一种阿卡如药材及其制剂的检测方法与流程

本发明属于中药材检测领域，具体涉及一种阿卡如药材及其制剂的检测方法。
背景技术：
：阿卡如为木犀科丁香属植物紫丁香SyringaoblataLindl.的主干、枝干或根，又名藏沉香、阿嘎如、阿尔加、阿嘎尔，为经典藏药材，已有几百年的用药历史，在《晶珠本草》、《藏药志》中均有记载，主要在甘肃、青海、西藏、四川的传统藏药制剂中使用，主要被藏医用于治疗头痛、健忘、失眠、烦躁、妇女诸症等症。紫丁香(SyringaoblataLindl.)为木犀科丁香属植物，该植物约有19种，我国有15种。紫丁香的地域分布广泛，多分布于辽宁、北京、河北、陕西、河南等地。根据《新华本草纲要》和《长白山植物药志》的记载，紫丁香具有治疗急性黄疸型肝炎、腹泻、肝炎等的作用；此外，紫丁香的叶早已被民间用作抗菌消炎、清肝利胆的药物。紫丁香的不同部位所含的化学成分有较大的差别，如：紫丁香叶中所含的化学成分以环状环烯醚萜类化合物为主，含量最多的是丁香苦苷及其苷元类；紫丁香树皮中所含的化学成分以裂环环烯醚萜类和对羟基苯乙醇类为主，含量最多的是橄榄苦苷和丁香苷；紫丁香花蕾中所含的化学成分以三萜酸为主，含量最多的齐墩果酸和乌苏酸，仅含少量的环烯醚萜类(包括环状和裂环类)；紫丁香果壳中所含的化学成分含量最多的主要也是齐墩果酸和乌苏酸，并且含有较多的木脂素类成分；紫丁香籽中所含的化学成分以环状环烯醚萜为主。现有技术中，有关紫丁香主干、枝干和根中的所含的化学成分报道较少。《中国药典》(2010年版)中公开了：桃金娘科植物丁香EugeniacaryophμllataThunb.的干燥花蕾—丁香的鉴别方法和含量测定方法。然而，一方面由于阿卡如所含的化学成分的报道较少，另一方面由于丁香和阿卡如所含化学成分的种类和各化学成分的含量的差别，申请人通过研究发现，现有的丁香的鉴别方法和含量测定方法并不能用于阿卡如的质量检测和质量控制中，不利于从整体上对阿卡如药材及其药物制剂的质量进行有效控制，难以确保该药材及其药物制剂的药效或疗效，从而不利于该药材使用的安全性和稳定性。因此，建立一种阿卡如药材及其药物制剂的质量检测及质量控制的方法具有重要的意义。技术实现要素：为此，本发明所要解决的技术问题在于现有技术中没有针对阿卡如药材及其药物制剂的检测方法，不利于从整体上对阿卡如药材及其药物制剂的质量进行有效控制，难以确保该药材及其药物制剂的药效或疗效，从而不利于该药材使用的安全性和稳定性，从而提出一种阿卡如药材及其药物制剂的质量检测及质量控制的方法。为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案来实现的：本发明提供一种阿卡如药材的检测方法，该检测方法包括如下对开环异落叶松脂酚的含量测定步骤：取阿卡如药材0.1～10重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为55％～95％的甲醇水溶液5-50体积份，称定重量，加热回流提取25～60min，放冷，再称定重量，用体积分数为55％～95％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取开环异落叶松脂酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成含开环异落叶松脂酚0.00005～0.0005g/mL的溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法，以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂，以体积比30～55：45～70的甲醇-水为流动相，流速为0.5～1.5mL/min，检测波长为275～285nm，柱温为25～40℃，理论板数按开环异落叶松脂酚峰计算应不低于5000；分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5～20μL，注入液相色谱仪，测定；所述重量份与体积份的关系为g/mL。优选地，本发明上述阿卡如药材的检测方法，所述对开环异落叶松脂酚的含量测定步骤包括：取阿卡如药材0.5～1.5重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为60％～80％的甲醇水溶液20-30体积份，称定重量，加热回流提取30～60min，放冷，再称定重量，用体积分数为60％～80％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取开环异落叶松脂酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成含开环异落叶松脂酚0.0001～0.0002g/mL的溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法，以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂，以体积比40～45：55～60的甲醇-水为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为280nm，柱温为30℃，理论板数按开环异落叶松脂酚峰计算应不低于5000；分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5～15μL，注入液相色谱仪，测定。进一步优选地，本发明上述阿卡如药材的检测方法，所述对开环异落叶松脂酚的含量测定步骤包括：取阿卡如药材1重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为70％的甲醇水溶液25体积份，称定重量，加热回流提取30min，放冷，再称定重量，用体积分数为70％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取开环异落叶松脂酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成含开环异落叶松脂酚0.00014g/mL的溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法，以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂，以体积比42：58的甲醇-水为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为280nm，柱温为30℃，理论板数按开环异落叶松脂酚峰计算应不低于5000；分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。