一种植物源性饲料多抗霉素的检测方法与流程

文档序号:11232953
本发明属于农药残留检测领域,特别涉及一种植物源性饲料多抗霉素的检测方法。
背景技术
:近年来,随着高毒高残留的化学农药的禁用,绿色环保低毒低残留的生物农药越来越受到农民的青睐。其中多抗霉素具有抑制病菌产孢和病斑扩大的作用,广泛应用于防治黄瓜霜霉病,小麦白粉病,玉米黑穗病,人参黑斑病,苹果和梨灰斑病以及水稻纹枯病等多种病害。但是目前多抗霉素对人畜的毒性研究相对滞后,毒理作用情况尚不明确。而被多抗霉素污染的水稻、玉米和小麦等作物作为饲料,被猪、牛和羊等食用,会蓄积在体内,通过食物链进入到人体内,会造成一定的危害。目前多抗霉素测定方法有微生物法、毛细管电泳-电致化学发光法和高效液相色谱法,国内目前采用较多的是毛细管电泳-电致化学发光法和高效液相色谱法。而这些测定方法是用来测定发酵产生的一系列的多抗霉素代谢物,灵敏度低,耗时长,精密度差。技术实现要素:本发明所要解决的技术问题是提供一种植物源性饲料多抗霉素的检测方法,该方法通过采用材料的前处理、提取和净化、定性分析测定、定量测定和结果计算验证等步骤对植物源饲料中是否含有多抗霉素进行检测,具有鉴定准确性高、定位准确的优点,在我国多抗霉素的检测中具有代表性,具有良好的应用前景。本发明的一种植物源性饲料多抗霉素的检测方法,包括:(1)取植物源性饲料样品,磨碎、过筛;然后(按质量体积比2.5g:20ml)加入甲酸乙腈溶液,混匀,超声波提取、离心、吹干,再用氨水溶液溶解,得到待净化样品;(2)将萃取柱依次用乙腈、水预淋洗后,将上述待净化样品转入萃取柱中,弃去上样液,用冰乙酸乙腈水溶液洗脱,收集洗脱液,吹干,定容;(3)采用液相色谱-串联质谱进行定性分析和定量测定,最后通过计算确定样品中多抗霉素的含量。所述步骤(1)中的甲酸乙腈溶液的浓度为3%(甲酸:乙腈=3:97)-8%(甲酸:乙腈=8:92);氨水溶液的浓度为1%(氨水:水=1:99)-3%(氨水:水=3:97)。所述步骤(1)中的离心速度为5000r/min,离心时间为3-7min。所述步骤(2)中的冰乙酸乙腈溶液的浓度为5%(冰乙酸:乙腈=5:95)-9%(冰乙酸:乙腈=9:91)。所述步骤(2)中的萃取柱为MAX固相萃取柱。所述步骤(3)中定性分析时样品中待测物质保留时间与标准溶液保留时间的偏差不超过标准溶液保留时间的±3%。所述步骤(3)中定量测定采用基质标准工作溶液绘制标准曲线,并保证测试样品中多抗霉素的响应值在仪器的线性范围内。所述步骤(3)中的计算公式如下:式中:C:样品中对应的多抗霉素的浓度,单位为μg/mL;V:定容体积,单位为mL;f:稀释倍数;m:试样质量,单位为g。在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。有益效果本发明通过采用材料的前处理、提取和净化、定性分析测定、定量测定和结果计算验证等步骤对植物源饲料中是否含有多抗霉素进行检测,具有鉴定准确性高、定位准确的优点,在我国多抗霉素的检测中具有代表性,具有良好的应用前景。附图说明图1为0.1mg/L多抗霉素色谱图。具体实施方式下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解,在阅读了本发明讲授的内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1取河北、山东、福建等地植物源性饲料:(1)材料的前处理;取有代表性饲料样品500g,四分法缩减至少100g,磨碎,过0.9mm孔径样品筛,混匀装入密闭容器中,避光低温保存备用;(2)提取和净化提取:称取2.5g试样,置入50.0mL离心管中,加入20mL4%甲酸乙腈溶液,涡旋混匀1min,置于超声波提取30min,然后5000r/min离心5min,取8mL上清液,在50℃下氮气仪吹至近干,用1mL的2.5%氨水溶液溶解提取的样品并涡旋30s,待净化;净化:将混合阳离子固相萃取柱依次用3.0mL乙腈、水预淋洗后,将上述待净化样品转入柱中,弃去上样液,用10mL6%冰乙酸乙腈水溶液洗脱,收集洗脱液于20mL玻璃试管中,再用氮气仪吹干,用1mL乙腈水溶液定容,待测。(3)定性分析测定:采用液相色谱-串联质谱测定:色谱和质谱条件:色谱柱:HypersilGOLDAmino柱,30mm×3.0mm(i.d.),1.9μm或相当规格色谱柱;流动相及梯度洗脱条件见表1:表1流动相及梯度洗脱条件时间/min流速/(mL/min)流动相A(1%甲酸)/%流动相B(甲醇)/%00.2515850.50.2515851.00.2550504.00.2550505.00.2515856.00.251585柱温:40℃;进样体积:5μL;离子源:ESI;扫描方式:负离子扫描;检测方式:多反应监测;电喷雾电压:4500V;雾化气流速:15.0L/min;干燥气流速:3.0L/min;加热模块温度:400℃;DL管温度:250℃。电离模式、定性离子对、定量离子对、保留时间及碰撞能量参考值见表2:表2电离模式、定性离子对、定量离子对、保留时间及碰撞能量参考值在相同实验条件下,样品中待测物质保留时间与标准溶液保留时间的偏差不超过标准溶液保留时间的±3%,且样品中各组分的定性离子的相对丰度与质量浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较,偏差不超过表3规定的范围,则可判定样品中存在对应的待测物。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差(%)相对离子丰度>5020~5010~20<10允许的相对偏差±20±25±30±50(4)定量测定本标准中液相色谱-串联质谱采用外标-标准曲线法定量测定。为减少基质对定量测定的影响,定量用标准溶液应采用基质标准工作溶液绘制标准曲线,并保证测试样品中多抗霉素的响应值在仪器的线性范围内。上述色谱和质谱条件下,多抗霉素的标准溶液的多反应监测图谱见图1。(5)结果计算验证试样中多抗霉素的含量(X)以质量分数表示(mg/kg),用下面公式计算:式中:C:试样液中对应的多抗霉素B的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);V:定容体积,单位为毫升(mL);f:稀释倍数;m:试样质量,单位为克(g)。在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。经上述步骤(1)~(5)的检测,确定所检测植物源饲料中多抗霉素含量。结果如下:当前第1页1 2 3 
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