X缓冲液试剂瓶；
[0039]所述微孔条12上设置8个微孔，微孔条12与微孔板上的板格16之间活动镶嵌，每条微孔条12能从微孔板11上拆下；
[0040]所述微生物试剂瓶为1mL棕色西林瓶，对微生物进行避光保护，瓶内装的生物素检测用微生物为冻干的植物乳杆菌ATCC8014 ；
[0041]所述标准品试剂瓶为1mL棕色西林瓶，对标准品进行避光保护，瓶内装有无菌冻干的生物素标准品4ng ；
[0042]所述培养基试剂瓶为15ml半透明塑料瓶，瓶中装有生物素检测干粉培养基0.75g，并放有袋装干燥剂以防止培养基吸潮；
[0043]所述生物素检测用缓冲液试剂瓶为60ml半透明塑料瓶，瓶内装有IX生物素检测用生物素缓冲液50mL ；
[0044]所述无菌水试剂瓶为15mL半透明塑料瓶,瓶内装有1mL无菌水；
[0045]所述100X生物素检测用缓冲液试剂瓶为15mL半透明塑料瓶，瓶内装有1mL 100X生物素缓冲液；
[0046]所述试剂瓶内衬为纸质或塑料中空盒，盒子上端设置固定试剂瓶的孔位；
[0047]所述孔位包括3个微生物试剂瓶孔位31、3个标准品试剂瓶孔位32、3个培养基试剂瓶孔位33、3个生物素检测用缓冲液试剂瓶孔位34和3个无菌水试剂瓶孔位35 ；
[0048]所述试剂瓶内衬上还设置有I个100X生物素检测用缓冲液试剂瓶孔位36。
[0049]本试剂盒每块酶标板最多可检测8个样品(不包括标准品)，可一次用完或将微孔条拆开进行多次检测，一个试剂盒最多可检测24个样品。
[0050]本试剂盒用于婴幼儿乳粉中生物素的检测，线性范围为0-0.42ng/mL,回收率为90% -110%o具体检测方法如下:
[0051]1.配制IX生物素检测用缓冲溶液(20mL/样品):将100X生物素检测用缓冲液用无菌超纯水稀释至IX备用。
[0052]2.婴幼儿乳粉样品的处理
[0053]a.称取lg(精确至0.0lg)乳粉样品于50mL离心管中，加入上述20mllX生物素检测用缓冲液，混匀，100度加热30分钟，迅速冷却至室温；
[0054]b.吸取上述溶液2ml，15000g离心2min，取上清液用0.22 μ m滤膜过滤除菌；
[0055]c.根据样品标签上的生物素含量，用生物素缓冲液，将样品稀释至生物素的浓度约为 0.06、0.12、0.24ng/mL。
[0056]3.生物素标准曲线制备
[0057]取生物素冻干标准品与IX生物素缓冲液各I瓶，吸取4mlIX生物素缓冲液加入冻干标准品中，配制成高浓度生物素标准溶液，之后取8个无菌的1.5ml离心管，依次稀释为0-0.42ng/ml的应用标准溶液。
[0058]4.取生物素测定用培养基与无菌水各I瓶，将无菌水倒入培养基瓶中，混匀，95度震荡加热5min，迅速冷却至室温，用0.22 μ I滤膜过滤除菌；
[0059]5.取生物素检测用微生物一瓶，溶解于冷却过滤除菌的生物素检测用培养基中混匀；
[0060]6.取100μ I稀释的样品或标准品加入96孔板中，加入加检测微生物的培养基ΙΟΟμ 1，每个浓度做3个平行，对标准品与样品的位置做好标记；
[0061]7.用96孔板封口粘合片封口，应用纸反复摩擦粘合片表面，使每个孔均被封闭，以防止培养过程中孔与孔之间交叉污染；
[0062]8.37度避光培养44-48小时；
[0063]9.培养结束后，确保各微孔密封良好，将96孔板颠倒，于桌面上水平摇晃彻底混匀；
[0064]10.去除96孔板封口粘合片，刺破微孔中的泡沫，立即使用酶标仪在波长550nm条件下读取浊度值；
[0065]11.绘制标准曲线，以标准品孔的浊度为纵坐标，以生物素标准品的浓度为横坐标，绘制标准曲线。
[0066]12.结果计算，将样品的浊度值代入标准曲线中，从标准曲线上读取对应的浓度，乘以对应的稀释倍数，即为样品中生物素含量。使用ELISA专业统计分析软件中4-Parameter计算方法进行标准曲线的绘制和计算样品中生物素浓度。
【权利要求】
1.一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒，其特征在于，包括外包装盒以及放置在外包装盒内的酶标板、孔板封口粘合片、试剂瓶和试剂瓶内衬；所述酶标板由微孔板和设置在微孔板上的微孔条组成，所述孔板封口粘合片由保护层和粘贴层组成，所述粘贴层能完全覆盖在酶标板上对微孔条进行密封；所述试剂瓶成套设置微生物试剂瓶、标准品试剂瓶、培养基试剂瓶、生物素检测用缓冲液试剂瓶和无菌水试剂瓶；所述试剂瓶内衬上设置孔位，所述孔位大小与试剂瓶对应，所述试剂瓶放置在孔位内固定。
