娑罗子的质量检测方法与流程

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娑罗子的质量检测方法与流程

本发明涉及药材的质量检测方法,特别是娑罗子的质量检测方法。



背景技术:

娑罗子为七叶树科七叶树属植物天师栗aesculuswilsoniirehd.、浙江七叶树aesculuschinensisbge.var.chekiangensis(huetfang)fang或七叶树aesculuschinensisbge.的干燥成熟种子,收载于2015年版《中国药典》。娑罗子中主要含有三萜皂苷、鞣质、黄酮、甾醇、有机酸等类别的化学成分,其中的三萜皂苷也称为七叶皂苷,是娑罗子的主要活性成分,其钠盐七叶皂苷钠已应用于临床,用于治疗脑水肿、创伤或手术所致的肿胀,也用于静脉回流障碍性疾病。

娑罗子基原植物较多,不同产地的娑罗子的质量参差不齐,导致娑罗子药材和制剂的质量不稳定,影响临床疗效。2015年版《中国药典》仅记载了娑罗子中的七叶皂苷a的含量测定方法。目前针对娑罗子中指标成分的含量测定常用方法为hplc法。文献《hplc法测定娑罗子中4种皂苷类成分的含量》(魏锋等,药物分析杂志,2004,24(4):400-402)公开了hplc法测定娑罗子中七叶皂苷a、七叶皂苷b、异七叶皂苷a、异七叶皂苷b的含量的方法。该方法中,供试品溶液的制备方法是采用甲醇提取后,再用石油醚进行脱脂处理,以除去其中干扰性的油脂类成分,因而耗时较长。文献《娑罗子中三萜皂苷成分的hplc定量分析》(郭杰等,中草药,2007,38(5):767-770)公开了利用hplc法同时测定七叶树皂苷a、b和异七叶树皂苷a、b的含量的方法。其中供试品溶液的制备方法为,将娑罗子采用水饱和的正丁醇超声提取,除去溶剂,加甲醇溶解,再上d-101大孔树脂柱,依次用水和95%乙醇洗脱,95%乙醇洗脱液除去溶剂,再用甲醇溶解,得到供试品溶液。该方法供试品溶液处理步骤繁杂,耗时较长。此外,上述方法进行高效液相色谱检测方法时,为了得到良好的组分分离度,保留时间均较长。

因此,需要一种简单、耗时短的娑罗子质量检测方法。



技术实现要素:

本发明的目的在于提供一种娑罗子的质量检测方法,该方法简单、准确、快速。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的。

一种娑罗子的质量检测方法,包括如下步骤:

(1)供试品溶液的制备步骤:将娑罗子用溶剂提取,得到提取液;将所述提取液用微孔滤膜滤过,得到供试品溶液;所述溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液或乙腈水溶液;

(2)对照品溶液的制备步骤:将七叶皂苷a和七叶皂苷b对照品用溶剂溶解,再用微孔滤膜滤过,得到对照品溶液;所述溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液或乙腈水溶液;

(3)检测步骤:将所述供试品溶液和对照品溶液分别注入超快速液相色谱仪,分别得到液相色谱图;其中,流动相由乙腈(a)和含量为0.05vol%的三氟乙酸水溶液(b)组成,采用如下梯度洗脱方式洗脱:

0→t1,流动相中乙腈的体积百分比为a1;

t2→t3,流动相中乙腈的体积百分比由a2增加至a3;

其中,t1为4~8min;t2为t1+0.01~t1+0.05min;t3为12~18min;a1为33%~37%;a2为38%~39%;a3为40%~41%;

其中,步骤(1)和步骤(2)的顺序不分先后。

本发明中,优选地,步骤(1)的提取方法选自浸渍法、超声提取法或加热回流提取法。

本发明中,优选地,步骤(1)的溶剂为50~100vol%的甲醇水溶液;步骤(2)的溶剂为50~100vol%的甲醇水溶液。

本发明中,优选地,步骤(1)的提取方法为超声提取法,提取时间为15~90分钟;且溶剂的用量为娑罗子重量的15~80倍。

本发明中,优选地,步骤(1)中,将娑罗子用40~50倍量的65~80vol%的甲醇水溶超声提取20~30分钟,得到提取液;将所述提取液用微孔滤膜滤过,得到所述供试品溶液。

本发明中,优选地,步骤(2)中,所述七叶皂苷a和七叶皂苷b对照品为同时含有七叶皂苷a和七叶皂苷b的对照品,所述对照品溶液为同时含有七叶皂苷a和七叶皂苷b的混合对照品溶液。

本发明中,优选地,步骤(2)的对照品溶液中,七叶皂苷a的浓度为200~800μg/ml;且七叶皂苷b的浓度为200~800μg/ml。

本发明中,优选地,步骤(3)中,t1为6min,t2为t1+0.01min,且t3为15min;a1为35%,a2为39%,且a3为40%。

本发明中,优选地,步骤(3)中,超快速液相色谱仪的检测器采用蒸发光散射检测器或二极管阵列检测器;检测波长为220nm;流动相的流速为0.1~0.3ml/min;且柱温为25~35℃。

