本发明属于食品分析技术领域，涉及一种检测果蔬中赤霉素残留的快速前处理方法。
背景技术：
赤霉素（gibberellic acid）又名赤霉素GA3、九二○、奇宝，是一种应用广泛的植物激素类农药。美国、日本等国规定，植物源性食品中赤霉素最高残留限量（MRL）为0.2 mg/kg。我国还未制定该物质的残留限量标准。
目前，赤霉素的标准检测方法主要是液相色谱法-质谱/质谱法（如SN/T 4257-2015 出口食品中抗倒酯、脱叶磷、坐果安、赤霉素农药残留量的测定；SN/T 0350-2012 出口水果中赤霉素残留量的测定；DB22/T 1677-2012 豆芽中赤霉素残留量的测定）。这类方法由于使用了先进的仪器，检测结果具有极高的精密度和准确度，但都存在对样本中目标物的分离、提取、浓缩等前处理步骤繁琐、耗时的缺点，不仅影响测定结果的精密度和准确度，而且不利于大批量样本的检测。
目前，赤霉素的前处理方法主要是液液萃取法和固相萃取（Solid-Phase Extraction, SPE）法。液液萃取法由于操作繁琐、耗时费力、消耗大量溶剂污染环境、回收率较低等缺陷，不能满足现代检测工作的需要，但在实际工作中仍然被应用。例如，“SN/T 0350-2012 出口水果中赤霉素残留量的测定”中样本的前处理就是以乙腈为溶剂从水果中提取赤霉素，然后用乙酸乙酯对乙腈提取液进行液液分配净化处理，最后用液相色谱-质谱/质谱法进行检测和确证，方法的低限为10μg/kg，回收率为70.0%-106.0%。固相萃取是近年来发展较快的一种样品前处理技术，该技术可以有效提高测定的回收率而被广泛应用。用C18柱进行赤霉素的前处理净化在目前应用广泛，有研究者用液液萃取结合固相萃取分离纯化蔬菜样品中的赤霉素，得到的检出限为0.5 mg/kg；另有研究者用C18小柱萃取番茄样品中的赤霉素，可有效除去基质干扰物，加标回收率达到88.45%-95.90%。但总体而言，目前国内外赤霉素分析检测仍然存在前处理步骤繁琐、耗时等缺点。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种检测果蔬中赤霉素的前处理方法，可以加快赤霉素测定的前处理速度，进而全面提高该农药分析检测的速度，有助于推动我国农药检测方法朝快而准的方向发展。
为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种检测果蔬中赤霉素的快速前处理方法，包括以下步骤：
（1）将果蔬样本的可食用部分打碎成匀浆；
（2）取步骤（1）所得匀浆，加入体积分数为85%的甲醇水溶液，超声波处理，抽滤，滤液在水浴加热条件下用氮气吹至近干，再用体积分数为5%的甲醇水溶液稀释并定容；
（3）取步骤（2）所得溶液，加至已活化的C18固相萃取柱中，用体积比为40: 60的甲醇-水混合溶剂洗脱，洗脱液在水浴加热条件下用氮气吹至近干，再用甲醇稀释并定容，过滤，滤液作为供试品溶液。
优选的，步骤（2）是取步骤（1）所得匀浆，按料液比为1g: 4.5mL加入体积分数为85%的甲醇水溶液，在功率为128 w的条件下超声波处理45分钟，抽滤，滤液在45℃水浴加热条件下用氮气吹至近干，再用体积分数为5%的甲醇水溶液稀释并定容。
优选的，步骤（3）是取步骤（2）所得溶液，加至已活化的C18固相萃取柱中，用体积比为40: 60的甲醇-水混合溶剂洗脱，洗脱液在45℃水浴加热条件下用氮气吹至近干，再用甲醇稀释并定容，过孔径为0.45μm的微孔滤膜，滤液作为供试品溶液。
优选的，C18固相萃取柱经再生处理后可以重复使用，所述再生处理方法为：取用过的C18固相萃取柱，先用体积比为80:20的乙腈-四氢呋喃混合溶剂作洗脱剂反复洗涤，再用甲醇与纯水交替淋洗。
本发明的有益效果在于：本发明提供了一种检测果蔬中赤霉素的快速前处理方法，可以加快赤霉素测定的前处理速度，进而全面提高该农药分析检测的速度。采用本发明方法，果蔬样本经过超声波处理后过C18固相萃取柱，所得供试品溶液可以直接用于高效液相色谱或液相色谱-质谱测定赤霉素含量，样本前处理时间不超过60分钟，用时短；而且，C18固相萃取柱经再生处理后可以重复使用2次，回收率保证在80%以上，大大降低了样本前处理的成本。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例1：蔬菜中赤霉素的测定（高效液相色谱法）
色谱条件：色谱柱为C18柱（5 μm，4.6 mm×250 mm），流动相为甲醇-体积分数为0.15%的甲酸水溶液（体积比为55: 45），流速为0.6 mL/min，柱温为40℃，进样量为5.0 μL，检测波长为206 nm；