进一步优选地，本发明上述阿卡如药材的检测方法，该检测方法还包括如下显微鉴别和/或TLC鉴别的步骤：A、显微鉴别取阿卡如药材，研磨成粉末，置于显微镜下观察其形态特征；B、TLC鉴别取阿卡如药材0.1～10重量份，加甲醇1～50体积份，超声提取10～40min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加0.5～2体积份甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取阿卡如对照药材0.1～10重量份，加甲醇1-50体积份，超声提取10～40min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加0.5～2体积份甲醇使溶解，作为对照品溶液；照薄层色谱法，分别吸取供试品溶液和对照品溶液各5～15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2～15：0.5～5的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积比为1％～8％的香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视；所述重量份与体积份的关系为g/mL。进一步优选地，本发明上述阿卡如药材的检测方法，所述TLC鉴别的步骤包括：取阿卡如药材0.5～1.5重量份，加甲醇15～25体积份，超声提取25～35min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加0.5～1.5体积份甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取阿卡如对照药材0.5～1.5重量份，加甲醇15～25体积份，超声提取25～35min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加0.5～1.5体积份甲醇使溶解，作为对照品溶液；照薄层色谱法，分别吸取供试品溶液和对照品溶液各2～8μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8～12：0.5～1.5的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积比为4％～6％的香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。进一步优选地，本发明上述阿卡如药材的检测方法，所述TLC鉴别的步骤包括：取阿卡如药材1重量份，加甲醇20体积份，超声提取30min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加1体积份甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取阿卡如对照药材1重量份，加甲醇20体积份，超声提取30min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加1体积份甲醇使溶解，作为对照品溶液；照薄层色谱法，分别吸取供试品溶液和对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10：1的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积比为5％的香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。进一步优选地，本发明上述阿卡如药材的检测方法，所述超声提取的条件为：功率500W，频率53kHz。本发明还提供一种阿卡如药材的药物制剂的检测方法，该检测方法包括上述阿卡如药材的检测方法。优选地，本发明上述阿卡如药材的药物制剂的检测方法，所述对开环异落叶松脂酚的含量测定步骤中，还包括如下制备阴性对照品溶液和对阴性对照品溶液进行测定的步骤：取所述阴性对照品0.1～10重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为55％～95％的甲醇水溶液5-50体积份，称定重量，加热回流提取25～60min，放冷，再称定重量，用体积分数为55％～95％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为阴性对照品溶液；精密吸取阴性对照品溶液5～20μL，注入液相色谱仪，测定；所述TLC鉴别的步骤中，还包括如下制备阴性对照品溶液和对阴性对照品溶液进行鉴别的步骤：取阴性对照品0.1～10重量份，加甲醇1～50体积份，超声提取10～40min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加0.5～2体积份甲醇使溶解，作为阴性对照品溶液；照薄层色谱法，吸取阴性对照品溶液5～15μL，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2～15：0.5～5的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积比为1％～8％的香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。