2.根据权利要求1所述的一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒，其特征在于，所述酶标板数量至少为I块，所述酶标板为16孔或48孔或96孔；一块酶标板对应配置一片孔板封口粘合片及一套试剂瓶；经过辐照灭菌后的酶标板单独包装于无菌铝箔袋中。
3.根据权利要求1所述的一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒，其特征在于，所述试剂瓶成套设置，其中所述微生物试剂瓶为棕色西林瓶，瓶内装的生物素检测用微生物为冻干的植物乳杆菌ATCC8014;所述标准品试剂瓶为棕色西林瓶，瓶内装有无菌冻干的生物素标准品；所述培养基试剂瓶为半透明塑料瓶，瓶中装有生物素检测干粉培养基并放有袋装干燥剂；生物素检测用缓冲液试剂瓶为半透明塑料瓶，瓶内装有IX生物素检测用缓冲液；无菌水试剂瓶为半透明塑料瓶，瓶内装有无菌水。
4.根据权利要求1所述的一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒，其特征在于，所述孔位包括微生物试剂瓶孔位、标准品试剂瓶孔位、培养基试剂瓶孔位、生物素检测用缓冲液试剂瓶孔位和无菌水试剂瓶孔位。
5.根据权利要求1所述的一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒，其特征在于，所述微孔板包括板框、纵向隔板以及横向隔板，纵向隔板与横向隔板均设置在板框内，二者垂直交错组成板格；所述微孔条上设置8个微孔，微孔条与微孔板上的板格之间活动镶嵌，每条微孔条能从板架上拆下。
6.根据权利要求1所述的一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒，其特征在于，所述孔板封口粘合片设置纵向裁剪线和横向裁剪线，纵向裁剪线与横向裁剪线垂直交错组成粘合格；所述纵向裁剪线和横向裁剪线的数量及尺寸与板框内设置的纵向隔板以及横向隔板对应，一个粘合格对应一个板格。
7.根据权利要求1所述的一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒内衬为纸质或塑料中空盒，盒子上端设置固定试剂瓶的孔位。
8.根据权利要求1-7任一所述的一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒，其特征在于，包括I个10X生物素检测用缓冲液试剂瓶及相应设置在所述试剂瓶内衬上的100X生物素检测用缓冲液试剂瓶孔位；所述100X缓冲液试剂瓶为半透明塑料瓶，瓶内装有100X生物素检测用缓冲液。
9.根据权利要求8所述的一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒，其特征在于，所述酶标板为96孔，数量为3块；所述孔板封口粘合片3片，所述试剂瓶为3套，所述试剂瓶内衬上设置3套试剂瓶孔位。
10.根据权利要求9所述的一种用微生物法检测婴幼儿乳粉中生物素含量的试剂盒，其特征在于，所述微生物试剂瓶为1mL棕色西林瓶，瓶内装的生物素检测用微生物为冻干的植物乳杆菌ATCC8014 ;所述标准品试剂瓶为1mL棕色西林瓶，瓶内装有无菌冻干的生物素标准品4ng ;所述培养基试剂瓶为15ml半透明塑料瓶，瓶中装有生物素检测干粉培养基.0.75g并放有袋装干燥剂；所述生物素检测用缓冲液试剂瓶为60ml半透明塑料瓶，瓶内装有IX生物素检测用缓冲液50mL ;所述无菌水试剂瓶为15ml半透明塑料瓶，瓶内装有1mL无菌水；所述100X缓冲液试剂瓶为15ml半透明塑料瓶，瓶内装有100X生物素检测用缓冲液 10mL。
【文档编号】G01N33/82GK204086283SQ201420620610
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月24日 优先权日:2014年10月24日
【发明者】王杰伟, 何艳玲, 李瑾, 崔生辉, 吴艳辉 申请人:北京陆桥技术有限责任公司