本发明中,优选地,步骤(3)中,超快速液相色谱仪的检测器采用二极管阵列检测器;流动相的流速为0.2ml/min;且柱温为30℃。

本发明的娑罗子的质量检测方法,供试品溶液处理方法简单且耗时短,节约溶剂;能够有效检测娑罗子中的七叶皂苷a和七叶皂苷b,具有良好的分离度,方法准确,重现性好,且更省时。

附图说明

图1为实施例1的对照品溶液的快速液相色谱图。

图2为实施例1的供试品溶液的快速液相色谱图。

附图标记如下:

1为七叶皂苷a的吸收峰;2为七叶皂苷b的吸收峰。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明,但本发明的保护范围并不限于此。

本发明中,所述娑罗子为七叶树科七叶树属植物天师栗aesculuswilsoniirehd.、浙江七叶树aesculuschinensisbge.var.chekiangensis(huetfang)fang或七叶树aesculuschinensisbge.的干燥成熟种子。

本发明中,所述超快速液相色谱是指ultrafastliquidchromatograph,简称uflc。

本发明中,所述的100vol%甲醇水溶液是指甲醇,即不含水的甲醇溶剂。

本发明的娑罗子的质量检测方法,包括(1)供试品溶液的制备步骤;(2)对照品溶液的制备步骤;和(3)检测步骤。其中,步骤(1)和步骤(2)的顺序不分先后。

<供试品溶液的制备>

本发明的供试品溶液的制备步骤,是将娑罗子用溶剂提取,得到提取液;将所述提取液用微孔滤膜滤过,得到供试品溶液。所述溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液或乙腈水溶液中的一种或几种。根据本发明的一个实施方式,所述溶剂为50~100vol%的甲醇水溶液,优选为60~100vol%的甲醇水溶液,更优选为65~80vol%的甲醇水溶液,再优选为70vol%的甲醇水溶液。根据本发明的另一个实施方式,所述溶剂为甲醇。采用上述溶剂能够将娑罗子中的七叶皂苷类组分充分提取出来,且得到uflc色谱图中组分的峰形更好。

本发明中,所述的提取方法可以采用浸渍法、超声提取法或加热回流提取法,优选为超声提取法。采用超声提取法省时,操作简单,且提取率更高。超声提取的时间为15~90分钟,优选为15~60分钟,更优选为20~30分钟。本申请的发明人发现,当超声提取20~30分钟时,已能够将娑罗子中的七叶皂苷类组分充分提取出来。

本发明中,优选地,所述溶剂的用量为娑罗子重量的15~80倍,优选为30~60倍,更优选为40~50倍,再优选为50倍。采用这样的溶剂用量,得到的供试品溶液的峰面积更合适。

优选地,所述供试品溶液的制备步骤为:将娑罗子用40~50倍量的65~80vol%的甲醇水溶超声提取20~30分钟,得到提取液;将所述提取液用微孔滤膜滤过,得到供试品溶液。

根据本发明的一个实施方式,所述供试品溶液的制备步骤为:将娑罗子用50倍量的70%的甲醇水溶超声提取30分钟,得到提取液;将所述提取液用微孔滤膜滤过,得到供试品溶液。优选地,所述微孔滤膜为孔径为0.22μm的微孔滤膜。

本发明的供试品溶液的处理方法无需复杂的脱脂处理或树脂除杂处理,操作简单,处理时间短,且节约溶剂。

<对照品溶液的制备>

本发明的对照品溶液的制备步骤,是将七叶皂苷a和七叶皂苷b对照品用溶剂溶解,再用微孔滤膜滤过,得到对照品溶液。所述溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液或乙腈水溶液中的一种或几种。根据本发明的一个实施方式,所述溶剂为50~100vol%的甲醇水溶液,优选为60~100vol%的甲醇水溶液,更优选为65~80vol%的甲醇水溶液,再优选为70vol%的甲醇水溶液。

本发明中,所述的对照品溶液可以是将上述七叶皂苷a和七叶皂苷b对照品分别溶解在单独的溶剂中,制成每份仅包含一种对照品的对照品溶液;也可以是将同时含有上述七叶皂苷a和七叶皂苷b的对照品(例如七叶皂苷钠对照品)溶解在同一溶剂中,制成混合对照品溶液。根据本发明优选的实施方式,所述的对照品溶液是将含有七叶皂苷a和七叶皂苷b的对照品溶解于同一溶剂中制备而成的混合对照品溶液。本发明中,优选地,所述混合对照品溶液中,七叶皂苷a的浓度为200~800μg/ml,更优选为300~700μg/ml,再优选为400~600μg/ml;七叶皂苷b的浓度为200~800μg/ml,更优选为300~700μg/ml,再优选为400~600μg/ml。优选地,所述微孔滤膜为孔径为0.22μm的微孔滤膜。