进一步优选地，本发明上述阿卡如药材的药物制剂的检测方法，所述对开环异落叶松脂酚的含量测定步骤中，还包括如下制备阴性对照品溶液和对阴性对照品溶液进行测定的步骤：取阴性对照品0.5～1.5重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为60％～80％的甲醇水溶液20-30体积份，称定重量，加热回流提取30～60min，放冷，再称定重量，用体积分数为60％～80％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为阴性对照品溶液；精密吸取阴性对照品溶液5～15μL，注入液相色谱仪，测定；所述TLC鉴别的步骤中，还包括如下制备阴性对照品溶液和对阴性对照品溶液进行鉴别的步骤：取阴性对照品0.5～1.5重量份，加甲醇15～25体积份，超声提取25～35min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加0.5～1.5体积份甲醇使溶解，作为阴性对照品溶液；照薄层色谱法，吸取阴性对照品溶液2～8μL，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8～12：0.5～1.5的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积比为4％～6％的香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。进一步优选地，本发明上述阿卡如药材的药物制剂的检测方法，所述对开环异落叶松脂酚的含量测定步骤中，还包括如下制备阴性对照品溶液和对阴性对照品溶液进行测定的步骤：取阴性对照品1重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为70％的甲醇水溶液25体积份，称定重量，加热回流提取30min，放冷，再称定重量，用体积分数为70％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为阴性对照品溶液；精密吸取阴性对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定。所述TLC鉴别的步骤中，还包括如下制备阴性对照品溶液和对阴性对照品溶液进行鉴别的步骤：取阴性对照品1重量份，加甲醇20体积份，超声提取30min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加1体积份甲醇使溶解，作为阴性对照品溶液；照薄层色谱法，吸取阴性对照品溶液5μL，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10：1的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积比为5％的香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。进一步优选地，本发明上述阿卡如药材的药物制剂的检测方法，所述阿卡如药材的药物制剂的制备工艺为：将所述阿卡如药材加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂、胶囊剂、散剂、合剂、丸剂、颗粒剂、溶液剂、糖浆剂、煎膏剂、巴布剂、软膏剂或贴膏剂；所述阴性对照品的制备工艺为：按照所述阿卡如药材的药物制剂的处方比例及其制备工艺，制备不含阿卡如药材的阴性对照品。所述常规辅料为：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素纳等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：PEG6000、PEG4000、虫蜡等。本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：(1)本发明所述阿卡如药材及其药物制剂的检测方法，通过HPLC法对开环异落叶松脂酚的含量进行测定，该方法不仅专属性强，而且测定结果准确、重现性好，具有准确、简便、灵敏、快速的特点，有利于对该药材及其药物制剂的质量进行有效控制，确保该药材及其药物制剂的药效或疗效，有利于提高该药材及其药物制剂使用的有效性和安全性；(2)本发明所述阿卡如药材及其药物制剂的检测方法，进一步通过显微鉴别和/或TLC鉴别来鉴别阿卡如药材及其药物制剂的真伪，有利于从整体上对该药材及其药物制剂的质量进行全面有效控制，进一步确保该药材及其药物制剂的药效或疗效，从而进一步提高该药材及其药物制剂使用的有效性和安全性。附图说明为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中：图1(a)、1(b)、1(c)分别是本发明实验例1中对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品的HPLC色谱图；图2是本发明实验例1中开环异落叶松脂酚的峰面积与对照品浓度的线性关系图；图3是本发明实验例3中供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品的TLC色谱图；其中，1表示的为供试品溶液，2表示的为对照品溶液，3表示的为阴性对照品溶液。具体实施方式本发明以下实施例和实验例中，(1)阿卡如药材的药物制剂的制备工艺为：将阿卡如药材加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂、胶囊剂、散剂、合剂、丸剂、颗粒剂、溶液剂、糖浆剂、煎膏剂、巴布剂、软膏剂或贴膏剂；(2)阴性对照品的制备工艺为：按照阿卡如药材的药物制剂的处方比例及其制备工艺，制备不含阿卡如药材的阴性对照品。实施例1阿卡如药材中开环异落叶松脂酚的含量测定本实施例阿卡如药材中开环异落叶松脂酚的含量测定包括如下步骤：取阿卡如药材1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为70％的甲醇水溶液25mL，称定重量，加热回流提取30min，放冷，再称定重量，用体积分数为70％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取开环异落叶松脂酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成含开环异落叶松脂酚0.00014g/mL的溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法，以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂，以体积比42：58的甲醇-水为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为280nm，柱温为30℃，理论板数按开环异落叶松脂酚峰计算应不低于5000；分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。