25‑羟基维生素D荧光免疫层析用活化荧光乳胶微球的制作方法

文档序号:11131802阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种25-羟基维生素D荧光免疫层析试纸条用活化荧光乳胶微球的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

1)取表面活性剂加入pH为8~10的缓冲溶液中,再加入二甲基甲酰胺、N,N’-二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺;

2)取氨基表面的荧光乳胶微球的分散液,以缓冲溶液调pH至8~10后,加入到步骤1)所得的混合物中,搅拌反应,反应完毕后,离心去除上清液,得到活化荧光乳胶微球;

其中,所述表面活性剂含有聚乙二醇单月桂酸酯和硬脂酸钠,二者的重量比为0.5~5:1。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述表面活性剂还含有椰油酰基谷氨酸三乙醇胺盐,聚乙二醇单月桂酸酯、硬脂酸钠和椰油酰基谷氨酸三乙醇胺盐的重量比为0.5~5:1:2~4。

3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述表面活性剂为聚乙二醇单月桂酸酯、硬脂酸钠和椰油酰基谷氨酸三乙醇胺盐重量比为2:1:3的混合物。

4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述表面活性剂与所述氨基表面的荧光乳胶微球的质量比为500~2000:1。

5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤1)和步骤2)中所述的缓冲溶液为碳酸缓冲液;步骤2)中的搅拌反应时间为2~4小时,温度为20~30℃;氨基表面的荧光乳胶微球为氨基聚苯乙烯荧光微球。

6.权利要求1~5任一项所述的制备方法得到的25-羟基维生素D荧光免疫层析试纸条用活化荧光乳胶微球。

7.权利要求6所述的25-羟基维生素D荧光免疫层析试纸条用活化荧光乳胶微球的标记物工作液的制备方法,其特征在于,取25-羟基维生素D荧光免疫层析试纸条用活化荧光乳胶微球分散于微球缓冲液中,得到标记物工作液;表面活化的荧光乳胶微球在标记物工作液中所占的比例为0.5~2wt%;

其中,微球缓冲液的制备方法为:将BSA、生物防腐剂、雷米邦A和甜菜碱溶于0.01M、pH7.4的磷酸缓冲液中。

8.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于, BSA、生物防腐剂、雷米邦A和甜菜碱在所述微球缓冲液中的浓度均为0.1wt%。

9.25-羟基维生素D荧光免疫层析试纸条的标记物垫的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

1)活化荧光乳胶微球标记的兔IgG的制备:取权利要求7或8所述制备方法得到的标记物工作液,离心,弃上清液后,用标记缓冲液复溶,并且同时加入碳二亚胺和兔IgG,搅拌反应,然后离心,弃上清液,最后用标记稀释液复溶;

2)活化荧光乳胶微球标记的标记用鼠抗人25-羟基维生素D单克隆抗体的制备方法:取权利要求7或8所述制备方法得到的标记物工作液,离心,弃上清液后用标记缓冲液复溶,并且同时加入碳二亚胺和标记用鼠抗人25-羟基维生素D单克隆抗体,搅拌反应,搅拌,然后离心,弃上清液,最后用标记稀释液复溶;

3)取步骤1)所得分散液和步骤2)所得分散液,混合,喷涂于玻璃纤维之上,烘干;

所述标记缓冲液的配方为:碳酸钠4.33g、碳酸氢钠2.96g,溶于1000mL水中;所述标记稀释液的配方为:柠檬酸三钠7.33g、柠檬酸4.44g、氢氧化钠1g,溶于1000mL水中。

10.一种25-羟基维生素D荧光免疫层析试纸条,其特征在于,包括权利要求9所述的标记物垫、包被垫和吸收垫,其中所述标记物垫搭接于包被垫的一端上,吸收垫搭接于包被垫的另一端上,包被垫上设有质控线和检测线,质控线上包被有羊抗兔IgG的抗体,检测线上包被有25-羟基维生素D完全抗原。

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