供试品溶液的制备：（1）将蔬菜去蒂、籽、皮，水洗整理，用洁净的毛巾或滤纸吸干表面水分，切小，用组织捣碎机或食品料理机打碎成匀浆；（2）称取步骤（1）所得匀浆10 g置100 mL蓝盖玻璃瓶中，按料液比（g: mL）=1:4.5加入体积分数为85%的甲醇水溶液，旋紧玻璃瓶盖后将玻璃瓶放入超声波清洗机中，在超声功率为128 w的条件下处理45 min，抽滤，取滤液1.0 mL置试管中，将试管放入氮吹仪，调节氮吹仪温度为45℃，用氮气吹试管至其中溶液近干，再加入体积分数为5%的甲醇水溶液定容至1.0 mL；（3）取步骤（2）所得溶液1.0 mL，加至已活化的C18固相萃取柱中（活化方法为：取洁净的C18固相萃取柱，先沿柱壁慢慢加入1.0 mL甲醇，必须保持柱表面平整，不能使柱中有气泡或者缝隙，弃去流出液，再向柱中加入1.0 mL纯水，弃去流出液，即得），用甲醇-水（体积比为40: 60）3.0 mL洗脱，收集洗脱液置试管中，将试管放入氮吹仪，调节氮吹仪温度为45℃，用氮气吹试管至其中溶液近干，再加入甲醇定容至1.0 mL，过孔径为0.45μm的微孔滤膜，滤液作为供试品溶液；
对照品溶液的制备：取赤霉素标准品，精密称定，用甲醇溶解制得对照品溶液；
测定：精密量取供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，另精密量取对照品溶液注入液相色谱仪，同法测定；按外标法以峰面积计算供试品中赤霉素的浓度。
结果：赤霉素平均保留时间为7.9703 min；标准曲线的线性回归方程为y =13068x-2640.2，相关系数r =0.9998，式中x为赤霉素的浓度（μg/mL），y为峰面积；该标准曲线的线性范围为0~100 μg/mL，检出限为0.5 μg/mL（S/N=3）。
取生菜、青椒、黄瓜、番茄、黄豆芽5种蔬菜，按前述方法分别制备供试品溶液；每种蔬菜供试品溶液取3份，分别添加0.1 mg、0.5 mg、1.0 mg赤霉素标准品，照前述色谱条件测定赤霉素的浓度，分别计算低、中、高3个水平的加标回收率及相对标准偏差（RSD），结果如表1所示。
表1 市售蔬菜中赤霉素残留量
实施例2：水果中赤霉素的测定（高效液相色谱法）
色谱条件：色谱柱为C18柱（5 μm，4.6 mm×250 mm），流动相为甲醇-体积分数为0.15%的甲酸水溶液（体积比为55: 45），流速为0.6 mL/min，柱温为40℃，进样量为5.0 μL，检测波长为206 nm；
供试品溶液的制备：（1）将水果用水洗净，用洁净的毛巾或滤纸吸干表面水分，去蒂、皮、核，切小，用组织捣碎机或食品料理机打碎成匀浆；（2）称取步骤（1）所得匀浆10 g置100 mL蓝盖玻璃瓶中，按料液比（g: mL）=1:4.5加入体积分数为85%的甲醇水溶液，旋紧玻璃瓶盖后将玻璃瓶放入超声波清洗机中，在超声功率为128 w的条件下处理45 min，抽滤，取滤液1.0 mL置试管中，将试管放入氮吹仪，调节氮吹仪温度为45℃，用氮气吹试管至其中溶液近干，再加入体积分数为5%的甲醇水溶液定容至1.0 mL；（3）取步骤（2）所得溶液1.0 mL，加至已活化的C18固相萃取柱中（活化方法为：取洁净的C18固相萃取柱，先沿柱壁慢慢加入1.0 mL甲醇，必须保持柱表面平整，不能使柱中有气泡或者缝隙，弃去流出液，再向柱中加入1.0 mL纯水，弃去流出液，即得），用甲醇-水(体积比为40: 60) 3.0 mL洗脱，收集洗脱液置试管中，将试管放入氮吹仪，调节氮吹仪温度为45℃，用氮气吹试管至其中溶液近干，再加入甲醇定容至1.0 mL，过孔径为0.45μm的微孔滤膜，滤液作为供试品溶液；
对照品溶液的制备：取赤霉素标准品，精密称定，用甲醇溶解制得对照品溶液；
测定：精密量取供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，另精密量取对照品溶液注入液相色谱仪，同法测定；按外标法以峰面积计算供试品中赤霉素的浓度。
结果：赤霉素平均保留时间为7.9703 min；标准曲线的线性回归方程为y =13068x-2640.2，相关系数r =0.9998，式中x为赤霉素的浓度（μg/mL），y为峰面积；该标准曲线的线性范围为0~100 μg/mL，检出限为0.5 μg/mL（S/N=3）。
取梨、苹果、葡萄、李子、水果番茄5种水果，按前述方法分别制备供试品溶液；每种水果供试品溶液取3份，分别添加0.1 mg、0.5 mg、1.0 mg赤霉素标准品，照前述色谱条件测定赤霉素的浓度，分别计算低、中、高3个水平的加标回收率及RSD，结果如表2所示。
表2 市售水果中赤霉素残留量
实施例3：C18固相萃取柱的再生
取用过的C18固相萃取柱，用乙腈-四氢呋喃（体积比=80:20）作洗脱剂，每次取3.0 mL洗涤，连续洗涤3次，再用3.0 mL甲醇与3.0 mL纯水交替淋洗2次，密封保存备用。经过上述再生处理的C18固相萃取柱可以重复使用2次，赤霉素测定的回收率保证在80%以上。临用前，需将该固相萃取柱分别用1.0 mL甲醇和1.0 mL纯水进行活化。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。