实施例2阿卡如药材中开环异落叶松脂酚的含量测定本实施例阿卡如药材中开环异落叶松脂酚的含量测定包括如下步骤：取阿卡如药材0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为80％的甲醇水溶液20mL，称定重量，加热回流提取60min，放冷，再称定重量，用体积分数为80％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取开环异落叶松脂酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成含开环异落叶松脂酚0.0001g/mL的溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法，以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂，以体积比45：55的甲醇-水为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为280nm，柱温为30℃，理论板数按开环异落叶松脂酚峰计算应不低于5000；分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定。实施例3阿卡如药材中开环异落叶松脂酚的含量测定本实施例阿卡如药材中开环异落叶松脂酚的含量测定包括如下步骤：取阿卡如药材1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为60％的甲醇水溶液30mL，称定重量，加热回流提取45min，放冷，再称定重量，用体积分数为60％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取开环异落叶松脂酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成含开环异落叶松脂酚0.0002g/mL的溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法，以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂，以体积比40：60的甲醇-水为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为280nm，柱温为30℃，理论板数按开环异落叶松脂酚峰计算应不低于5000；分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各15μL，注入液相色谱仪，测定。实施例4阿卡如药材中开环异落叶松脂酚的含量测定本实施例阿卡如药材中开环异落叶松脂酚的含量测定包括如下步骤：取阿卡如药材0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为95％的甲醇水溶液5mL，称定重量，加热回流提取25min，放冷，再称定重量，用体积分数为95％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取开环异落叶松脂酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成含开环异落叶松脂酚0.00005g/mL的溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法，以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂，以体积比30：70的甲醇-水为流动相，流速为0.5mL/min，检测波长为285nm，柱温为40℃，理论板数按开环异落叶松脂酚峰计算应不低于5000；分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定。实施例5阿卡如药材中开环异落叶松脂酚的含量测定本实施例阿卡如药材中开环异落叶松脂酚的含量测定包括如下步骤：取阿卡如药材10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为55％的甲醇水溶液50mL，称定重量，加热回流提取55min，放冷，再称定重量，用体积分数为55％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取开环异落叶松脂酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成含开环异落叶松脂酚0.0005g/mL的溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法，以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂，以体积比55：45的甲醇-水为流动相，流速为1.5mL/min，检测波长为275nm，柱温为25℃，理论板数按开环异落叶松脂酚峰计算应不低于5000；分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定。实施例6阿卡如药材的显微鉴别本实施例阿卡如药材的显微鉴别包括如下步骤：取阿卡如药材，研磨成粉末，置于显微镜下观察其形态特征。阿卡如药材的显微镜下的形态特征为：木纤维多角形，直径20～45μm；纤维成束或单个散在，有的纤维束周围细胞含方晶，形成晶纤维，有的纤维束内含棕色树脂。实施例7阿卡如药材的TLC鉴别本实施例阿卡如药材的TLC鉴别包括如下步骤：取阿卡如药材1g，加甲醇20mL，超声提取30min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取阿卡如对照药材1g，加甲醇20mL，超声提取30min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为对照品溶液；照薄层色谱法，分别吸取供试品溶液和对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10：1的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积比为5％的香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。阿卡如药材的供试品溶液的色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。