<检测方法>

本发明的检测方法,将所述供试品溶液和对照品溶液分别注入超快速液相色谱仪(uflc),得到超快速液相色谱图。本发明的检测方法中,色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂,可以采用市售的色谱柱,例如capcellcorec18(2.1mmi.d×150mm,2.7μm),superc18(3.0mmi.d×150mm,2.5μm)或shim-packxr-odsiicolumn等。

本发明的检测方法中,流动相由乙腈(a)和含量为0.05vol%的三氟乙酸水溶液(b)组成;当a组分的体积含量确定后,余量即为b组分。本发明采用如下梯度洗脱方式将七叶皂苷a和七叶皂苷b分离,且分离度良好:

0→t1,流动相中乙腈的体积百分比为a1;

t2→t3,流动相中乙腈的体积百分比由a2增加至a3;

其中,

t1为4~8min,优选为5~7min,更优选为6min;

t2为t1+0.01~t1+0.05min,优选为t1+0.01min;

t3为12~18min,优选为13~17min,更优选为15min;

a1为33%~37%,更优选为34%~36%,优选为35%;

a2为38%~39%,更优选为39%;

a3为40%~41%,更优选为40%。

根据本发明的一个实施方式,所述流动相采用如下洗脱方式洗脱:0→6min,流动相中乙腈的体积百分比为35%;6.01→15min,流动相中乙腈的体积百分比由39%增加至40%。

本发明的检测方法中,超快速液相色谱仪的检测器采用蒸发光散射检测器(elsd)或二极管阵列检测器(dad)。优选地,所述检测器采用dad检测器,其检测信号更强,且操作更简单。本发明的检测方法中,优选地,检测波长为220nm。本发明的检测方法中,优选地,流动相的流速为0.1~0.3ml/min,优选为0.2ml/min。优选地,柱温为25~35℃,并优选为30℃。采用本发明的检测条件,供试品溶液中的大部分杂质组分能够在5min之前、甚至在2.5min之前洗脱出来,且七叶皂苷类成分的吸收峰附近很少或几乎没有杂质峰,具有良好的分离效果;整个洗脱时间在15min以内,耗时短。根据本发明的一个优选的实施方式,所述检测条件为检测器为二极管阵列检测器,检测波长为220nm,流动相的流速为0.2ml/min,柱温为30℃。

本发明采用超快速液相检测方法,能够有效检测娑罗子中的七叶皂苷a和七叶皂苷b,具有良好的分离度,方法准确,重现性好,且更省时。本发明的检测方法对于供试品溶液中的杂质

以下通过实施例来具体阐述本发明的质量检测方法。其中采用的快速液相色谱仪为岛津超快速液相色谱仪lc-20adxr(二极管阵列检测器,二元高压梯度泵,真空脱气机,柱温箱,自动进样器;labsolutions色谱工作站)。色谱柱采用shim-packxr-odsii(2.0mmi.d×75mm)。甲醇为色谱纯,水为超纯水,甲酸为分析纯,三氟乙酸为化学纯。七叶皂苷钠对照品购自中国食品药品检定研究院,其中含七叶皂苷a38.8wt%,七叶皂苷b28.3wt%。实施例1的娑罗子药材来自湖北;实施例2~11的娑罗子药材来自湖北、山东等地。

实施例1-娑罗子的质量检测

(1)供试品溶液的制备:取娑罗子约0.5g,精密称定,置于50ml离心管中,精密加入70vol%甲醇25ml,密封,摇匀,称定重量。超声处理(功率500w,频率40khz)30min,放冷,再称定重量,用70vol%甲醇补足失重,摇匀,静置,取上清液,用微孔滤膜(0.22μm)滤过,取续滤液,得到供试品溶液。

(2)对照品溶液的制备:精密称取七叶皂苷钠对照品2.99g,置于2ml容量瓶中,加入70vol%甲醇适量,超声溶解,用70%甲醇定容至刻度,摇匀,得到混合对照品溶液。其中七叶皂苷a的浓度为580.060μg/ml,七叶皂苷b的浓度为423.085μg/ml。

(3)检测方法:将供试品溶液和对照品溶液分别注入快速液相色谱仪,分别得到高效液相色谱图。进样量:10μl,流动相为乙腈(a)-0.05%三氟乙酸水溶液(b)梯度洗脱,0→6min,流动相中乙腈的体积百分比为35%,6.01→15min,流动相中乙腈的体积百分比由39%增加至40%;柱温:30℃;检测波长:220nm;流动相的流速为0.2ml/min;七叶皂苷a和七叶皂苷b的理论塔板数分别为9032和8065。

上述对照品溶液和供试品溶液的超快速液相色谱图分别见图1和图2。七叶皂苷a和七叶皂苷b具有良好的分离度,方法准确,重现性好,且更省时。

实施例2-12-娑罗子的质量检测

采用实施例1的方法检测另外11批娑罗子药材,所得超快速液相色谱图与图1和图2相似。

本发明并不限于上述实施方式,在不背离本发明的实质内容的情况下,本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。

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