实施例8阿卡如药材的TLC鉴别取阿卡如药材0.5g，加甲醇25mL，超声提取25min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加1.5mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取阿卡如对照药材0.5g，加甲醇25mL，超声提取25min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加1.5mL甲醇使溶解，作为对照品溶液；照薄层色谱法，分别吸取供试品溶液和对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为12：0.5的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积比为4％的香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。实施例9阿卡如药材的TLC鉴别取阿卡如药材1.5g，加甲醇15mL，超声提取35min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加0.5mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取阿卡如对照药材1.5g，加甲醇15mL，超声提取25min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加0.5mL甲醇使溶解，作为对照品溶液；照薄层色谱法，分别吸取供试品溶液和对照品溶液各8μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8：1.5的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积比为6％的香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。实施例10阿卡如药材的TLC鉴别本实施例阿卡如药材的TLC鉴别包括如下步骤：取阿卡如药材0.1g，加甲醇1mL，超声提取40min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加0.5mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取阿卡如对照药材0.1g，加甲醇1mL，超声提取40min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加0.5mL甲醇使溶解，作为对照品溶液；照薄层色谱法，分别吸取供试品溶液和对照品溶液各15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2：5的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积比为1％的香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。实施例11阿卡如药材的TLC鉴别本实施例阿卡如药材的TLC鉴别包括如下步骤：取阿卡如药材10g，加甲醇50mL，超声提取10min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加2mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取阿卡如对照药材10g，加甲醇50mL，超声提取10min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加2mL甲醇使溶解，作为对照品溶液；照薄层色谱法，分别吸取供试品溶液和对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15：0.5的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积比为8％的香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。实施例12阿卡如药材的片剂中开环异落叶松脂酚的含量测定本实施例阿卡如药材的片剂中开环异落叶松脂酚的含量测定包括如下步骤：取阿卡如药材的片剂1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为70％的甲醇水溶液25mL，称定重量，加热回流提取30min，放冷，再称定重量，用体积分数为70％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取开环异落叶松脂酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成含开环异落叶松脂酚0.00014g/mL的溶液，作为对照品溶液；取阴性对照品1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为70％的甲醇水溶液25mL，称定重量，加热回流提取30min，放冷，再称定重量，用体积分数为70％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为阴性对照品溶液；照高效液相色谱法，以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂，以体积比42：58的甲醇-水为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为280nm，柱温为30℃，理论板数按开环异落叶松脂酚峰计算应不低于5000；分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。实施例13阿卡如药材的胶囊剂中开环异落叶松脂酚的含量测定本实施例阿卡如药材的胶囊剂中开环异落叶松脂酚的含量测定包括如下步骤：取阿卡如药材的胶囊剂0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为80％的甲醇水溶液20mL，称定重量，加热回流提取60min，放冷，再称定重量，用体积分数为80％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取开环异落叶松脂酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成含开环异落叶松脂酚0.0001g/mL的溶液，作为对照品溶液；取阴性对照品0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为80％的甲醇水溶液20mL，称定重量，加热回流提取60min，放冷，再称定重量，用体积分数为80％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为阴性对照品溶液；照高效液相色谱法，以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂，以体积比45：55的甲醇-水为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为280nm，柱温为30℃，理论板数按开环异落叶松脂酚峰计算应不低于5000；分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定。实施例14阿卡如药材的散剂中开环异落叶松脂酚的含量测定本实施例阿卡如药材的散剂中开环异落叶松脂酚的含量测定包括如下步骤：取阿卡如药材的散剂1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为60％的甲醇水溶液30mL，称定重量，加热回流提取45min，放冷，再称定重量，用体积分数为60％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取开环异落叶松脂酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成含开环异落叶松脂酚0.0002g/mL的溶液，作为对照品溶液；取阴性对照品1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为60％的甲醇水溶液30mL，称定重量，加热回流提取45min，放冷，再称定重量，用体积分数为60％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为阴性对照品溶液；照高效液相色谱法，以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂，以体积比40：60的甲醇-水为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为280nm，柱温为30℃，理论板数按开环异落叶松脂酚峰计算应不低于5000；分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液各15μL，注入液相色谱仪，测定。实施例15阿卡如药材的丸剂的显微鉴别本实施例阿卡如药材的丸剂的显微鉴别包括如下步骤：取阿卡如药材，研磨成粉末，置于显微镜下观察其形态特征。阿卡如药材的丸剂的显微镜下的形态特征为：木纤维多角形，直径20～45μm；纤维成束或单个散在，有的纤维束周围细胞含方晶，形成晶纤维，有的纤维束内含棕色树脂。实施例16阿卡如药材的颗粒剂的TLC鉴别本实施例阿卡如药材的颗粒剂的TLC鉴别包括如下步骤：取阿卡如药材的颗粒剂1g，加甲醇20mL，超声提取30min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取阿卡如对照药材1g，加甲醇20mL，超声提取30min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为对照品溶液；取阴性对照品1g，加甲醇20mL，超声提取30min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为阴性对照品溶液；照薄层色谱法，分别吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10：1的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积比为5％的香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。阿卡如药材的颗粒剂的供试品溶液的色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，在与阴性对照品溶液色谱相应的位置上不显相同颜色的斑点。实施例17阿卡如药材的颗粒剂的TLC鉴别取阿卡如药材0.5g，加甲醇25mL，超声提取25min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加1.5mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取阿卡如对照药材0.5g，加甲醇25mL，超声提取25min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加1.5mL甲醇使溶解，作为对照品溶液；取阴性对照品0.5g，加甲醇25mL，超声提取25min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加1.5mL体积份甲醇使溶解，作为阴性对照品溶液；照薄层色谱法，分别吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为12：0.5的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积比为4％的香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。实施例18阿卡如药材的颗粒剂的TLC鉴别取阿卡如药材1.5g，加甲醇15mL，超声提取35min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加0.5mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取阿卡如对照药材1.5g，加甲醇15mL，超声提取25min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加0.5mL甲醇使溶解，作为对照品溶液；取阴性对照品1.5g，加甲醇15mL，超声提取25min，滤过，置水浴上蒸干，残渣加1.5mL体积份甲醇使溶解，作为阴性对照品溶液；照薄层色谱法，分别吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液各8μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8：1.5的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量体积比为6％的香草醛浓硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。对比例1本对比例与实施例1的区别仅在于：制备供试品溶液的步骤中，提取溶剂为甲醇；其余实验条件和操作步骤均与实施例1相同。对比例2本对比例与实施例1的区别仅在于：制备供试品溶液的步骤中，提取溶剂为体积分数为50％的甲醇水溶液；其余实验条件和操作步骤均与实施例1相同。对比例3本对比例与实施例1的区别仅在于：制备供试品溶液的步骤中，提取溶剂为乙醇；其余实验条件和操作步骤均与实施例1相同。对比例4本对比例与实施例1的区别仅在于：制备供试品溶液的步骤中，提取溶剂为体积分数为50％的乙醇水溶液；其余实验条件和操作步骤均与实施例1相同。对比例5本对比例与实施例1的区别仅在于：制备供试品溶液的步骤中，提取溶剂为体积分数为70％的乙醇水溶液；其余实验条件和操作步骤均与实施例1相同。对比例6本对比例与实施例1的区别仅在于：制备供试品溶液的步骤中，提取方法为超声提取；其余实验条件和操作步骤均与实施例1相同。对比例7本对比例与实施例1的区别仅在于：制备供试品溶液的步骤中，提取方法为振摇提取；其余实验条件和操作步骤均与实施例1相同。对比例8本对比例与实施例1的区别仅在于：以体积比40：60的甲醇-0.01％磷酸水溶液为流动相；其余实验条件和操作步骤均与实施例1相同。对比例9本对比例与实施例1的区别仅在于：以体积比40：60的甲醇-0.05％甲酸水溶液为流动相；其余实验条件和操作步骤均与实施例1相同。对比例10本对比例与实施例1的区别仅在于：以体积比25：75的乙腈-水为流动相；其余实验条件和操作步骤均与实施例1相同。对比例11本对比例与实施例1的区别仅在于：制备供试品溶液的步骤中，提取时间为20min；其余实验条件和操作步骤均与实施例1相同。对比例12本对比例与实施例7的区别仅在于：制备供试品溶液的步骤中，提取方法为振摇提取；其余实验条件和操作步骤均与实施例7相同。对比例13本对比例与实施例7的区别仅在于：制备供试品溶液的步骤中，提取溶剂为乙醇；其余实验条件和操作步骤均与实施例7相同。对比例14本对比例与实施例7的区别仅在于：制备供试品溶液的步骤中，提取溶剂为三氯甲烷；其余实验条件和操作步骤均与实施例7相同。对比例15本对比例与实施例7的区别仅在于：制备供试品溶液的步骤中，提取溶剂为乙酸乙酯；其余实验条件和操作步骤均与实施例7相同。对比例16本对比例与实施例7的区别仅在于：以体积比为10：1的三氯甲烷-正己烷为展开剂；其余实验条件和操作步骤均与实施例7相同。对比例17本对比例与实施例7的区别仅在于：以体积比为17：3的石油醚-乙酸乙酯为展开剂；其余实验条件和操作步骤均与实施例7相同。实验例1阿卡如药材及其制剂中开环异落叶松脂酚的含量测定方法的方法学考察1、仪器与试药Aglient1100高效液相色谱仪(美国Agilent公司)：G1314A紫外可见检测器，G1314A二元泵，Agilent1100色谱工作站；SK8200HP超声波清洗器(功率250W，频率40kHz)(上海科导超声仪器有限公司)；开环异落叶松脂酚对照品：批号ABS-00019102-010，纯度99.4％，购自美国中草药(Chromadex)标准品；阿卡如药材(由甘肃省中药现代制药工程研究院有限公司提供)；甲醇(色谱纯)；甲醇(分析纯)。2、实验方法2.1溶液的配制对照品溶液的制备：取开环异落叶松脂酚适量，加甲醇制成每lmL含开环异落叶松脂酚对照品140μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取阿卡如药材及其制剂粉末1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25mL，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为阿卡如供试品溶液；阴性对照品溶液的制备：按处方比例及制备工艺，配置不含阿卡如的阴性对照品，并按上述供试品溶液的配制方法制成阴性对照品溶液。2.2色谱条件以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂；色谱柱：SynergiTM4μmPolar-RP，4.6mm×250mm，菲罗门色谱柱；流动相：甲醇-水(体积比为42:58)；流速：1.0mL/min；检测波长：280nm；柱温：30℃。2.3色谱系统适用性试验在以上色谱条件下，开环异落叶松脂酚与其余杂质峰分离效果较好，理论塔板数按开环异落叶松脂酚计算应不低于5000。2.4阴性干扰实验精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10μL注入液相色谱仪中。对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品的HPLC色谱图如图1所示。由图1可知，在与对照品溶液色谱峰保留时间相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰出现，阴性对照品溶液在此波长下无吸收，因此对阿卡如药材及其制剂中阿卡如所含开环异落叶松脂酚的含量测定无干扰。2.5线性关系考察取开环异落叶松脂酚对照品12.98mg，置50mL容量瓶中，摇匀，作为储备液；精密吸取上述储备液1mL、2mL、4mL、6mL、8mL、10mL置25mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别配制成25.96、51.92、103.84、155.76、207.68、259.60g/mL的系列浓度；精密量取10μL，分别注入液相色谱仪，测定峰面积。阿卡如药材及其制剂中所含开环异落叶松脂酚的浓度与峰面积的关系如表1所示，开环异落叶松脂酚的峰面积与对照品浓度的线性关系图如图2所示。由表1和图2可知，开环异落叶松脂酚在25.96～259.6g/mL之间内峰面积与对照品的浓度呈良好的线性关系，其回归方程为Y＝8.5501X+8.4724，R2＝0.9999。表1阿卡如药材及其制剂中所含开环异落叶松脂酚的浓度与峰面积的关系2.6精密度实验取阿卡如药材及其制剂的粉末1.0g，按“2.1溶液的配制”项下的“供试品溶液的制备”制备供试品溶液，按2.2色谱条件连续进样6次，计算RSD值。具体实验结果如表2所示。表2精密度实验结果由表2可知，阿卡如药材及其制剂中所含开环异落叶松脂酚的含量测定方法的精密度良好，RSD值为1.24％。2.7重复性实验取阿卡如药材及其制剂粉末6份，每份均为1.0g，按2.1溶液的配制项下的“供试品溶液的制备”制备，按2.2色谱条件下连续进样，计算RSD值。具体实验结果如表3所示。表3重复性实验结果由表3可知，对同一批样品取样6份进行测定，开环异落叶松脂酚含量测定结果重现性较好，RSD值为1.42％。2.8稳定性实验取阿卡如药材及其制剂粉末1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25mL，称定重量，加热回流提取30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；在供试品溶液制备后的第0、2、4、6、8、12小时分别进样，计算RSD值。具体实验结果如表4所示。表4稳定性实验结果由表4可知，供试品溶液在12小时内测定，开环异落叶松脂酚含量测定结果稳定，阿卡如药材及其制剂中所含开环异落叶松脂酚的含量测定方法的稳定性较好，RSD值为0.93％。2.9加样回收率实验精密称取已知含量的阿卡如药材及其制剂样品(含量为3.3356mg/g)9份，每份约0.5g，精密称定，置150mL的具塞锥形瓶中，分别精密加入浓度为0.2596mg/mL的开环异落叶松脂酚对照品溶液5.2mL、6.5mL、7.8mL，即按已知含量的80％、100％、120％分别加入开环异落叶松脂酚对照品溶液，按供试品溶液制备方法制备，计算加样回收率。具体实验结果如表5所示。表5加样回收率实验结果由表5可知，阿卡如药材及其制剂中所含开环异落叶松脂酚的含量测定方法的加样回收率高，RSD值为1.57％。3、样品含量测定实验取不同来源的阿卡如药材及其制剂粉末约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25mL，密塞，称定重量，加热回流提取30分钟，取出，放冷，再称定量，用70％甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。具体实验结果如表6所示。表6样品含量测定实验结果由表6可知，阿卡如药材及其制剂中开环异落叶松脂酚的含量在0.0306％～0.3224％的范围内，平均含量为0.1053％。整体考虑不同产地的阿卡如药材中开环异落叶松脂酚的含量存在一定差异，故暂定本品按干燥品计，含开环异落叶松脂酚(C20H26O6)不得少于0.05％。4、实验结论阿卡如药材及其制剂中所含开环异落叶松脂酚的含量测定方法的精密度良好，重复性较好，稳定性较好，加样回收率高。实验例2不同实验条件的阿卡如药材中开环异落叶松脂酚的含量测定方法的效果的对比实验1、仪器与试剂电子天平、锥形瓶、容量瓶、恒温水浴锅、超声波清洗、调速多用震荡器、移液管、注射器、烧杯、漏斗、滤纸、滤头、滤膜、高效液相色谱仪；开环异落叶松脂酚对照品：批号ABS-00019102-010，纯度99.4％，购自美国中草药(Chromadex)标准品；甲醇、乙腈、乙醇、甲酸、磷酸、水。2、实验方法取同一批次的阿卡如药材，分别按照实施例1、对比例1-11的方法测定开环异落叶松脂酚的含量，然后对实施例1、对比例1-11所得的HPLC色谱图进行分析。3、实验结果具体实验结果如表7所示。表7不同实验条件的开环异落叶松脂酚的含量测定方法的效果的对比实验的实验结果编号开环异落叶松脂酚峰的峰型和分离度开环异落叶松脂酚的测定含量实施例1峰型好，分离度好测定含量最高对比例1峰型差测定含量比实施例1低对比例2拖尾，RSD值大测定含量比实施例1低对比例3分离度差测定含量比实施例1低对比例4分离度差，RSD值大，保留时间漂移—对比例5分离度差，保留时间漂移—对比例6峰型好，分离度好测定含量比实施例1低对比例7峰型好，分离度好测定含量比实施例1低对比例8峰型好，分离度好测定含量与实施例1相同对比例9峰型不好，分离度好测定含量与实施例1相同对比例10峰型不好，分离度差测定含量与实施例1相同对比例11峰型好，分离度好，RSD值大测定含量比实施例1低由表7可知，(1)实施例1的阿卡如药材中开环异落叶松脂酚的含量测定方法的HPLC色谱图中，开环异落叶松脂酚峰的峰型好、分离度好，开环异落叶松脂酚的测定含量最高，效果最好。实验例3不同实验条件的阿卡如药材及其制剂的TLC鉴别方法的效果的对比实验1、仪器与试剂电子秤、具塞锥形瓶、移液管、超声波提取仪、滤纸、点样器、硅胶G板、层析缸、紫外灯、喷雾瓶；甲醇、乙醇、氯仿、乙酸乙酯、石油醚、正己烷、丙酮。2、实验方法取同一批次的阿卡如药材，分别按照实施例7、对比例12-17的方法鉴别阿卡如药材，然后对实施例7、对比例12-17所得的TLC色谱图进行分析。取阿卡如药材的颗粒剂，按照实施例16的方法进行TLC鉴别，对所得的TLC色谱图进行分析。3、实验结果阿卡如药材的颗粒剂的供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液的TLC色谱图如图3所示。由图3可知，阿卡如药材的颗粒剂的供试品溶液的色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，在与阴性对照品溶液色谱相应的位置上不显相同颜色的斑点。不同实验条件的阿卡如药材的TLC鉴别方法的效果的对比实验的实验结果如表8所示。表8不同实验条件的阿卡如药材的TLC鉴别方法的效果的对比实验的实验结果编号TLC色谱图中阿卡如药材的Rf值、斑点颜色及分离度实施例7Rf值适中，斑点明显，分离度好对比例12Rf值适中，斑点不清晰对比例13Rf值适中，分离度差对比例14Rf值适高，斑点不明显对比例15Rf值适低，斑点颜色较浅对比例16Rf值偏低，斑点明显对比例17Rf值偏高，斑点明显由表8可知，实施例7的阿卡如药材的TLC鉴别方法的色谱图中，Rf值适中，斑点颜色明显，分离度好，效果最好。显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。当前第1页1 2 3